王瑞丰
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
- 供职机构：上海交通大学生命科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 不同调控元件及组合对烟草外源蛋白瞬时表达的效果分析被引量：5
- 2020年
- 植物瞬时表达是一种高效快速获得外源基因表达的方法,该系统主要应用于蛋白互作研究、调控元件功能分析、蛋白亚细胞定位和蛋白制剂合成等方面。为了进一步提高外源基因在瞬时表达体系中稳定表达效果,本研究对瞬时表达载体的多种作用元件及转化条件进行优化。首先,我们在目前最常用的双元表达载体pCambia1300骨架上,分别添加可增强特异性转录和稳定蛋白表达的新的调控元件,构建pREU-EF、pREUR-EF和pREUR-p24-EF重组表达载体,并且通过定性和定量方法分析不同元件组合、不同菌液浓度对报告基因eGFP表达的影响。激光共聚焦显微镜观察结果证明3个重组载体可在烟草叶片的细胞膜、细胞质和细胞核中快速表达报告基因;定量PCR分析表明3个重组载体中报告基因在转录表达水平上分别比原pCambia1301-eGFP载体提高了4倍、20倍和28倍;蛋白水平分析表明烟草叶片转化48 h后,pREUR-EF外源蛋白表达量明显高于pREU-EF;并且当菌液注射液浓度OD600=0.4左右时,外源蛋白的表达效率最高。此外,我们还进一步把改造后的瞬时表达重组载体运用到双荧光素酶(Dual-Luciferase)报告系统中,实验证明改造后的瞬时表达重组载体可以更加快捷和有效地用于转录调控分析。因此,烟草瞬时表达载体中作用元件增加和优化组合,可以有效地提高外源蛋白的表达。
- 刘文浩王瑞丰刘琬琳许杰
- 关键词：调控元件烟草转录调控
- 半胱氨酸蛋白酶在植物花药绒毡层细胞PCD中的功能研究
- 细胞程序性死亡(Programmed Cell Death,PCD)不仅是一种特殊的细胞死亡类型,而且具有重要的生物学意义及复杂的分子生物学机制,植物PCD 在生长发育、器官形成和衰老、抗病和抗逆等方面的都起到关键作用。...
- 许杰王瑞丰张大兵
- 关键词：绒毡层细胞程序化死亡半胱氨酸蛋白酶
- 拟南芥四个旁系同源天冬氨酸蛋白酶基因的表达和转录调控分析
- 2022年
- 天冬氨酸蛋白酶(aspartic protease,AP)是一类功能多样化的酶,在植物的生殖发育中发挥重要作用。前期研究发现拟南芥中存在四个在花药中特异表达、且属于旁系同源的AP基因(AtAP39、AtAP49、AtAP51和AtAP52)。为进一步探究它们在花药中亚功能化的分子机制,本研究基于表达特征、启动子元件和转录结合调控来对比分析它们表达及转录调控的差异。结果表明:这四个AP的氨基酸序列高度同源、具有类似的核心功能域;但转录水平上存在表达时期和表达量的差异,双荧光素酶试验证明它们的表达差异由不同转录因子及其蛋白互作决定。相关数据证明了这四个旁系同源AP基因的转录水平是受到精准和差异性调控的,从而导致它们在花药发育中亚功能化的产生,为进一步开展它们的遗传学研究提供参考。
- 孙雅倩王瑞丰刘文浩张鸿哲许杰
- 关键词：天冬氨酸蛋白酶花药转录调控
- 天冬氨酸蛋白酶在拟南芥和水稻中的分子进化、表达模式以及在花药发育中的功能分析被引量：7
- 2015年
- 天冬氨酸蛋白酶(aspartic proteases,APs)是一类功能多样化的酶,参与了植物大部分生理和发育过程,但其基因家族在植物中的系统分类、分子进化以及功能方面研究仍很欠缺。本研究收集整理了拟南芥和水稻中APs基因序列、分类、基因结构和染色体定位等信息,对比分析该基因家族在拟南芥和水稻中分子进化方面的差异;利用转录组数据阐明该家族基因在不同组织部位和不同发育时期的表达差异和功能分化。此外,本文还围绕花药发育的过程,细致分析了各亚家族APs基因的表达变化,推测APs在花药发育过程中的可能功能。
- 汤龙军李鹏程朱璐王瑞丰陈旭李宗芸许杰
- 关键词：天冬氨酸蛋白酶分子进化花药
