郝磊
- 作品数：6 被引量：30H指数：4
- 供职机构：第三军医大学军事预防医学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金“十一五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- hPDGF-A／hBD2双基因修饰骨髓源间充质干细胞外源基因体外与体内的表达被引量：3
- 2009年
- 本研究观察腺病毒介导hPDGF-A/hBD2双基因转染大鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSC)体外以及移植后体内局部的外源基因表达情况。将已成功构建和包装的hPDGF-A/hBD2双基因共表达腺病毒体外感染原代分离培养的BM-MSC后,采用免疫荧光细胞化学法检测目的基因蛋白的表达。收集经重组腺病毒感染的BM-MSC的无血清培养上清,采用划痕试验检测培养上清中分泌的hPDGF-A的促迁移效应。将重组腺病毒感染的BM-MSC局部点状注射至大鼠放射创伤复合伤创面,在各时相点进行冰冻切片并观察创面移植的BMSC的分布,同时采用免疫组织化学的方法观察外源基因的表达。结果表明:在体外重组腺病毒感染后的大鼠BM-MSC表达报告基因EGFP。免疫荧光细胞化学检测显示双基因修饰的BM-MSC表达hPDGF-A和hBD2。划痕实验证实双基因修饰BMSC培养上清组在8、12、24和30小时的愈合面积百分比显著高于对照组(p<0.05)。荧光显微镜观察大鼠创面移植的外源性基因修饰的BM-MSC显示,至少在移植后2周之内BM-MSC可以较高水平地表达以EGFP为指示的外源基因。创面免疫组织化学染色表明,外源基因从第3天开始表达,第7天达到高峰,第21天仍有少量表达。结论:hPDGF-A/hBD2双基因修饰BM-MSC在体外、体内均可使目的基因得到有效表达,成为hPDGF-A/hBD2双基因修饰BMSC促进难愈创面愈合的基础。
- 郝磊孙慧勤郭晓姝闫国和罗成基程天民粟永萍邹仲敏
- 关键词：间充质干细胞创伤愈合
- hPDGF-A/hBD_2双基因共表达腺病毒载体的构建及表达被引量：7
- 2007年
- 目的制备人血小板源性生长因子-A(human platelet-derived growth factor A,hPDGF-A)和人β防御素2(human beta defensins,hBD2)双基因共表达腺病毒载体并观察其在大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)中的表达。方法将hPDGF-A和hBD2通过内部核糖体插入位点(internal ribosome entry site,IRES)连接后,以同源重组的形式插入腺病毒表达载体,由人胚肾293细胞包装,获得有感染能力的重组腺病毒颗粒。重组病毒感染BMSCs后,用RT-PCR检测重组腺病毒的表达。结果①成功构建穿梭质粒pAdTrack-hPDGF-A-IRES2-hBD2。②成功构建重组腺病毒质粒pAdeasy-hPDGF-A-IRES2-hBD2。③293细胞包装获得有感染能力的重组腺病毒。④转染的BMSCs高表达hPDGF-A和hBD。结论构建了hPDGF-A/hBD双基因共表达腺病毒载体,证实其转染BMSC后的表达。
- 郝磊邹仲敏王军平董世武邓均闫国和王连友宁宇刘登群罗成基粟永萍
- 关键词：腺病毒血小板源性生长因子防御素
- G-CSF动员循环间充质干细胞及其对小鼠颅脑损伤修复的可行性分析被引量：11
- 2007年
