王海洋
- 作品数：4 被引量：17H指数：2
- 供职机构：安徽农业大学更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 安徽地区猪场猪流感和甲型H1N1/2009流感病毒的血清学调查
- 猪流感(Swine Influenza,SI)又称猪的流行性感冒，是猪流感病毒(Swine Influenza virus,SIV)导致的猪的一种急性、热性呼吸道传染病。目前SI仍然在世界各地区存在和流行。国内猪群流行的...
- 王海洋
- 关键词：猪流感甲型H1N1流感病毒抗体水平阳性率
- 猪鼻腔棉拭子中胸膜肺炎放线杆菌检测与分离方法的优化
- 2015年
- 为提高APP亚临床感染的核酸检出率和细菌分离率,通过检测3种PCR的敏感性和特异性,运用3种PCR方法分别检测母猪鼻腔棉拭子中APP核酸;并同时使用4种选择性培养基分离母猪鼻腔棉拭子中APP。结果显示,3种PCR的最低检测限度均为102 CFU,且除APP外与其他细菌不发生反应;dsb E-PCR方法的App核酸检出率(23.7%)显著高于oml A-PCR(8.1%)和Apx IVA-PCR(14.8%),三者符合率较高,分别为84.4%(dsb E/oml A-PCR)、91.1%(dsb E/Apx IVA-PCR)和93.3%(oml A/Apx IVA-PCR);m PPLO的APP分离率(11.9%)显著高于TSA(0.7%)、CA(5.2%)和BA(2.2%),四者符合率较高,分别为88.9%(m PPLO/TSA)、93.3%(m PPLO/CA)、90.37%(m PPLO/BA)、95.6%(TSA/CA)、98.5%(TSA/BA)和97.0%(CA/BA);dsb E-PCR检测结果与m PPLO分离结果的符合率较高(88.1%)。说明dsb E-PCR和m PPLO的检测分离效率最高,可综合2种方法,完善APP检测分离操作程序,为APP亚临床感染的诊断和治疗以及疫苗免疫提供科学依据。
- 孙裴施雷魏建忠耿照玉殷宗俊顾秋成王海洋李好磊郭志英李郁
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌PCR选择性培养基
- 刚地弓形虫529 bp重复序列环介导等温扩增检测方法的建立被引量：3
- 2016年
- 目的 建立高效检测刚地弓形虫（Toxoplama gondii）的环介导等温扩增（LAMP）方法，为弓形虫病诊断提供新的技术手段。 方法 采用在线引物设计软件Primer Explorer 4.0设计弓形虫529 bp基因LAMP扩增引物，用已构建的pMD-19T-529 bp重组质粒为模板，建立LAMP扩增反应，通过添加环引物、设置不同浓度的甜菜碱和MgSO4以及不同反应温度对扩增反应体系和反应条件进行优化。以猪、微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum）、猪等孢球虫（Isospora suis）的基因组DNA和超纯水为对照，pMD-19T-529 bp重组质粒为模板，分别进行优化后的LAMP和PCR扩增，评价LAMP方法的特异性。将pMD-19T-529 bp重组质粒梯度稀释为109~100 copies/ml，分别进行优化后的LAMP和PCR扩增，评价LAMP方法的灵敏性。 结果 设计的LAMP扩增引物可扩增出弓形虫529 bp序列保守区域的目的片段。优化结果显示，最佳反应总体系为25 μl，其中，甜菜碱最佳浓度为0.4 mol/L，MgSO4最佳浓度为6 mmol/L；添加环引物反应30 min的扩增效率与未添加环引物反应60 min的扩增效率相当，可使反应时间缩短30 min；最佳反应条件为63 ℃ 30 min，80 ℃ 3 min。特异性检测结果显示，所建立的LAMP方法可特异扩增弓形虫529 bp基因片段， 对照均未扩增出目的片段。灵敏性检测结果显示，LAMP方法的最低检出值达103 copies/ml，效率为PCR扩增（104 copies/ml）的10倍。 结论 建立了弓形虫529 bp重复序列的LAMP检测方法，该法具有较好的特异性和灵敏性。
- 徐前明袁恒青赵长城方芬刘喆宁红蕊石大丽李郁王海洋
- 关键词：刚地弓形虫
- 安徽地区猪传染性胸膜肺炎流行病学调查被引量：13
- 2015年
- 为了解安徽地区猪传染性胸膜肺炎(PCP)的流行情况,本研究采用ApxIV-ELISA试剂盒对1 288份猪血清样品中胸膜肺炎放线杆菌(APP)感染抗体进行检测,并采用PCR方法对573份母猪鼻腔棉拭子样品和92份屠宰生猪肺脏样品的APP核酸检测。结果显示,APP感染抗体总阳性率为26.40%,母猪/后备母猪/公猪APP感染抗体阳性率(45.47%)高于哺乳仔猪(28.02%)、保育猪(6.16%)、育肥猪(7.20%);夏季(41.42%)高于春季(29.75%)、秋季(26.35%)、冬季(19.26%);淮北地区(30.73%)和江淮地区(28.57%)高于皖南地区(13.77%);中型猪场(47.16%)高于大型猪场(19.28%)和小型猪场及散养户(23.15%);屠宰生猪肺脏样品APP核酸阳性率(11.96%)高于母猪鼻腔棉拭子(1.92%)。ELISA试剂盒与PCR同步检测的符合率为49.77%。表明PCP在安徽地区普遍存在,为引起猪呼吸道疾病综合征的主要原因之一。本研究结果为PCP的有效防控提供了现地调查依据。
- 施雷李郁魏建忠耿照玉殷宗俊顾秋成王海洋李好磊郭志英孙裴
- 关键词：猪传染性胸膜肺炎PCR流行病学
