刘伟伟
- 作品数：5 被引量：24H指数：2
- 供职机构：浙江大学医学院附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 病毒灭活处理对2019新型冠状病毒核酸检测弱阳性结果的影响被引量：21
- 2020年
- 目的:探讨病毒灭活处理对2019新型冠状病毒核酸检测弱阳性结果的影响。方法:回顾性研究浙江大学医学院附属第二医院2020年1至2月2019新型冠状病毒不同浓度的3例实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)核酸检测阳性患者的鼻咽拭子标本。采用不灭活处理和56℃30 min水浴、56℃60 min干浴及60℃30 min干浴3组灭活处理方式对鼻咽拭子保存液标本进行病毒灭活,提取RNA,然后3种商品化新型冠状病毒核酸实时荧光RT-PCR试剂分别进行检测,用循环阈值(Ct)评价病毒灭活对2019新型冠状病毒核酸检测结果影响。结果:灭活前ORF1ab基因Ct值分别为23.28±0.28、25.25±0.25、28.93±0.44、32.06±0.47、35.20±0.38、32.89±0.38、36.24±0.23、33.30±0.46,灭活后ORF1ab基因Ct值分别为灭活组1:23.60±0.20、27.29±0.30、31.83±0.51、37.41±0.46,灭活组2:24.25±0.34、27.18±0.42、31.84±0.61、34.99±1.01、34.89±0.45,灭活组3∶23.37±0.17、26.89±0.52、32.05±0.50;灭活前N基因Ct值分别为24.38±0.09、26.64±0.11、30.35±0.12、33.29±0.33、36.93±0.11、34.50±0.12、35.63±0.12,灭活后N基因Ct值分别为灭活组1:24.66±0.11、28.52±0.14、32.71±0.14、37.00±0.13,灭活组2:25.41±0.10、28.79±0.15、33.29±0.28,灭活组3:23.37±0.11、28.68±0.11、33.54±0.13、37.18±0.23。灭活前后扩增Ct值比较差异无统计学意义(ORF1ab基因:t=-1.416;N基因:t=-1.379,P均>0.05),3组灭活处理组间Ct值差异也无统计学意义(ORF1ab基因:t=-0.460;N基因:t=-0.132,P均>0.05)。但不同稀释倍数下的灭活组(1,2,3)与未灭活组Ct值比较,未灭活组和灭活组(1,2,3)Ct值差异有统计学意义。10×稀释:ORF1ab Ct值:未灭活组:25.25±0.25,灭活组1,2,3分别为27.29±0.30、27.18±0.42和26.89±0.52,t(ORF1ab)=-7.327,P<0.01;N基因Ct值:未灭活组:26.64±0.11,灭活组1,2,3分别为28.52±0.14、28.79±0.15和28.68±0.11,t(N)=-19.340,P<0.01。100×稀释:ORF1abCt值:未灭活组:28.93±0.44,灭活组1,2,3分别为31.83±0.
- 段秀枝王旭楚俞攀刘伟伟李翔张乐乐张巩唐沪强陈勤吴先国陶志华
- 关键词：冠状病毒属病毒灭活核酸类实时聚合酶链反应
- RP11-79H23.3通过抑制miR-410表达调控前列腺癌发生和发展
- 2024年
- 目的探讨长链非编码RNA RP11-79H23.3在前列腺癌发生和发展中的作用机制。方法利用lnCAR数据库分析前列腺癌组织和癌旁组织中RP11-79H23.3的相对表达水平。通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测前列腺癌细胞系C4-2B、LNCaP、DU-145、22Rv1中RP11-79H23.3的表达水平。以22Rv1为研究目标,利用克隆形成实验及划痕实验检测过表达RP11-79H23.3对22Rv1细胞增殖和迁移的作用。利用LncRNome和lncACTdb数据库预测RP11-79H23.3的下游基因和结合序列。利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析前列腺癌组织中RP11-79H23.3与miR-410表达的相关性。通过双荧光素酶报告基因实验确认RP11-79H23.3和miR-410的结合靶点。采用RT-qPCR法检测RP11-79H23.3对miR-410表达的影响。采用Western blotting法检测RP11-79H23.3对22Rv1细胞中磷酸酶和张力蛋白同源物/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PTEN/AKT/mTOR)信号通路蛋白表达的影响。