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诸江: 作品数：22 被引量：98H指数：5; 供职机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金卫生部科学研究基金上海市科学技术委员会资助项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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Blimp1基因突变影响其编码蛋白转录抑制功能的体外研究: 2013年; 目的:探讨Blimp1基因突变在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)发病中的作用。方法:应用基因测序方法检测1例DLBCL患者Blimp1基因的突变情况;用PCR扩增其Blimp1全长编码基因,并通过定点突变获得野生型Blimp1的全长编码基因。分别将野生型、突变型Blimp1的全长编码基因亚克隆至含有Flag标签的Flag-CMV4真核表达载体中,将重组质粒分别命名为Flag-Blimp1-wt和Flag-Blimp1-mut;采用PCR扩增获得人CIITA启动子,并将扩增片段插入PGL3-Basic荧光报告基因载体中,所有重组质粒均通过酶切鉴定并测序验证序列正确;将Flag-Blimp1-wt/mut分别与PGL3-CIITA-promoter共转染293T细胞,用荧光素酶报告基因系统检测报告基因载体的活性及Blimp1基因对其表达的调控,采用蛋白印迹法检测融合蛋白Flag-Blimp1-wt与Flag-Blimp1-mut的蛋白表达差异。结果:成功构建野生型、突变型Flag-Blimp1融合蛋白表达载体及PGL3-CIITA-promoter报告基因载体;经荧光素酶报告基因检测系统证实,构建的报告基因载体具有启动子活性,野生型Blimp1蛋白对其表达具有抑制作用,且该抑制作用与Blimp1的转染剂量呈正相关,而突变型Blimp1对其抑制功能明显减弱;蛋白印迹检测结果显示,突变型Blimp1蛋白明显低于野生型。结论:该例患者中Blimp1的突变影响了其转录抑制功能,可能是由基因突变导致Blimp1蛋白表达量的减少所引起。; 刘之茵王文方诸江李军民; 关键词：弥漫大B细胞淋巴瘤转录调控荧光素酶报告基因

维甲酸、砷剂及柔红霉素对NB4细胞组织因子表达的影响被引量：19: 1999年; 目的　探讨全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）、三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）及柔红霉素（ＤＮＲ）对急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）细胞株ＮＢ４细胞组织因子（ＴＦ）表达的影响。方法　用复钙时间检测ＮＢ４细胞的促凝活性（ＰＣＡ）；用ＥＬＩＳＡ方法检测其ＴＦ抗原；用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ ＰＣＲ）检测ＴＦｍＲＮＡ的转录水平。结果　ＡＴＲＡ和Ａｓ２Ｏ３均呈时间依赖的方式下调ＮＢ４细胞的ＰＣＡ、ＴＦ抗原水平以及ＴＦｍＲＮＡ的转录；而ＤＮＲ处理ＮＢ４细胞的ＰＣＡ及ＴＦ抗原在早期上调，至２４～４８小时达到最大值。对ＰＣＲ产物测序，发现ＡＰＬ细胞ＴＦ第５个外显子缺失的转录本。结论　ＡＴＲＡ和Ａｓ２Ｏ３均可下调ＡＰＬ细胞ＴＦ的表达并降低其ＰＣＡ，改善ＡＰＬ患者的弥散性血管内凝血（ＤＩＣ）出血症状；Ａｓ２Ｏ３和ＤＮＲ对ＡＰＬ凝血障碍不同效应的作用机制至少部分与药物对ＡＰＬ细胞ＴＦ表达和ＰＣＡ的不同调节作用有关。; 郭为民诸江王鸿利赵维莅璩斌王学锋陈竺王振义; 关键词：维甲酸砷剂柔红霉素 APL

c-Kit在急性早幼粒细胞白血病起始细胞中的作用被引量：1: 2012年; 目的:探讨小鼠造血系干祖细胞表面标志c-Kit在急性早幼粒细胞白血病(APL)起始细胞中的作用。方法:以人源移动抑制因子相关蛋白8基因启动子表达的人源早幼粒细胞白血病-维A酸受体α融合基因(hMRP8-hPML-RAR)转基因所致小鼠APL为研究模型,研究APL起始细胞的表面标志。结果:发现在APL小鼠模型体内存在一群以c-Kit+为标志的白血病起始细胞(LIC)。通过体外培养,发现LIC在失去肿瘤微环境支持后由c-Kit+细胞向c-Kit-细胞分化,同时逐渐丧失白血病致病力。c-Kit的磷酸化位点抑制剂伊马替尼和小发夹RNA(shRNA)虽均抑制c-Kit功能和(或)表达,但并不能明显影响白血病致病力。结论:肿瘤微环境在APL起始细胞致瘤力的维持上有非常重要的作用,在白血病致病力的维持上c-Kit可能并不是一主导功能因素。; 丁晶丁飞张武李军民诸江; 关键词：C-KIT 急性早幼粒细胞白血病肿瘤微环境

