郭小娟
- 作品数：19 被引量：16H指数：3
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 一种编码MERS-CoV棘突蛋白的重组41型腺病毒载体疫苗
- 发明名称：一种编码MERS-CoV棘突蛋白的重组41型腺病毒载体疫苗。本发明首先合成了中东呼吸综合症冠状病毒(MERS-CoV)棘突蛋白(S)的编码基因，将其插入pSh41-CMV载体，获得重组质粒pAd41-MERS-...
- 谭文杰鲁茁壮郭小娟蓝佳明邓瑶陈红洪涛
- 文献传递
- SARS-CoV-2 Beta变异株和甲型流感病毒H3N2双价重组腺病毒载体疫苗可在小鼠诱导免疫保护被引量：5
- 2022年
- 评价一种SARS-CoV-2 Beta变异株和甲型流感病毒H3N2新型重组双价疫苗在小鼠模型中的免疫保护效果。本研究构建了表达SARS-CoV-2南非变异株(B.1.351)棘突蛋白1(S1)和H3N2柬埔寨分离株(A/Cambodia/e0826360/2020)血凝素(HA)的重组双价非复制Ad5载体疫苗,命名为HAdV5-S1-2A-HA,经单针肌肉注射免疫BALB/c雌鼠后,采用ELISA、血凝抑制实验、假病毒中和实验与Elispot实验进行体液与细胞免疫学检测,免后3~6周采用H3N2-X31病毒、H1N1-PR8与SARS-CoV-2(B.1.351)进行攻毒保护实验。HAdV5-S1-2A-HA免疫两周后,低剂量组(1×10^(8)vp/只)免疫小鼠后可检出HA特异体液免疫与S1特异的细胞免疫应答;而高剂量组(5×10^(9)vp/只)诱导小鼠产生了较强的双抗原(S1,HA)特异的体液和细胞免疫应答,并能完全保护小鼠对H3N2-X31攻击,降低SARS-CoV-2(B.1.351)感染后小鼠肺部病毒载量,延迟H1N1-PR8病毒感染后小鼠死亡发生。本研究制备的重组双价疫苗HAdV5-S1-2A-HA在小鼠体内诱导抗原特异的体液与细胞免疫应答。同时,它还可以在小鼠中诱导对SARS-CoV-2和H3N2感染的免疫保护,具有较好的研发与应用前景。
- 韩頔郭小娟翟程程邓瑶黄保英胡月超任皎王文郭俊佳鲁福娜王文玲沈晓玲鲁茁壮王君谭文杰
- 关键词：流感病毒腺病毒载体疫苗血凝素免疫保护
- Ⅲa基因缺失的人7型腺病毒载体系统的建立
- 2024年
- 为了获得既能高效扩增外源基因,又不产生复制型子代病毒的腺病毒载体,我们构建了一个Ⅲa基因缺失的单周期腺病毒载体。本研究在前期已构建的E3区携带绿色荧光蛋白GFP的人7型腺病毒载体pK-Ad7E3GFP基础上进行。首先设计引物扩增包含氨苄青霉素抗性基因和质粒复制起点的AMP-ORI片段,利用限制性内切酶Asc I将pK-Ad7E3GFP切割为29.1kb与7.7kb的大小片段,其中,7.7kb小片段与AMP-ORI片段组装,获得第一个中间质粒pA-Ad7E3GAscI;经重叠延伸PCR、酶切、DNA组装等方法,将pA-Ad7E3GAscI上的Ⅲa基因进行删除,获得第二个中间质粒pA-AscDⅢa;经Pme I酶切的pA-AscDⅢa与上述29.1kb大片段经DNA组装后,得到重组腺病毒质粒pK-Ad7DⅢaE3GFP。