马海涛
- 作品数：7 被引量：20H指数：3
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- mTOR信号通路在生精细胞发育中的作用
- 2016年
- 精子发生是指精原细胞经过一系列分裂分化演变为精子的过程,包括精原干细胞的增殖及其子细胞分化、精母细胞的减数分裂和精子形成三个阶段。许多研究表明mTOR信号通路参与精子发生的各个阶段。本文主要就mTOR信号通路在生精细胞发育的不同阶段中的作用做一综述。
- 夏静牛长敏马海涛申雪沂王建军郑英
- 关键词：哺乳动物雷帕霉素靶蛋白生精细胞信号通路精子发生
- 小鼠精子顶体形成相关基因研究进展被引量：4
- 2016年
- 精子变形是一个复杂的细胞分化和形态学变化过程,顶体形成是其中的一个步骤。顶体是精子头部的重要组成部分,其形成过程包含4个阶段:高尔基体阶段、顶帽阶段、顶体和成熟阶段,其每一步都受多种基因调控。高尔基体阶段的调控基因有GOPC、Hrb、SPATA16、PICK1、CK2α'等,顶帽阶段的调控基因有Fads2、syntaxin 2、Kdm3a及UBR7等;顶体及成熟阶段的调控基因有KIFC1、Rnf19a及DPY19L2等。这些基因的异常会影响核致密层以及顶体锚定体盘与核膜之间的连接,囊泡的融合及运输,最终影响男性的生育能力。本文着重对顶体形成各阶段相关基因的研究进展进行了综述。
- 牛长敏郭佳倩马海涛郑哲郑英
- 关键词：基因小鼠
- 兔抗小鼠含SET结构域(赖氨酸甲基转移酶)8(Setd8)多克隆抗体制备和应用被引量：8
- 2017年
- 目的在大肠杆菌表达小鼠含SET结构域(赖氨酸甲基转移酶)8(Setd8)蛋白并制备兔抗Setd8多克隆抗体。方法将p GADT7-Setd8质粒和p ET-30a载体分别双酶切后连接、转化和鉴定,构建p ET-30a-Setd8原核表达质粒。将p ET-30a-Setd8质粒转化到E.coli BL21中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,通过镍亲和层析柱进行蛋白纯化。应用纯化的Setd8蛋白免疫新西兰大白兔,获得Setd8多克隆抗体。利用ELISA、Western blot法及免疫组织化学染色法对所得多克隆抗体进行效价测定及特异性鉴定。结果应用限制性内切酶双酶切后电泳及序列测定法,成功构建的p ET-30a-Setd8重组质粒在大肠杆菌中IPTG诱导下能够高效表达重组Setd8蛋白。免疫获得的多克隆抗体经ELISA检测其抗体效价为1∶1 000 000,Western blot法结果显示制备的多克隆抗体能特异性识别细胞和组织中的Setd8蛋白,免疫组织化学染色法显示多克隆抗体识别的Setd8主要表达于成年小鼠睾丸组织中的精原细胞。结论成功获得较高纯度Setd8蛋白,制备的Setd8多克隆抗体具有较高反应性和特异性。
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- 关键词：多克隆抗体
- 雄性小鼠联会复合体的研究进展被引量：1
- 2016年
- 联会复合体（synaptonemal complex，SC）是同源染色体之间具有三级结构的阶梯状聚合亚蛋白复合体，大部分由减数分裂特异性蛋白组成，联会复合体的装配开始于第一次减数分裂前期早期。
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- 关键词：联会复合体减数分裂精子发生
- 小鼠Setd8截短片段真核表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2015年
- 目的构建小鼠Setd8第1-214aa的截短片段p CMV-HA-Setd8NO.214真核表达载体,并在293T细胞中验证其表达。方法利用PCR方法扩增出Setd8的截短片段Setd8NO.214基因片段,通过酶切将其定向插入到p CMV-HA载体中,构建真核表达质粒p CMV-HA-Setd8NO.214,通过限制性内切酶酶切和DNA测序鉴定正确后,应用脂质体转染法转染入293T细胞中,应用Western blot鉴定蛋白的表达。结果酶切电泳及测序结果证明,构建的真核表达质粒p CMAHA-Setd8NO.214序列正确无误,Western blot法证明了Setd8NO.214蛋白能够高效表达。结论成功构建了p CMV-HASetd8NO.214真核表达载体,并证明了其在真核细胞293T中的表达,为进一步研究Setd8在真核细胞中的功能提供了前提基础。
- 郭佳倩牛长敏马海涛马仕昆郑英
- 关键词：真核表达
- Stra8过表达精原细胞的细胞周期同步化方法的建立被引量：1
- 2017年
- 目的建立Stra8过表达精原细胞(Stra8-GC1)的细胞周期同步化方法,并应用流式细胞仪进行检测。方法 G1期同步化:应用血清剥夺方式分别培养Stra8-GC1 24h、36h、48h、60h、72h、84h和96h,收集细胞并应用流式细胞仪检测G1期细胞百分比;S期同步化:应用含有胸苷培养液培养Stra8-GC1 14~16h,更换正常培养基培养9h,再次加入胸苷培养14~16h,最后更换正常培养基分别培养0、3h,6h和9h,收集细胞并应用流式细胞仪检测S期细胞百分比;M期同步化:应用含有诺考达唑培养液分别培养Stra8-GC1 4h,8h和12h,收集细胞并应用流式细胞仪检测M期细胞百分比。结果血清剥夺处理72h,Stra8-GC1 G1期细胞百分比为60%~70%,显著高于对照组的31.73%(P<0.05);二次胸苷阻滞法处理以及第二次释放3h,Stra8-GC1 S期细胞百分比为60%~70%,显著高于对照组的38.50%(P<0.05);诺考达唑处理8h,Stra8-GC1 M期细胞百分比为90%以上,显著高于对照组的13.85%(P<0.05)。结论成功构建Stra8过表达细胞的细胞周期同步化方法,为后续Stra8的功能研究奠定了基础。
- 申雪沂郭佳倩牛长敏马海涛夏静夏蒙蒙王建军郑英
- 关键词：细胞周期同步化精原细胞
- 精子发生减数分裂过程中相关基因的研究进展被引量：5
- 2016年
- 精子发生是一个复杂的细胞分化过程,其中减数分裂又是最为特殊和关键的一步。在这一过程中一些基因的存在与否、表达水平以及与其他因子间的相互作用,对形成具有生育能力的成熟精子有着至关重要的作用。本文依据减数分裂过程中减数分裂启动、同源染色体联会、基因重组、同源染色体解联、染色体分离的顺序,对Stra8、Sycp3、Dmc1、Hspa1b、Rec8等相关基因的研究进展进行综述。
- 马海涛牛长敏郭佳倩郑英
- 关键词：精子发生减数分裂基因
