吕小龙
- 作品数：11 被引量：27H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科技兴农重点攻关项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学机械工程更多>>
- 鸡β防御素2在毕赤酵母中的组成型表达及其发酵条件的优化被引量：3
- 2015年
- 合成鸡β防御素2(AvBD2)成熟肽基因,构建重组质粒pGHK-AvBD2;将其电转化至毕赤酵母GS115;Tricine-SDS-PAGE和Western-blot检测表达产物,琼脂扩散法测定产物的抑菌活性,并测定产物的溶血活性;响应面法优化接种量、装液量和发酵温度。Tricine-SDS-PAGE和Western blot检测结果显示,在5.8ku位置出现目的蛋白质条带;抑菌活性检测表明,表达产物对粪肠球菌(ATCC29212)、大肠杆菌(CMCC44102)、金黄色葡萄球菌(ATCC25923)和巴氏杆菌具有明显的抑菌活性;发酵产物在500mg/L时的溶血活性仅2.17%。由建立的响应面模型得到重组酵母最佳发酵条件为:接种量528mg/100mL、装液量8.43%、发酵温度27.8℃,产物蛋白浓度较优化前提高20%。本研究实现了AvBD2在毕赤酵母中的组成型表达,表达产物有较好的抗菌活性,为AvBD2作为新型饲料添加剂的应用奠定了基础。
- 魏海婷祁克宗王尔群吕小龙涂健周秀红刘红梅
- 关键词：巴斯德毕赤酵母组成型表达响应面法优化
- luxS基因缺失对禽致病性大肠杆菌生物被膜形成的影响
- 吕小龙吴小卡周秀红涂健荆雅玮胡剑刚米荣升黄燕陈兆国王少辉祁克宗韩先干
- 鸡β-防御素2在大肠杆菌中的串联表达及抗菌活性分析被引量：4
- 2016年
- 利用基因串联技术表达鸡β-防御素2(AvBD2)重组蛋白,分析其生物结构活性以及蛋白表达量变化。构建了重组串联表达载体p ET-28a-AvBD2op-AvBD2,并将其转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达融合蛋白,经镍柱纯化后进行Western-blot检测、Tricine-SDS-PAGE分析和MALDI-TOF-MS质谱分析。结果显示,单表达工程菌和串联表达工程菌均在9500 u处有特异性条带;采用BCA法测得的单、串联表达工程菌纯化后的蛋白质量浓度分别为0.258和0.769 mg/m L;通过凝胶成像系统分析,单表达工程菌中目标蛋白的表达量约占上清总蛋白的10.3%,而串联表达的约占上清总蛋白的18.3%;MALDI-TOF-MS质谱分析结果表明,单、串联表达蛋白产物的分子质量分别为4 300、7 811 u;琼脂孔穴扩散抑菌法检测证明纯化蛋白对多种微生物具有不同的抗菌活性。
- 石水琴魏海婷祁克宗涂健吕小龙刘红梅薛挺周秀红
- 关键词：抑菌活性质谱分析
- 禽致病性大肠杆菌sfsA基因缺失株的构建及生物学特性的分析
- 2016年
- 为研究sfs A基因对禽致病性大肠杆菌(APEC)生物学特性的影响,利用Red重组方法构建禽致病性大肠杆菌APEC94株的sfs A基因缺失株,分析野生株与缺失株在生长特性、黏附和入侵D F-1细胞及生物被膜形成等生物学特性上的差异。通过动物试验,评价sfs A在APEC感染樱桃谷鸭过程中的作用。结果表明,sfs A缺失不影响APEC94菌株的生长特性和黏附、入侵DF-1细胞能力,但缺失株的生物被膜形成能力明显下降(P<0.000 1)。动物试验结果表明,与野生株相比,sfs A缺失株在樱桃谷鸭肝中的细菌载量显著降低(P<0.05),而在肾、脾和血液中无显著下降(P>0.05)。结果显示,sfs A基因的缺失显著降低禽致病性大肠杆菌的生物被膜形成能力及其在肝中的细菌载量,推测sfs A基因可能参与APEC对宿主的致病性。
- 罗燕秋吴小卡吕小龙胡剑刚王少辉米荣升黄燕祁克宗易道生陈兆国韩先干
- 关键词：禽致病性大肠杆菌基因缺失
- 一种优化的β-防御素AvBD2基因及其应用
- 本发明公开了一种优化的AvBD2基因及其应用，所述AvBD2基因具有如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，所述AvBD2基因可转化至遗传工程菌种并进行蛋白表达，获得的重组表达蛋白与干酪乳杆菌混合，制成一种新型复合微生...