同时,构建携带Ⅲa基因的真核表达载体pTPL-Ⅲa,转染293细胞,经G418筛选构建细胞系293-Ⅲa。结果发现,经Pme I线性化的pK-Ad7DⅢaE3GFP质粒转染293-Ⅲa细胞,7d后可见荧光聚集,且逐渐增大,表明重组腺病毒Ad7DⅢaE3GFP拯救成功;提取病毒基因组进行PCR鉴定,结果与预期相符;细胞培养上清经负染后,在电镜下可见腺病毒典型的正二十面体形态,培养细胞中也可见病毒呈晶格排列;以上结果均表明Ad7DⅢaE3GFP拯救成功。本研究成功建立了Ⅲa基因缺失的单周期人7型腺病毒载体系统,为该载体的研究与应用奠定基础。
- 王洋王永进侯文哲郭小娟郑贵森邹小辉
- 关键词：病毒拯救
- 人巨细胞病毒感染指示细胞株的建立
- 2015年
- 目的 建立指示细胞株,该细胞株被人巨细胞病毒（HCMV）感染后能够诱导表达绿色荧光蛋白（GFP）.方法 使用PCR方法克隆GFP基因和HCMV UL54基因的启动子（UL54p）;用GFP替换质粒pGL4.17[luc2/Neo]中的luc2基因,并将UL54p序列插入多克隆位点得到报告质粒pGL4UL54p-GFP.将该质粒转染永生化的人胚肺成纤维细胞MRC-5T,通过G418筛选,获得多株克隆化的MRC-5TUG细胞.使用HCMV（AD169毒株）感染各株MRC-5TUG,利用荧光显微镜观察GFP表达情况.使用人5型腺病毒和H1N1甲型流感病毒感染筛得的目的细胞株,观察GFP表达情况.结果 构建的报告质粒pGL4UL54p-GFP经酶切和测序鉴定,证实与预计的一致.质粒转染MRC-5T细胞,筛得9株MRC-5TUG克隆化细胞株;HCMV感染后,有2株细胞GFP表达由阴转阳,其中MRC-5TUG#7细胞GFP表达最强.人腺病毒和流感 病毒感染MRC-5TUG#7,GFP不表达.结论 成功构建了MRC-5TUG细胞,该细胞可以用于指示HCMV的感染。
- 郭小娟邹小辉吴萌屈建国鲁茁壮洪涛
- 关键词：巨细胞病毒基因表达荧光抗体技术
- 基于优化MERS-CoV棘突蛋白编码基因的重组5型腺病毒载体疫苗
- 发明名称：基于优化MERS-CoV棘突蛋白编码基因的重组5型腺病毒载体疫苗。本发明首先优化合成了中东呼吸综合症冠状病毒(MERS-CoV)棘突蛋白(S)的编码基因，将其插入pShuttle-CMV载体，获得重组质粒pAd...
- 谭文杰鲁茁壮郭小娟蓝佳明邓瑶陈红洪涛
- 文献传递
- 靶向感染哺乳动物细胞的禽4型腺病毒载体及其应用
- 本发明公开了靶向感染哺乳动物细胞的禽4型腺病毒载体及其应用，载体包括禽4型腺病毒的基因组序列、pBR322的复制起点核酸序列和卡那霉素抗性核酸序列；所述基因组序列中的fiber核酸序列经过人工改造，包括：在fiber基因...
