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猪链球菌2型新型毒力调控因子RfeA的研究被引量：1: 2015年; 猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是一种重要的人畜共患病原菌,在33个血清型中,2型(SS2)毒力最强、分布最广,但其具体的致病机理尚不完全清楚。前期的比较基因组学研究表明,RTX family exoprotein A gene(rfe A)只存在于强毒菌株中,基因生物信息学分析发现rfe A与epf-like位于同一操纵子上,且与传统毒力因子ef邻近,PCR方法检测表明rfe A在猪链球菌2型中分布广泛。为了研究rfe A的致病机制,利用同源重组构建了rfe A的基因缺失株Δrfe A和互补株CΔrfe A,并通过斑马鱼模型对缺失株、互补株和野生株的毒力进行评估,发现缺失株毒力增强,表明rfe A可能是SS2的一个新调控因子,或者可能影响其他调控因子。; 吴光燕于岩飞叶琳璐张炜; 关键词：猪链球菌毒力

猪链球菌2型不同mrp基因型与毒力的关系被引量：5: 2016年; 【目的】猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)是重要的人畜共患病病原,且有强弱毒株之分,但至今仍缺少合适的毒力标志基因来鉴定致病性SS2。本文旨在研究mrp基因型与SS2毒力的关系。【方法】通过PCR方法鉴定不同SS2菌株的mrp基因型。再通过"内标"化的斑马鱼感染模型和实时荧光定量PCR,分别测定不同mrp基因型菌株的毒力水平和mrp转录水平。【结果】根据PCR结果可将53株SS2分为mrp-A型(27株)和mrp-B型(26株)两种基因型;mrp-A型菌株比mrp-B菌株毒力偏强,且A型菌株中mrp转录水平更高。【结论】发现mrp基因在SS2中分布广泛,但不同菌株中mrp基因型不同,mrp-A型菌株的致病力更强。而且,以mrp非保守区域作为诊断靶点能有效鉴定SS2强毒株。; 杜德超于岩飞马彩凤姚火春陆承平张炜; 关键词：猪链球菌2型毒力

基于同源重组的猪肺炎支原体p97基因突变株的构建: 2025年; 采用pGEM■-T载体作为骨架,通过质粒双酶切和连接以及全基因合成的方法,向载体质粒中插入猪肺炎支原体(Mesomycoplasma hyopneumoniae,Mhp)的oriC序列,获得pGEM■-Mhp-oriC-p97重组穿梭质粒,以实现质粒在Mhp中的复制;插入螺原体启动子及嘌呤霉素抗性基因用于重组单克隆的筛选;插入p97的上、下游同源臂用于同源重组的启动;插入大肠杆菌recA基因用于提高同源重组效率。然后,将pGEM■-Mhp-oriC-p97重组穿梭质粒通过电转化或化学转化递送入Mhp中,利用嘌呤霉素抗性基因及p97目的基因进行基因缺失株的筛选。结果显示,构建了一种能够同时在Mhp及大肠杆菌中复制的穿梭质粒pGEM■-Mhp-oriC-p97,该质粒的转化能实现嘌呤霉素基因、recA基因在Mhp中的表达及p97基因的变异,初步获得了p97基因突变株。结果表明,建立了一种利用同源重组原理实现Mhp基因编辑的工具,为Mhp致病机制研究工具的开发奠定了基础。; 韦艳娜王吉英谢欢李志强HASSAN Z.A.Ishag谢星徐彬谢星冯志新熊祺琰于岩飞; 关键词：猪肺炎支原体同源重组

猪鼻支原体热不稳定延伸因子黏附宿主细胞机制的研究: 2022年; 为研究热不稳定延伸因子(EF-Tu)在猪鼻支原体(Mhr)与宿主互作中的功能,本研究构建了重组质粒pET-EF-Tu并经PCR鉴定正确后,转化BL21(DE3)大肠杆菌后,通过IPTG诱导表达、镍柱亲和层析纯化获得纯化的重组蛋白rEF-Tu。将重组蛋白免疫家兔制备高免血清,采用ELISA方法检测其效价。利用该免疫血清通过western blot和菌落免疫杂交的方法分析EF-Tu在Mhr表面的表达情况,ELISA结果显示制备的多克隆抗体效价达1:200 000以上,且r EF-Tu可表达于Mhr表面;通过间接免疫荧光试验和微孔板黏附试验检测rEF-Tu对猪肾细胞(PK-15)的黏附能力,结果显示rEF-Tu具有黏附能力且该黏附作用具有剂量依赖性;进一步利用微孔板的方法检测r EF-Tu蛋白结合于纤溶酶原和细胞外基质成分的能力,结果表明rEF-Tu蛋白可结合于宿主纤溶酶原以及不同的细胞外基质成分(纤连蛋白、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原蛋白和玻连蛋白)。本研究结果表明EF-Tu可于Mhr表面表达、可黏附宿主细胞,并可结合纤溶酶原和多种细胞外基质成分,在Mhr的感染及致病中可能具有重要功能。; 李瑶王佳邵佳于岩飞于岩飞刘蓓蓓刘蓓蓓冯志新邵国青熊祺琰; 关键词：纤溶酶原细胞外基质