- 目的建立小鼠严重颅脑创伤模型探讨粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)动员循环间充质干细胞(mesenchym alstem cells,MSCs)的可行性,并观察G-CSF动员的修复效应。方法以G-CSF作为动员剂,培养骨髓和外周血来源的MSCs,计数动员前后的CFU-F。制作小鼠严重颅脑创伤模型,致伤后采用G-CSF对MSCs进行动员,在2、24、48、96、120、144、192、264、336h进行神经行为学评分、运动功能评分,并观察小鼠死亡率和病理组织切片。结果从小鼠外周血培养出MSCs,G-CSF动员后骨髓和外周血MSCs的CFU-F数量显著高于正常对照组(P<0·01)。致伤后小鼠神经行为学和运动功能评分显著低于正常对照组(P<0·01),创伤治疗组在144～192h期间评分显著高于创伤组(P<0·05)。致伤后小鼠死亡率增高,病理切片可见创伤处有出血和空泡。结论成功培养及用G-CSF动员了外周血MSCs,在成功建立小鼠严重颅脑创伤模型的基础上,显示G-CSF动员可以降低严重颅脑创伤小鼠死亡,参与了创伤修复。
- 邓均艾国平周桃莉王军平徐辉邹仲敏董世武郝磊冉新泽粟永萍
- 关键词：间充质干细胞创伤动员G-CSF
- hPDGF-A／hBD2双基因转染对大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性的影响被引量：5
- 2008年
- 目的探讨hPDGF-A/hBD2腺病毒双基因转染大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)后,对BMSCs本身生物学特性的影响。方法体外分离培养大鼠BMSCs,应用GFP标记的腺病毒表达载体系统Adv-hPDGF-A-IRES-hBD2,以脂质体法转染293细胞,再以病毒上清液感染BMSCs,对转染目的基因后的BMSCs进行形态学观察,绘制生长曲线,测定其细胞周期以及向成脂、成骨、成肌诱导分化和鉴定。结果hPDGF-A/hBD2双基因成功转入BMSCs后,未发现其对细胞活性有明显作用,基因修饰后的BMSCs仍具有成体干细胞所具备的增殖能力,以及向成脂、成骨、成肌等方向分化的潜能。结论BMSCs是重组腺病毒转染的良好靶细胞,hPDGF-A/hBD2基因修饰的BMSCs仍可作为满意的细胞治疗的种子细胞。
- 冯一梅徐辉邹仲敏郝磊王涛邓均董世武粟永萍程天民
- 关键词：骨髓间充质干细胞基因转染细胞生物学特性
- C3H1OT1/2细胞向神经元诱导分化的方法研究被引量：4
- 2007年
- 目的探讨体外诱导间充质干细胞(mesenchymal stemc ells,MSCs)系C3H1OT1/2细胞分化为神经元细胞的方法。方法取3月龄SD大鼠1只,体重200g,进行神经元细胞的原代培养及诱导上清液的收集,用细胞免疫组织化学方法进行鉴定。将C3H1OT1/2细胞进行培养,分别用β巯基乙醇(A组)和神经元原代细胞上清液(B组)作为诱导剂,对C3H1OT1/2细胞进行诱导分化;对照组(C组)不加诱导剂进行培养。采用细胞免疫组织化学方法对分化的细胞进行鉴定。结果细胞免疫化学检测原代培养细胞为神经元,表达特异标志物:神经丝蛋白(neurofilament protein,NF)和神经元特异性烯醇化酶(neuronspecifi enolase,NSE)。A组C3H1OT1/2细胞经β巯基乙醇诱导2h即表达NF和NSE,5h表达强度增强。B组C3H1OT1/2细胞经原代神经元培养上清液诱导,1d有NF和NSE表达,但表达强度比A组弱。各组NSE表达阳性率和强度均高于NF。结论化学分子和微环境体液因素均可诱导MSCs向神经元细胞分化;为MSCs通过神经分化参与脑创伤的修复提供了理论依据。
- 邓均艾国平王军平徐辉邹仲敏闫国和董世武郝磊冉新泽粟永萍
- 关键词：间充质干细胞分化神经元细胞
- 基因治疗在慢性难愈创面的应用进展
- 2007年
- 众多疾病和创伤都会带来损伤创面的难愈问题,慢性难愈创面的长期存在不仅增加了局部感染的机会,而且大大影响了局部组织的结构和功能。基因治疗作为一种新的生物治疗方法,其相关理论和技术近来日臻完善,为慢性难愈创面的治疗提供了新的技术途径,有望带来突破性的治疗效果。
- 郝磊邹仲敏王军平粟永萍
- 关键词：基因治疗难愈创面
