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王勇: 作品数：57 被引量：183H指数：8; 供职机构：安徽农业大学动物科技学院更多>>; 发文基金：安徽省自然科学基金国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>; 相关领域：农业科学文化科学医药卫生生物学更多>>

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羊口疮病毒127基因的克隆表达及亚细胞定位分析: 2019年; 为了对羊口疮病毒(ORFV)AH-F10株127基因进行原核表达及亚细胞定位,本试验采用PCR方法扩增出ORFV127基因,成功构建原核表达重组质粒pGEX-6p-1-ORFV127和真核重组质粒pEGFP-N1-ORFV127。将原核表达重组质粒转化到大肠埃希氏菌中表达,并进行纯化和鉴定。以纯化的蛋白质免疫BALB/c雌鼠制备多克隆抗体,利用Western-blot技术鉴定其反应原性。利用脂质体介导法将重组质粒pEGFP-N1-ORFV127转染至Vero细胞,通过倒置荧光显微镜观察其在细胞中的表达及亚细胞定位。结果表明,获得的ORFV127基因序列全长为558bp,ORFV127蛋白在大肠杆菌中获得高效表达,主要以包涵体蛋白质的形式表达,大小约49000。Western-blot结果显示,免疫小鼠获得的抗ORFV127蛋白的多克隆抗体可特异性识别ORFV127蛋白,倒置荧光显微镜观察发现,ORFV127蛋白主要定位于细胞质。本试验结果为后续研究ORFV127蛋白的功能提供了宝贵的生物材料。; 钟灵毓王元红白彩霞杨侃侃俞赵荣鲁智敏张学琪刘自敏蒋书东李永东王勇; 关键词：羊口疮病毒原核表达亚细胞定位

禽源多重耐药金黄色葡萄球菌耐药基因检测及分子分型被引量：5: 2018年; 【背景】金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性菌,在动物和人身上能引起一系列疾病。【目的】了解安徽省不同地区禽源多重耐药金黄色葡萄球菌耐药性的情况及基因分型特征。【方法】以安徽不同地区的病禽肝脏作为标本,分离鉴定得到103株多重耐药金黄色葡萄球菌,并进行耐药基因型检测和ERIC-PCR分子分型。【结果】耐药菌株从三重到八重耐药均有分布,主要集中在五重(43/103)、四重(21/103)和六重耐药(22/103)。药敏结果显示,β-内酰胺类的耐药率最高(79.6%),氨基糖苷类次之(71.8%)。耐药基因检出率由高到低分别为mec A(92.2%)、aac(6′)/aph(2″)(76.7%)、ermC(37.9%)、ermA(13.6%)和fem A(3.9%)。ERIC-PCR分子分型获得6种不同类群,优势流行菌群为类群Ⅱ(38/103)。【结论】安徽地区金黄色葡萄球菌存在较严重的耐药性,氨基糖苷类、β-内酰胺类和大环内酯类抗生素的耐药基因携带率较高。分型结果表明安徽部分区域耐药金黄色葡萄球菌具有遗传多样性,但耐药谱与ERIC-PCR分子分型无明显关联。; 刘茜秦祥刘丹丹王佳明王菊花方富贵潘玲王勇周杰; 关键词：多重耐药耐药基因

口疮病毒VEGF基因的原核表达及亚细胞定位被引量：4: 2017年; 为了对口疮病毒(ORFV)VEGF基因进行原核表达和亚细胞定位研究,PCR扩增VEGF基因,并将其分别克隆至原核表达载体p ET-32a(+)和真核表达载体p EGFP-C3中。将原核表达重组质粒转化至E.coli Rosseta感受态细胞中,经IPTG诱导表达目的蛋白。将表达产物纯化后免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体血清,并利用琼脂扩散试验检测其效价。将真核表达重组质粒转染BHK21细胞,利用激光共聚焦观察VEGF蛋白在BHK21细胞中的亚细胞定位。结果表明:VEGF蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,主要以包涵体形式表达,蛋白分子质量大小约为33 ku。Western-blot结果表明,VEGF蛋白具有良好的反应原性,制备的多克隆抗体效价达1∶8。VEGF蛋白在转染BHK21细胞后主要在细胞质中表达,且能够与制备的多抗血清反应。本研究为进一步研究该蛋白的功能奠定了一定的基础。; 殷冬冬杨侃侃白彩霞赵玉洁潘飞徐燕华梅跃辉苏莉钟灵毓崔佣楸张子军祁克宗王桂军王勇; 关键词：VEGF基因原核表达亚细胞定位