全反式维A酸诱导的部分分化的白血病细胞具有去分化能力被引量：1: 2014年; 目的:观察人急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)细胞系NB4细胞株经全反式维A酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)诱导分化作用后,部分分化的白血病细胞的去分化能力。方法 :采用1μmol/L的ATRA处理NB4细胞48 h、72 h、96 h、120 h、168 h、216 h、288 h、336 h后,并通过瑞氏染色观察细胞形态学,流式细胞术检测CD11b的表达,用单克隆形成实验分别检测分化细胞的核型及撤药后各时间点单个CD11b+细胞的克隆形成能力,用蛋白印迹法观察细胞PML/RARα、RARα及PU.1等蛋白的表达变化。结果:NB4细胞CD11b的表达水平在ATRA处理48 h后达到高峰,之后稳定表达;ATRA处理后,NB4细胞中成熟中性粒细胞的比例也随处理时间的延长而增加,ATRA处理120 h比处理96 h,成熟中性粒细胞的比例有明显的增加(P<0.01),之后比例逐步增加至平台期;且NB4细胞中PML-RARα的表达水平逐渐下降,伴随RARα及PU.1的表达上升。在撤去ATRA后,部分CD11b+的NB4活细胞能够重建白血病细胞克隆,形态上回复到诱导分化前的原始细胞形态,CD11b的表达也降低,PML-RARα的表达水平也恢复到处理前水平。尤其是NB4细胞的去分化能力及克隆形成率随着ATRA处理时间的增加而降低,直至ATRA处理至336 h,NB4子代细胞才完全丧失了克隆形成能力。ATRA处理后,NB4子代细胞的克隆形成能力与其成熟中性粒细胞的比例呈负相关(r=-0.905,P<0.01)。结论:人类APL系NB4细胞经ATRA诱导后发生不同程度的分化,在撤去ATRA后,处于部分分化阶段的白血病细胞仍能通过"去分化"而重新获得无限增殖的特性。; 戴健敏刘祥箴张武诸江; 关键词：急性早幼粒细胞白血病全反式维A酸去分化

一个重症vWD家系临床与基因分析: 1998年; 目的：研究重症血管性血友病（ｖＷＤ）患者家系成员临床表型特征，并分析血管性血友病因子（ｖＷＦ）基因缺陷的传递规律。方法：应用ｖＷＦ多聚体分析和ＥＬＩＳＡ法检测重症ｖＷＤ患者父母家系四代２６位成员临床表型。在此基础上针对ｖＷＦ基因内多个ＲＦＬＰ和ＶＮＴＲ位点，对所有家系成员进行缺陷基因遗传分析。结果：患者血浆ｖＷＦ∶Ａｇ＜２％，检测不到多聚体条带。基因分析表明两条ｖＷＦ等位基因分别来自父方和母方家系，且均有缺陷。部分家系成员携有一条缺陷基因，ｖＷＦ水平正常或有轻度下降，多聚体图谱正常。结论：①先证者可能为复合杂合子型的３型ｖＷＤ患者，携带者的缺陷基因可被正常基因弥补。②应用ｖＷＦ基因多种多态性标志行ＤＮＡ分析对重症ｖＷＤ家系遗传咨询有实用意义。; 于立志王鸿利杜玲珍王迎春诸江储海燕王振义; 关键词：血友病血管性血友病 VWD

甲状腺乳头状癌差异基因筛选的初步研究: 2014年; 目的:初步探讨甲状腺乳头状癌病人肿瘤组织和甲状腺正常组织间,及淋巴结转移组和未转移组间的基因差异表达。方法:收集12例甲状腺乳头状癌病人的肿瘤组织及对侧甲状腺正常组织,根据肿瘤和正常组织,淋巴结是否转移进行分组,抽提总RNA,质检合格后利用基因芯片技术初步分析各组间的差异基因表达。结果:通过DiffGene算法筛选出肿瘤组和对照组,淋巴结转移组和未转移组间表达有显著差异的基因。肿瘤组和对照组间显著差异表达基因2 028条,上调1 022条,下调1 006条。结论:差异基因的筛选为进一步研究甲状腺乳头状癌发生发展的分子机制提供了研究方向和实验基础。; 姜敏吕靖诸江陈海珍陈曦张一帆李宏为; 关键词：甲状腺乳头状癌差异基因基因芯片