- 祁克宗涂健魏海婷石水琴张明吕小龙汪雪雁薛秀恒蒋雯袁林
- 文献传递
- 鸭疫里默氏杆菌Mtan对底物SAH的催化活性
- 2017年
- 【目的】分析鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)不同血清型pfs基因的序列差异,并开展其编码蛋白S-腺苷高半胱氨酸核苷酶(Mtan,又称Pfs)的催化活性研究。【方法】PCR扩增9株不同血清型RA的pfs基因,分析其核苷酸序列的同源性;构建该基因的重组表达载体p Cold-RA-pfs,表达、纯化RA的重组蛋白Mtan(RA-Mtan);测定RA-Mtan对底物S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosylhomocysteine,SAH)的催化活性,运用哈维弧菌报告菌株BB170检测催化底物的自诱导物2(Autoinducer-2,AI-2)活性。【结果】对RA的pfs序列分析结果表明,不同血清型RA的核苷酸一致性在93.9%-100%之间;SDS-PAGE检测结果表明,RA-Mtan呈可溶性表达;酶活测定表明RA-Mtan和禽致病性大肠杆菌(Avain pathogenic Escherichia coli,APEC)的Lux S蛋白共同作用于底物时,可产生浓度为176.7μmol/L的同型半胱氨酸(Homocysteine,HCY);AI-2活性检测结果表明,产生的AI-2具有生物学活性。【结论】RA不同血清型的pfs高度保守,RA pfs基因的编码产物RA-Mtan在体外具有催化SAH的活性,RA-Mtan和禽致病性大肠杆菌的Lux S蛋白共同作用于底物SAH时,能产生有活性的AI-2,为进一步研究pfs对RA的调控作用提供参考。
- 吴小卡徐达荆雅玮吕小龙胡剑刚米荣升黄燕王成明陈兆国韩先干
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌S-腺苷同型半胱氨酸密度感应系统
- luxS基因缺失对禽致病性大肠杆菌O_1、O_2和O_(78)三种血清型分离株的生物学特性影响被引量：4
- 2018年
- 【目的】LuxS/AI-2型密度群体感应系统产生的自诱导信号分子AI-2(AI-2的产生需要luxS基因编码的Lux S蛋白参与)参与对细菌众多生理功能的调控。探讨luxS对不同血清型禽致病性大肠杆菌(Avian Pathogenicity Escherichia coli,APEC)生物学特性的影响。【方法】本研究以APEC优势血清型APECO_1(O_1血清型)、DE17(O_2血清型)、E940(O_(78)血清型)及其相应luxS缺失株为研究对象,对野生株和缺失株的生长特性、生物被膜形成、rdar(red,dry and rough)形态、运动性和耐药性等特性进行分析。【结果】luxS基因的缺失不影响APEC生长特性,但导致APEC不能产生AI-2;此外,luxS基因的缺失显著降低APECO_1和E940的生物被膜形成(P<0.05),而DE17的生物被膜形成无显著变化。对各菌株的rdar形态和运动性检测结果表明,luxS基因的缺失改变了APECO_1的rdar形态,对DE17和E940并无影响;显著降低了APECO_1和DE17运动能力,对E940并无影响。荧光定量PCR检测结果表明,luxS基因的缺失显著降低APECO_1、DE17和E940与细菌运动性相关的鞭毛基因fli G和fli I的转录水平(P<0.05)。此外,对各菌株的耐药性检测结果表明,luxS基因缺失导致APECO_1对头孢吡肟和丁胺卡那由耐药变为高敏,同时对氯霉素与E940相同由高敏变为耐药,但对DE17的耐药性无显著改变。【结论】luxS对APEC的生物学特性具有重要的调控作用,且这种调控具有菌株特异性。
- 吕小龙胡剑刚陈兆国荆雅玮米荣升黄燕王少辉韩先干祁克宗
- 关键词：生物被膜运动性
- 福建省龙岩市禽致病性大肠杆菌的血清型、毒力因子及耐药研究被引量：14
- 2016年
- 本研究对2015年分离自福建省龙岩市的139株禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)的血清型、毒力因子分布及耐药性等进行检测,并对血清型与耐药性、毒力因子分布和耐药性之间的相关性进行分析,以期为APEC的防控提供参考。对139株分离菌株的血清型检测结果表明,O1血清型(11株)、O2血清型(14株)和O78血清型(14株)占全部菌株的28%;对分离菌株毒力基因检测结果表明,4%和7.1%的菌株检测到papC基因和vat基因,14.3%和19.3%的菌株检测到aat A基因和cva/cvi基因。而iuc D(82%)、tsh(59%)、iss(55%)和irp2(44.6%)基因在分离菌株中具有较高的检出率;药敏实验结果表明,分离株存在多重耐药性,99%以上分离菌株对红霉素、克林霉素和利福平耐受,86%的分离菌株对10种以上抗生素耐受,57.3%的菌株对13种药物都耐受;对血清型、耐药性与致病性之间的分析结果表明,分离的O1、O2和O78血清型的菌株,其中50%的菌株是含有5种以上毒力基因的强毒株,且在分离的含有5种以上毒力基因的强毒株中,50%的菌株对13种抗生素耐受,90%的菌株对10种以上药物耐受。
- 杨立军韩先干尹会方罗燕秋左佳坤徐达吕小龙吴小卡周键王少辉李金贵于圣青
- 关键词：禽致病性大肠杆菌毒力耐药性血清型
- 禽致病性大肠杆菌ptsI的调控作用研究
- 吴小卡吕小龙胡剑刚陈兆国韩先干
- 禽致病性大肠杆菌生物被膜形成及其相关调控基因研究
- 禽致病性大肠杆菌(Avian Pathogenicity Escherichia coli,APEC)能够诱发禽类大肠杆菌病,包括心包炎,肝周炎,腹膜炎,气囊炎和败血症等症状,严重制约养禽业的健康发展,因此开展对该病的防...
- 吕小龙
- 关键词：禽致病性大肠杆菌生物被膜C-DI-GMPDGC
- 文献传递