猪肺炎支原体乳酸脱氢酶在诱导猪支气管上皮细胞凋亡中的作用被引量：4: 2024年; 猪肺炎支原体感染会引起宿主上皮细胞的损伤及凋亡。上皮屏障的破坏往往导致细菌和病毒的继发感染,给养猪业造成严重的经济损失,但具体的致病机制及毒力因子尚未完全阐明。前期研究发现猪肺炎支原体乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)不仅参与猪肺炎支原体的代谢还与猪肺炎支原体的毒力相关。因此,本研究通过原核表达及亲和层析获得猪肺炎支原体乳酸脱氢酶重组蛋白(recombinant LDH, rLDH),之后分别用不同浓度的rLDH与猪支气管上皮细胞(porcine bronchial epithelial cell, PBEC)孵育,经显微镜观察rLDH对细胞形态的影响,通过CCK-8法检测rLDH对细胞活力的影响。选取对细胞形态及活力影响不显著的50和100μg·mL^(-1) rLDH分别与PBEC孵育,通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,反转录荧光定量PCR(reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)法和免疫印记检测凋亡相关基因caspase 3、caspase 8、caspase 9、Bax、BCL-2的转录水平和蛋白水平。结果显示:猪肺炎支原体rLDH呈剂量依赖性地诱导PBEC凋亡,其作用与猪肺炎支原体菌株一致。用rLDH及Mhp 168孵育后,PBEC的促凋亡因子Bax、caspase 3和caspase 9的mRNA水平显著上调,凋亡抑制因子BCL-2的mRNA水平显著下调,caspase 8的mRNA水平未发生显著变化。促凋亡因子Bax、caspase 3的蛋白表达水平显著上调,凋亡抑制因子BCL-2的蛋白表达水平显著下调。结果表明,猪肺炎支原体可能通过LDH诱导PBEC内源性细胞凋亡,凋亡相关因子caspase 3、caspase 9、Bax和BCL-2在其中发挥重要作用。; 王吉英尹蕊如谢星王海燕谢星胡辉王海燕冯志新胡辉熊祺琰; 关键词：凋亡

肺炎支原体感染评价方法的比较研究: 2025年; 【目的】以小鼠为动物模型,分析肺炎支原体感染(Mycoplasma pneumoniae infection, MPI)的特性并对病变评价标准进行比较分析,为MPI统一评价方法的提出提供参考。【方法】利用BALB/c小鼠经滴鼻途径,两次感染5×10^(7) CCU的M.pneumoniae M129株,14 d后检测小鼠体重、肺脏大体病变、肺组织病理变化及其两种定量分析方法、肺组织病原载量、外周血T淋巴细胞亚群和血清中IL-6的表达水平等指标,分析M. pneumoniae感染特性并对病变评价标准进行比较分析。【结果】感染M129菌株14 d后,BALB/c小鼠血清中IL-6表达水平上升;肺脏出现明显的实变,肺组织切片可见大量中性粒细胞浸润,并可观察到肺泡间隔增厚。采用两种方法对肺脏病理切片的病变程度进行比较评分,发现美国胸科学会(American Thoracic Society, ATS)开发的肺损伤病理学评分系统相较于26分法能更为精细更加客观地反应肺部病变情况。感染导致小鼠炎症反应的发生并最终引起小鼠体重的显著降低。另一方面,肺部病原载量结果显示,M129株感染小鼠14 d后肺部病原载量极低;T细胞亚群流式检测分析显示,机体产生了偏向CD4^(+)T细胞的免疫,提示M. pneumoniae感染与机体免疫互相博弈,机体的免疫反应可能会逐渐清除肺部的病原。【结论】M. pneumoniae经鼻感染能导致BALB/c小鼠发生系统性炎症反应。对于肺组织病的评价,ATS肺损伤病理学评分系统相较于26分法更为精细客观,有利于不同研究之间的比较分析。; 李志强李志强王吉英王佳韦艳娜王佳韦艳娜邵国青李少丽邵国青; 关键词：肺炎支原体免疫清除

大车前苷抑制猪肺炎支原体诱导的炎性反应的作用初探: 2025年; 猪肺炎支原体(Mesomycoplasma hyopneumoniae, Mhp)在呼吸道上皮细胞定植,引起猪气管、支气管及肺组织的炎性损伤,使猪饲料转化率降低,日增重下降,给养猪业造成严重的经济损失。大车前苷(Plantamajoside, PMS)为一种常用的抗炎中药,其在抑制Mhp感染引起的炎性反应中的作用未知。本研究拟通过Mhp感染PK-15细胞和小鼠为模型,探讨大车前苷在体外及体内条件下对Mhp诱导的炎性反应的影响及其相关机制。通过不同浓度的PMS作用PK-15细胞,确定PMS对细胞形态和活力无影响的最高浓度。随后采用该最高浓度的PMS的作用于Mhp感染的PK-15细胞,通过RT-qPCR检测PK-15细胞中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)等炎性相关因子的mRNA表达变化。结果显示,与细胞对照组相比,Mhp感染组细胞中的IL-6、TNF-α、NF-κB和IκBα的mRNA水平显著升高,而PMS的作用可降低Mhp感染时这种mRNA水平的升高。进一步通过Western blot和免疫荧光分析发现PMS可抑制Mhp诱导的NF-κB P65磷酸化,抑制NF-κB P65的核易位。小鼠感染模型的相关研究发现PMS可改善Mhp诱导的小鼠肺脏病变,使炎性细胞减少。同时,大车前苷可显著降低血清中TNF-α的含量。以上结果表明,PMS可能通过NF-κB通路改善Mhp诱导的炎性反应,为防治猪肺炎支原体感染新方法的提出提供重要的理论依据。; 王吉英向书涵李志强李炻漾张磊谢青云熊祺琰邵国青邵国青冯志新; 关键词：肺炎核因子-ΚB

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于岩飞

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