- 鲁茁壮郭小娟颜丙玉邹小辉
- 文献传递
- 经禽CELO病毒fiber替换构建靶向型第三代腺病毒载体
- 2025年
- 第三代腺病毒载体较第一、第二代具有优势,本研究拟建立一种第三代腺病毒载体靶向性改造的技术方案。扩增纯化辅助病毒H14,制备其基因组DNA;PCR扩增含有质粒骨架的DNA片段,二者通过Gibson组装得到含有H14基因组的质粒pKH14。再利用前期建立的限制性酶切-组装(Restriction-assembly)方法,将pKH14质粒中的人5型腺病毒(HAdV-5)fiber knob编码序列替换为禽1型腺病毒CELO的fiber1对应序列,得到腺病毒质粒pKH14-CF1K。PacI酶切线性化pKH14-CF1K,转染293细胞,拯救、扩增并纯化新的辅助病毒H14-CF1K。PacI酶切线性化第三代腺病毒载体质粒pK4HSU-GFP,转染293Cre4细胞,在转染后5 h,添加H14-CF1K辅助病毒,拯救获得第三代腺病毒载体CF1K-GFP。利用H14-CF1K辅助病毒和293Cre4包装细胞,传代扩增CF1K-GFP,采用氯化铯密度梯度离心法进行纯化。对纯化的CF1K-GFP进行了鉴定,并检测了其对禽LMH细胞和人293细胞的基因转导能力。本研究建立了第三代腺病毒载体靶向性改造的技术平台,并获得能够有效转导禽LMH细胞的第三代腺病毒载体。
- 李润茁程莉侯文哲郭小娟黄文荣鲁茁壮
- 关键词：病毒拯救
- 纤维顶球改造增强了人5型腺病毒载体对造血细胞的感染被引量：2
- 2021年
- 基于人5型腺病毒(Human adenovirus type 5,HAdV⁃5)的腺病毒载体对造血细胞的基因转导效率低,将病毒fiber基因替换为HAdV⁃11p的同源基因F11p后,载体对造血细胞的感染效率增强。本研究拟在F11p纤维顶球(knob)结构域添加RGD4C多肽或HIV包膜糖蛋白(gp120)的V3结构域,观察重组HAdV⁃5对造血细胞感染效率的变化。在前期构建的pKAd5f11p153R⁃EPG腺病毒质粒基础上,结合限制性酶切和DNA组装技术,在F11p 153 aa后(knob AB loop,153位)、228位(FG loop)以及300位(IJ loop)插入RGD4C肽或者gp120的V3肽,构建了共6种重组腺病毒载体(F153RGD⁃EG、F228RGD⁃EG、F300RGD⁃EG、F153CV⁃EG、F228CV⁃EG和F300CV⁃EG),以fiber未改造的HAdV5⁃EG和改造为F11p的F11p⁃EG病毒作对照,观察了其对4种造血细胞系U937、K562、Jurkat和HL60以及人原代T细胞的感染效率。结果显示,对于U937细胞,当感染复数(MOI,vp/cell)为100时,HAdV5⁃EG感染效率最低,为2%;其次为F228CV⁃EG,感染率为45%;F300RGD⁃EG、F153CV⁃EG和F300CV⁃EG感染率为85%~90%;F153RGD⁃EG、F228RGD⁃EG高于阳性对照病毒F11p⁃EG,三者分别为99%、99%、95%。各病毒对于Jurkat细胞的感染率均较高,但HAdV5⁃EG明显低于F11p⁃EG、F153RGD⁃EG和F228RGD⁃EG,当MOI为100时分别为75%、93%、93%和96%。感染K562细胞的情况与U937细胞类似。各病毒对于HL60细胞感染效率最低,MOI为500时,F300RGD⁃EG和F300CV⁃EG的转导效率为28%和33%,是F11p⁃EG的10倍。对于人原代T细胞,F153RGD⁃EG和F228RGD⁃EG优于F11p⁃EG,当MOI为1000时,感染率分别为87%、90%和84%。研究结果表明,F11p knob插入RGD4C比单独F11p替换的HAdV⁃5对造血细胞的感染效率高,同时,本研究还发现HAdV⁃11p fiber knob的AB、FG或IJ loop可插入外源多肽,为腺病毒嗜向性改造增加了新靶点。
- 郭小娟梅玲玲付鸿臣邹小辉鲁茁壮洪涛
- 关键词：造血细胞
- 复制型重组人41型腺病毒载体系统及其应用
- 提供一种复制型人41型腺病毒(HAdV‑41)载体系统及重组病毒构建方法。载体系统包括腺病毒质粒pKAd41P5A‑CG。该质粒含有人工改造的HAdV‑41基因组：E1区和E4区启动子由HAdV‑5对应序列替换；E3区由...
- 鲁茁壮邹小辉郭小娟
- 文献传递
- 猴1型腺病毒（SAdV-1）载体系统及其应用
- 本发明提供一种猴1型腺病毒SAdV‑1载体系统，包括腺病毒质粒pKSAV1‑EG和包装细胞系293SE13。靶基因编码区可通过DNA组装或限制性酶切‑连接克隆插入pKSAV1‑EG质粒SpeI限制性内切酶切割位点，产生携...
- 鲁茁壮郭小娟谭文杰邓瑶尹丰彩
- 文献传递