犬副流感病毒F基因原核表达及多克隆抗体的制备: 2025年; 本研究利用原核表达系统表达犬副流感病毒(CPIV)F蛋白,并制备CPIV-F蛋白多克隆抗体。依据CPIV SH2021株F基因设计引物,扩增获得去除信号肽的F基因片段,并构建了重组表达质粒pET-42a-CPIV-F,经测序验证正确后转化至大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达重组蛋白,并优化了诱导剂浓度及诱导时间。采用包涵体粗提纯化法对重组CPIV-F蛋白进行纯化,并测定了重组蛋白浓度。用纯化的重组CPIV-F蛋白制备其兔源多克隆抗体,通过Western blot和ELISA鉴定了多克隆抗体特异性和效价。结果显示:试验成功构建pET-42a-CPIV-F原核表达质粒并表达出重组CPIV-F蛋白;SDS-PAGE法和Western blot结果表明,重组CPIV-F蛋白可在大肠杆菌中的表达,大小为89 kDa,优化后的IPTG终浓度为1 mmol/L,诱导4 h表达量最大,重组蛋白浓度为2.3 mg/mL,兔抗CPIV-F抗体可以与重组蛋白发生特异性反应;间接ELISA测得兔抗CPIV-F蛋白多克隆抗体效价为1∶102400。本研究制备的兔源多克隆抗体特异和高效,表明F蛋白具有良好的免疫原性,为进一步研究CPIV F蛋白的生物学功能及建立相关的免疫学检测方法奠定了基础。; 刘禹含叶雨濛麦嘉迅程松孟春春朱杰刘光清王勇巴音查汗·盖力克李传峰; 关键词：犬副流感病毒 F基因原核表达多克隆抗体

埃博拉病毒研究进展: 埃博拉出血热(Ebola haemorrhagic fever,EBHF)是由埃博拉病毒(Ebola virus,EBV)引起的一种病死率极高的急性出血性人畜共患传染病,世界卫生组织(WHO)将其列为对人类危害最严重的病...; 王勇蒋广志岳晓琳刘尚高; 关键词：埃博拉病毒 EBV

细小病毒入胞途径的研究进展: 2023年; 细小病毒(parvovirus)是一类侵袭脊椎动物与无脊椎动物的无囊膜单链DNA病毒,严重危害着人类与动物的健康。病毒的感染过程包括吸附、穿入、脱壳、复制、组装以及子代病毒的释放。其中细小病毒成功入侵宿主细胞是启动感染的先决条件,而病毒的受体和入胞途径决定了组织嗜性和致病机制。本文系统总结了细小病毒基因的结构和功能的特点以及细小病毒利用不同的受体和入胞途径入侵宿主的研究进展。对细小病毒入胞途径的系统总结,一方面有助于开发靶向细小病毒入胞途径药物以及基因治疗载体,另一方面为后续细小病毒入侵机制的深入研究提供参考。; 王锦斌王薏敏毕庄莉刘禹含朱恩宇王勇刘光清许发芝李传峰; 关键词：细小病毒基因组受体内吞

一例番鸭病毒性肝炎的诊断被引量：1: 2015年; 为了对安徽省某养殖户送检的疑似鸭肝炎病例进行诊断,首先通过临床剖检观察,结合问诊初步怀疑为鸭病毒性肝炎,随后利用实验室建立的RT-PCR诊断方法,从肝脏组织中成功扩增出鸭肝炎病毒VP1基因特异性片段,同时采集病鸭的心脏、肝脏、脾脏和脑组织,甲醛固定后制作石蜡切片,再进行H.E.染色,最后在显微镜下观察,见肝脏组织出现大量出血及坏死。综上所述,通过临床剖检观察,结合RT-PCR及组织病理学观察,最终确诊该病例为番鸭病毒性肝炎。通过对本病例的介绍,以期为番鸭病毒性肝炎的临床诊断和后续防治工作提供参考。; 岳晓琳王勇蒋广志卢凤英潘玲; 关键词：番鸭病毒性肝炎 RT-PCR 组织病理学