造血干细胞发生的研究进展: 2010年; 哺乳动物个体的发育起源于受精卵的形成，受精卵是个体的第1个全能干细胞。受精卵的分裂和分化逐步形成相对定向的胚胎阶段的多种干细胞及组织特异性的成体干细胞,包括成体造血干细胞（hematopoietic stem cells，HSCs）在内。已有充分的证据表明在人和小鼠中，HSC是成体内各系造血细胞的来源，单个HSC即可在合适的宿主体内重建整个造血系统。; 刘祥箴郭宁诸江; 关键词：造血干细胞

人凝血因子Ⅷ cDNA体外真核表达的初步研究被引量：5: 1998年; 目的：建立人凝血因子ⅧｃＤＮＡ体外真核高效表达的体系。方法：将人ＦⅧＢ区大部分缺失（Δａ７６０１６３９）的ＦⅧｃＤＮＡ插入ｐＣＩ真核表达载体、ｐＧＲＥ５．２／ＥＢＶ载体和逆转录病毒载体ｐＭＳＣＶ，构建了５种表达框架，在体外转染和感染了多种靶细胞。结果：ｐＣＩⅧ在ＮＩＨ３Ｔ３细胞产生了低水平表达，而ｐＧＲＥ５．２／ＥＢＶⅧ和ｐＭＳＣＶⅧ系列分别在Ｈｅｌａ细胞和Ｂｏｓｃ２３逆转录病毒包装细胞中呈较高水平的表达。Ｂｏｓｃ２３细胞培养上清感染的ＮＩＨ３Ｔ３和３２ＤＣ不能有效地产生ＦⅧ。结论：在ＦⅧ体外表达及基因治疗的方案设计中，靶细胞的选择是一重要因素。; 诸江王鸿利于立志王学锋郭为民陈赛娟戚正武王振义陈竺; 关键词：基因表达真核表达 CDNA 血友病A

三氧化二砷诱导套细胞淋巴瘤细胞株凋亡及机制研究被引量：10: 2010年; 本研究旨在探讨三氧化二砷(ATO)诱导套细胞淋巴瘤(MCL)细胞株凋亡的效应及其机制。以不同浓度的ATO处理细胞,再通过MTT法检测细胞MCL细胞株(jeko-1,mino,JVM-2)增殖;用AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测jeko-1细胞的凋亡;用DiOC6(3)染色流式细胞术检测jeko-1细胞的线粒体跨膜电位丢失;用Western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及凋亡相关蛋白MCL-1,BCL-2,PUMA,NOXA,cCaspase-3,cCaspase-9,cPARP在ATO处理前后的表达变化。结果表明:ATO抑制MCL细胞增殖,诱导MCL细胞凋亡,并且引起MCL细胞线粒体跨膜电位丢失,引起MCL-1,PUMA,cyclin D1蛋白表达水平降低,cPARP,cCaspase-3,cCaspase-9表达水平增加,不影响BCL-2,NOXA表达。结论:ATO能有效抑制MCL细胞增殖,诱导MCL细胞株凋亡,其中细胞凋亡的线粒体途径起着重要的作用。; 费爱梅毛朝明刘静静诸江糜坚青; 关键词：套细胞淋巴瘤三氧化二砷细胞凋亡线粒体途径

白血病状态下正常造血干/祖细胞的生物学行为及其调控机制:国家自然科学基金重大项目结题综述被引量：5: 2015年; 国家自然科学基金"十二五"重大项目"白血病状态下正常造血干/祖细胞的生物学行为及其调控机制"集中围绕正常造血干/祖细胞在白血病状态下的受抑规律及其内外调控机制这一热点科学问题进行了多团队联合攻关。经过2011—2014年的4年研究,从分子、细胞、整体和临床等多个层面系统阐释了白血病状态下白血病细胞和正常造血干/祖细胞竞争的规律,揭示了白血病恶性克隆生长和正常造血干/祖细胞受抑的分子机制,提出了抑制白血病细胞特别是白血病干细胞生长及促进正常造血干/祖细胞扩增的治疗新策略,取得了一系列突破性和原创性的研究成果,为进一步提高白血病临床治疗效果奠定了重要基础。; 孙瑞娟江虎军程涛诸江王健民周剑锋董尔丹; 关键词：白血病白血病干细胞造血微环境

诸江

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