计量资料以均数±标准差(±s)表示,两组间比较采用配对样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果与癌旁组织相比,RP11-79H23.3在前列腺癌组织中呈低表达(P<0.01)。与正常前列腺上皮细胞RWPE-1相比,RP11-79H23.3在前列腺癌细胞系C4-2B、LNCaP、DU-145、22Rv1中均呈低表达(P<0.05)。对照组和RP11-79H23.3组22Rv1细胞中RP11-79H23.3的相对表达水平分别为1.02±0.30和8.94±1.95,与对照组相比,22Rv1细胞成功过表达RP11-79H23.3(t=4.04,P<0.01)。对照组和RP11-79H23.3组22Rv1细胞克隆形成数分别为(166.10±18.35)个和(35.03±6.98)个,与对照组相比,过表达RP11-79H23.3可抑制22Rv1细胞的增殖(t=6.67,P<0.01)。对照组和RP11-79H23.3组22Rv1细胞迁移率分别为(67.40±6.29)%和(26.42±6.24)%,与对照组相比,过表达RP11-79H23.3可抑制22Rv1细胞迁移(t=5.71,P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,RP11-79H23.3直接与miR-410结合(t=6.20,P<0.01)。对照组和RP11-79H23.3组22Rv1细胞中miR-410
- 柯芹毛青陈小刚江伟刘伟伟柳永
- 关键词：前列腺肿瘤细胞增殖
- EphA3 is a potential biomarker for prognosis of prostate cancer treated with radical prostatectomy
- 目的 Eph receptor tyrosine kinase A3 (EphA3) expression has been found to be associated with progression and pro...
- 段秀枝许晓明尹彬彬洪波刘伟伟刘乾陶志华
- 文献传递
- 雄激素受体负向调节雄激素非依赖性前列腺癌细胞FN1和ZNF438基因表达的研究被引量：3
- 2015年
- 目的 验证FN1和ZNF438是否为雄激素非依赖性前列腺癌细胞雄激素受体靶基因,并探索雄激素受体对FN1和ZNF438基因的表达调节作用.方法 采用染色质免疫共沉淀-实时荧光定量PCR及琼脂糖凝胶电泳技术验证雄激素受体（AR）作用于FN1和ZNF438基因.用双氢睾酮（DHT）刺激LNCaP-AI细胞及慢病毒干扰LNCaP-AI细胞AR的表达,通过逆转录荧光定量PCR（RT-qPCR）和蛋白质免疫印迹（Western blot）分析FN1和ZNF438基因的表达情况.结果 AR-ChIP实验组所富集到的FN1和ZNF438基因分别为7.274±0.290和6.843±0.078,显著高于IgG-ChIP对照组的1.004±0.113和1.000±0.014,差异有统计学意义（t=34.91、128.377,均P＜0.05）.在双氢睾酮（DHT）刺激LNCaP-AI细胞后,FN1和ZNF438基因的mRNA及蛋白表达水平分别为0.434±0.050和0.069±0.042,显著低于对照组的1.000±0.016和1.025±0.277;差异有统计学意义（t=18.532、5.905,均P＜0.05）.而在慢病毒转染干扰LNCaP-AI细胞AR的表达后,FN1和ZNF438基因的mRNA及蛋白表达水平分别为17.579±4.415和1.895±0.424,显著高于对照组的1.028±0.445和1.041 ±0.190;差异有统计学意义（=6.461、3.184,均P＜0.05）.结论 FN1和ZNF438为雄激素非依赖性前列腺癌LNCaP-AI细胞雄激素受体负向调节的靶基因,可为进一步研究雄激素非依赖性前列腺癌细胞的生长发展机制提供新的研究思路.
- 俞攀尹彬彬刘春华程玥刘伟伟段秀枝廖昭平陈玉华王旭楚潘小艳陶志华
- 关键词：前列腺肿瘤受体
- 雄激素受体负向调节雄激素非依赖性前列腺癌细胞FN1和ZNF438基因表达的研究
- 目的:验证FN1和ZNF438是否为雄激素非依赖性前列腺癌细胞雄激素受体靶基因,并探索雄激素受体对FN1和ZNF438基因的表达调节作用。方法:采用染色质免疫共沉淀-实时荧光定量PCR及琼脂糖凝胶电泳技术验证雄激素受体(...
- 俞攀尹彬彬刘春华程玥刘伟伟段秀枝廖昭平陈玉华王旭楚潘小艳陶志华
- 关键词：前列腺肿瘤靶基因
- 文献传递