鸭坦布苏病毒E蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：1: 2016年; 目的用RT-PCR技术扩增鸭坦布苏病毒(DTMUV)AH-F10株E基因,并克隆至pET32a(+)载体,构建重组表达质粒pET32a-E,表达E蛋白。方法重组表达质粒转化感受态细胞BL21(DE3),经IPTG诱导后,获得含6个His标签的融合蛋白,大小约54kDa。表达的蛋白以包涵体形式存在。对目的蛋白进行纯化,用纯化的E蛋白免疫Balb/c小鼠,制备多克隆抗体血清。结果SDS-PAGE和Western blot试验结果表明E基因在大肠埃希菌中成功表达,并能与抗DTMUV多克隆抗体产生特异性反应,具有良好的反应原性。间接免疫荧光试验表明免疫小鼠后获得的多克隆抗体能与DTMUV反应。结论本研究为DTMUV新型疫苗和诊断试剂盒的进一步研究奠定了基础。; 王勇殷冬冬宫晓华王瑞许漩唐井玉兰梦蝶王桂军; 关键词：E蛋白原核表达多克隆抗体

1株番鸭源奇异变形杆菌的分离鉴定及其毒力基因分析被引量：10: 2020年; 为查清引起滁州地区某养殖场雏番鸭死亡原因,本研究通过对分离细菌的鉴定和动物致病性试验,确定奇异变形杆菌是引起此次雏番鸭发病的病原体,并将分离的奇异变形杆菌命名为AHcz-1株.根据其16S rRNA基因序列,建立其遗传进化树;根据已报道的8个毒力基因ureC、zapA、mrpA、ucaA、rsbA、pmfA、atfA、atfC序列,设计引物进行PCR扩增,并对毒力基因进行序列分析.结果显示:AHcz-1株与日本株(AB932526.1)亲缘关系最近,同源性高达100%;毒力基因pmfA、atfA、ureC均未发生变异;AHcz-1株具有较强的致病性;致病菌对丁胺卡那高度敏感,对庆大霉素、恩诺沙星中度敏感,对其它17种抗生素不敏感,表明AHcz-1株具有多重耐药性.本研究为番鸭源奇异变形杆菌临床诊断、临床用药及遗传变异研究奠定了基础.; 俞赵荣杨侃侃王元红张谦苏莉鲁智敏张学琪刘自敏李传峰刘光清王勇李永东; 关键词：番鸭奇异变形杆菌毒力基因

鹅星状病毒SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法的建立被引量：15: 2020年; 为建立快速检测鹅星状病毒(GAstV)的方法,本研究根据GenBank中GAstV ORF2基因序列设计1对特异性引物,构建重组质粒pMD19-T-GAstV,以其作为标准品建立了GAstV的SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测方法。优化其反应条件及体系,进行特异性、敏感性和重复性试验以及临床样本检测。试验结果显示,除GAstV外,禽白血病病毒(ALV)、血清4型禽腺病毒(FAdV-4)、鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)和鸡传染性贫血病病毒(CIAV)等常见禽病病原利用该方法检测均呈阴性,表明其特异性良好;建立的荧光定量RT-PCR检出的最低模板含量为1μl 3.75×101拷贝,敏感性较高;组内和组间重复性试验变异系数均小于1%。利用该方法对来自安徽地区的32份临床样品进行检测,阳性检出率为43.75%,常规PCR方法阳性检出率为18.75%,阳性检出符合率100%,表明该方法可用于临床样品检测。该方法的建立为临床样品中GAstV的快速高效检测提供了技术支持。; 白彩霞张达赵靓杨侃侃王小朋李新路李锦春李永东王勇; 关键词：SYBR

王勇

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