周晓群
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 供职机构：东北农业大学农学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
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- 苜蓿夜蛾中肠丝氨酸蛋白酶cDNA的克隆、原核表达及其活性测定
- [目的]丝氨酸蛋白酶(Serine Protease,SP)是昆虫体内一类重要的消化酶,在鳞翅目昆虫中主要参与消化、发育、先天免疫反应等重要的生理过程.本研究旨在从苜蓿夜蛾Heliothisviriplaca中肠克隆出丝...
- 周晓群高艳玲樊东
- 关键词：苜蓿夜蛾丝氨酸蛋白酶克隆原核表达活性测定
- 苜蓿夜蛾中肠丝氨酸蛋白酶cDNA的克隆、原核表达及其活性测定
- [目的]丝氨酸蛋白酶(Serine Protease,SP)是昆虫体内一类重要的消化酶,在鳞翅目昆虫中主要参与消化、发育、先天免疫反应等重要的生理过程。本研究旨在从苜蓿夜蛾Heliothis viriplaca中肠克隆出...
- 周晓群高艳玲樊东
- 关键词：苜蓿夜蛾丝氨酸蛋白酶克隆原核表达活性测定
- 苜蓿夜蛾中肠丝氨酸蛋白酶cDNA的克隆、序列分析及原核表达被引量：5
- 2014年
- 【目的】本研究旨在从苜蓿夜蛾Heliothis viriplaca中肠克隆出丝氨酸蛋白酶（serine protease,SP）基因的cDNA序列,测定原核表达后的蛋白经纯化及复性后的活性。【方法】运用RT-PCR和cDNA末端快速扩增方法（rapid amplification of cDNA ends,RACE）克隆苜蓿夜蛾幼虫中肠丝氨酸蛋白酶cDNA全序列,用大肠杆菌Escherichia coli表达系统进行表达。重组蛋白经纯化后,利用梯度透析法进行复性,以BApNA为底物,进行活性测定。【结果】克隆获得的苜蓿夜蛾中肠丝氨酸蛋白酶基因命名为HvSP（GenBank登录号：JX866720）,该基因全长880 bp,开放阅读框长762 bp,编码254个氨基酸,推测分子量和pI值分别为26.9 kDa和9.49。由HvSP推导的氨基酸与鳞翅目昆虫SP氨基酸序列的一致性在52%~95%之间,其中与棉铃虫Helicoverpa armigera SP（GenBank登录号：CAA72962）的氨基酸序列一致性最高,达95%。成功构建重组载体pET21b-HvSP进行原核表达,Western-blot鉴定确定为目的蛋白。蛋白可溶性分析发现重组蛋白为包涵体。在Glycine-NaOH缓冲液中,当pH为10.0时,复性的重组蛋白活性达到最高,为35.74 U/mL。【结论】本研究在苜蓿夜蛾体内获得了一个新的丝氨酸蛋白酶基因,且原核表达后的重组蛋白经过变性、纯化及复性后具有活性。该结果为进一步研究丝氨酸蛋白酶在鳞翅目昆虫体内的生理功能奠定了基础。
- 周晓群高艳玲赵奎军樊东
- 关键词：苜蓿夜蛾丝氨酸蛋白酶CDNA克隆原核表达
- 苜蓿夜蛾丝氨酸蛋白酶基因cDNA序列的克隆与原核表达研究被引量：3
- 2016年
- 【目的】丝氨酸蛋白酶（Serine protease,SP）是以丝氨酸为活性中心的重要的蛋白水解酶。在昆虫中,丝氨酸蛋白酶参与消化、发育、先天免疫反应和组织重建等重要的生理过程。本试验以苜蓿夜蛾Heliothis viriplaca为材料,克隆其丝氨酸蛋白酶基因的cDNA序列,再对该基因进行原核表达并对表达产物进行活性测定研究。【方法】从苜蓿夜蛾中肠中提取总RNA,通过RT-PCR和RACE技术,扩增获得丝氨酸蛋白酶基因cDNA全长序列,用大肠杆菌E.coli表达系统进行表达;再对表达的重组蛋白进行变性、纯化与复性,并以BTEE为底物进行活性测定。【结果】克隆得到的苜蓿夜蛾中肠丝氨酸蛋白酶基因命名为Hv SP,该基因已登录Gen Bank,登录号为KT907053。该基因全长1 017 bp,开放阅读框为886 bp,编码295个氨基酸,分子量约为30.8 ku,等电点为8.27,推导的氨基酸序列与其他昆虫丝氨酸蛋白酶氨基酸序列相似性在46%-92%之间。在Tris-HCl缓冲液中,p H为8.5时,复性的重组蛋白活性最高,为28.7 U/m L。荧光定量PCR结果表明,Hv SP基因的m RNA在苜蓿夜蛾的多个组织中特异性表达,且在中肠中表达量最高,但在唾腺中未检测到Hv SP的m RNA表达。【结论】该研究克隆了一个新的苜蓿夜蛾丝氨酸蛋白酶基因的cDNA序列,且原核表达后的重组蛋白经过变性、纯化及复性后具有活性,为进一步探索丝氨酸蛋白酶在昆虫体内的生理生化功能奠定了基础。
- 李莉莉周晓群赵奎军雷蕾樊东
- 关键词：苜蓿夜蛾丝氨酸蛋白酶原核表达酶活性
