- 一种铜绿假单胞菌重组蛋白Vac33的纯化方法
- 本发明提供了一种铜绿假单胞菌重组蛋白Vac33的纯化方法，所述方法包括：1)收集表达铜绿假单胞菌重组蛋白Vac33的菌体；2)将步骤1)收集的菌体破菌，并离心，收集上清；3)将步骤2)得到的上清通过GST亲和层析进行初纯...
- 敬海明顾江邹全明章金勇孙红武付强牟道华张玉东徐丽敏
- 文献传递
- 鲍曼不动杆菌外膜蛋白A1S_0115的克隆、表达及免疫保护性研究被引量：1
- 2015年
- 目的构建鲍曼不动杆菌外膜蛋白A1S_0115胞外区(A1S_0115A)与GST标签融合表达的原核表达载体,在大肠杆菌XL-1 blue中表达、纯化A1S_0115A蛋白后,进行抗原免疫保护性的初步研究。方法利用生物信息学技术分析A1S_0115蛋白结构,确定蛋白的胞外区片段,PCR扩增该基因片段后,构建重组表达载体p GEX-6P-2-A1S_0115A,将重组载体转化大肠杆菌XL-1blue,IPTG诱导表达GST-A1S_0115A融合蛋白,采用GST亲和层析填料纯化并酶切获得A1S_0115A蛋白。利用已建立的Balb/c小鼠鲍曼不动杆菌全身感染模型对该蛋白抗原的免疫保护性进行初步评价。结果重组质粒经过Bam HⅠ和NotⅠ双酶切鉴定、核酸序列测定和IPTG诱导表达及酶切后蛋白的SDS-PAGE分析表明,A1S_0115A蛋白胞外区相对分子质量大小约50 000,GST标签相对分子质量大小约26 000,与预期设想符合,目的蛋白纯度在95%以上。用A1S_0115A蛋白对小鼠进行2轮次免疫保护性实验及其抗体的被动免疫实验,免疫攻毒后小鼠的保护率分别为50%和55%,被动免疫保护率为45%和50%。结论成功构建重组表达载体p GEX-6P-2-A1S_0115A,利用大肠杆菌可溶表达系统、GST亲和层析和酶切方法获得了高纯度的A1S_0115A蛋白。动物免疫攻毒保护实验结果表明A1S_0115A蛋白具有较好的免疫保护性,为研制新型有效的鲍曼不动杆菌疫苗奠定实验基础。
- 魏振波蔡昌芝杨赟纪永军牟道华石云曾浩邹全明
- 关键词：GST融合蛋白免疫保护性
- 鲍曼不动杆菌外膜蛋白A1S1969的克隆表达及免疫保护机制初步研究被引量：3
- 2016年
- 目的制备鲍曼不动杆菌(Ab)A1S_1969重组蛋白,利用小鼠全身脓毒血症感染致死模型评价A1S_1969重组蛋白的免疫保护效果,探讨可能的免疫保护机制,为筛选Ab疫苗有效的保护性抗原奠定基础。方法基于反向疫苗学技术筛选出Ab外膜蛋白A1S_1969,利用p GEX-6P-2质粒构建GST融合表达载体,重组表达的A1S_1969蛋白经亲和层析高效纯化后与铝佐剂吸附制备而成重组A1S_1969免疫原;采用Balb/c小鼠全身感染模型评价A1S_1969重组蛋白的免疫保护效果,通过ELISA检测免疫小鼠Ig G抗体滴度和Ig G抗体亚型。制备A1S_1969重组蛋白抗血清进行体外调理吞噬杀菌实验。结果成功克隆、表达并纯化A1S_1969重组蛋白,纯度>90%。动物免疫保护结果显示A1S_1969重组蛋白组小鼠存活率为55.6%,对照组小鼠存活率为20.0%(P<0.05);末次免疫7 d后小鼠体内总Ig G抗体滴度为1∶64 000,以Ig G1亚型为主;体外调理吞噬杀菌实验结果显示A1S_1969特异性血清抗体可以增强中性粒细胞对Ab的杀菌作用,实验组杀菌率可达55%,对照组无杀菌活性。结论 A1S_1969重组蛋白可显著提高全身脓毒血症感染致死模型小鼠的存活率,具有良好的免疫保护效果。
- 蔡昌芝冯强杨赟魏振波纪永军牟道华敬海明邹全明曾浩
- 关键词：鲍曼不动杆菌基因工程疫苗克隆表达免疫保护
- 铜绿假单胞菌疫苗重组蛋白Vac9的纯化方法
- 本发明公开了一种铜绿假单胞菌(PA)重组亚单位基因工程蛋白疫苗Vac9的纯化方法。Vac9蛋白是铜绿假单胞菌细胞外膜蛋白，经重组融合，通过大肠杆菌基因工程菌表达获得。采用对基因工程菌进行高压破菌、GST亲和层析、Pres...
- 敬海明顾江邹全明章金勇孙红武付强牟道华张玉东徐丽敏
- 文献传递
- 铜绿假单胞菌疫苗重组蛋白Vac11的纯化方法
- 本发明公开了一种铜绿假单胞菌(PA)重组亚单位基因工程蛋白疫苗Vac11的纯化方法。该蛋白为铜绿假单胞菌抗原分子的活性功能片段重组融合，通过大肠杆菌基因工程菌表达获得。采用对基因工程菌进行高压破菌、GST亲和层析、PP酶...
- 敬海明顾江邹全明章金勇孙红武付强牟道华张玉东徐丽敏
- 文献传递
- 铜绿假单胞菌疫苗重组蛋白Vac14的纯化方法
- 本发明公开了一种铜绿假单胞菌(PA)重组亚单位基因工程蛋白疫苗Vac14的纯化方法。Vac14蛋白为铜绿假单胞菌抗原分子的活性功能片段重组融合，通过大肠杆菌基因工程菌表达获得。采用对基因工程菌进行高压破菌、GST亲和层析...
- 敬海明顾江邹全明章金勇孙红武付强牟道华张玉东徐丽敏
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- 一种铜绿假单胞菌重组蛋白Vac33的纯化方法
- 本发明提供了一种铜绿假单胞菌重组蛋白Vac33的纯化方法，所述方法包括：1)收集表达铜绿假单胞菌重组蛋白Vac33的菌体；2)将步骤1)收集的菌体破菌，并离心，收集上清；3)将步骤2)得到的上清通过GST亲和层析进行初纯...
- 敬海明顾江邹全明章金勇孙红武付强牟道华张玉东徐丽敏
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- 铜绿假单胞菌疫苗重组蛋白Vac14的纯化方法
- 本发明公开了一种铜绿假单胞菌(PA)重组亚单位基因工程蛋白疫苗Vac14的纯化方法。Vac14蛋白为铜绿假单胞菌抗原分子的活性功能片段重组融合，通过大肠杆菌基因工程菌表达获得。采用对基因工程菌进行高压破菌、GST亲和层析...
- 敬海明顾江邹全明章金勇孙红武付强牟道华张玉东徐丽敏
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