刘新生
- 作品数：88 被引量：80H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国际科技合作与交流专项项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 一种用于细胞培养的直头滴管
- 本实用新型公开了一种用于细胞培养的直头滴管，包括胶帽、管头、过滤介质和管体，所述管头位于所述管体顶部，所述胶帽套在所述管头外部，所述过滤介质安装在所述管头内，环绕所述管头中部设置有磨砂层。本实用新型一种用于细胞培养的直头...
- 张杰丁耀忠张永光常惠芸王永录潘丽邵军军张中旺刘新生
- 文献传递
- 口蹄疫病毒株AF/72结构蛋白VP1克隆及其T细胞表位预测被引量：6
- 2010年
- 以AF/72RNA为模板,反转录并扩增目的cDNA,然后与pGEM-T easy体连接并转化JM109菌株,提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和EcoRI酶切法鉴定。应用BIMAS生物学软件对AF/72株结构蛋白VP1的H-2Dd、H-2Kd、H-2Ld、A20限制性T细胞表位进行预测,并对不同限制性的T细胞表位进行对比。结果表明,口蹄疫AF/72株结构蛋白VP1长639bp,编码213个氨基酸。不同限制性的T细胞表位虽然不尽相同,但与已鉴定的T细胞表位相比较,它们之间也有一些类似的、并且可能是通用型的T细胞表位。本试验通过生物信息学方法预测AF/72结构蛋白VP1的T细胞表位,为进一步试验确定T细胞表位和口蹄疫病毒T细胞表位的研究提供了一种有效的方法。同时为口蹄疫病毒表位疫苗的设计提供有效地理论基础。
- 刘新生王永录
- 关键词：口蹄疫病毒T细胞表位VP1蛋白
- 一种基于截短N蛋白的猪丁型冠状病毒抗体ELISA检测方法的建立被引量：1
- 2025年
- 为了建立一种猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)抗体检测方法,将PDCoV CH/XJYN/2016毒株N基因序列插入原核表达质粒载体pColdⅡ中,表达重组蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2,经SDS-PAGE分析和Ni+-NTA纯化后,检测重组原核蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2与猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)阳性血清的反应原性和特异性。同时对重组真核蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2进行Western blotting和间接免疫荧光实验验证分析。最后使用重组原核蛋白PDCoV-N2建立间接ELISA方法,优化反应条件,检测敏感性、特异性及重复性,并对102份临床血清进行了检测。重组原核蛋白PDCoV-N2与PEDV抗血清交叉反应较低。以PDCoV-N2蛋白制备的间接ELISA方法的最优条件为:抗原包被浓度1.25μg/mL,37℃包被1 h,BSA封闭液4℃过夜,血清最佳稀释浓度1:50,37℃孵育1 h,酶标二抗最佳稀释比例为1:80000,37℃孵育1 h,加入四甲基联苯胺(tetramethylbenzidine,TMB)显色液37℃反应10 min。待检样品的S/P值(样本值–阴性对照值)/(阳性对照值–阴性对照值)≥0.45为阳性,S/P值≤0.38为阴性,S/P值介于0.45和0.38之间,则为可疑。检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissiblegastroenteritis of swine,TGEV)、口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)、非洲猪瘟病毒(african swine fever virus,ASFV)阳性血清,结果显示,其他冠状病毒的S/P值均小于0.38,表明其具有良好的特异性;PDCoV抗血清800倍稀释后仍为阳性;批间和批内重复性实验结果显示,本方法变异系数均小于10%;临床血清样本检测结果显示,该方法与中和实验的符合率为94.12%。本研究基于截短的PDCoV N蛋白,建立了能够检测抗PDCoV特异性IgG抗体的ELISA方法,且该方法敏感、特异、稳定、重复性好,为PDCoV的临床诊断提供了新的方法。
- 王东升于瑞明张莉萍白英杰刘霞王永录杜晓华刘新生
- 关键词：IGG抗体间接ELISA
- 一种圈舍病菌预防装置
- 本实用新型涉及养殖设备领域，具体为一种圈舍病菌预防装置；解决了现有圈舍内空气由于流动性差而导致病菌滋生的问题；包括：底座，底座上通过支座安装有换气设备，其特征在于：所述换气设备包括依次连接的吸风部、消毒部、隔离部、雾化部...
- 吕建亮潘丽张中旺刘新生周鹏马中元王永录张永光
- 文献传递
- 一种快速显色一步法检测猪细小病毒的LAMP试剂盒
- 本发明提供一种快速显色一步法检测猪细小病毒的LAMP试剂盒，该试剂盒包含有6条LAMP引物的LAMP反应液构成的检测体系。本发明的试剂盒在不延长原有1小时反应时间的条件下，实现了将荧光染料直接加入反应管的一步操作，不仅简...
- 张杰张永光刘永生丁耀忠陈豪泰常惠芸吕建亮林彤潘丽刘新生王永录
- 文献传递
- 猪嵴病毒结构蛋白VP0与VP1原核表达及间接ELISA方法的建立被引量：1
- 2022年
- 分别建立基于猪嵴病毒(PKV)结构蛋白VP0与VP1的间接ELISA检测方法。对PKV结构蛋白VP0与VP1的基因进行合成并连接至原核表达载体pET-32a后,转入感受态细胞BL21中,用IPTG诱导表达的重组蛋白经Ni柱纯化后,分别以重组蛋白pET-32a-VP0与pET-32a-VP1作为包被抗原,采用棋盘滴定法建立两种间接ELISA检测方法,并进行重复性、敏感性、特异性实验和临床检测。结果显示重组蛋白pET-32a-VP0与pET-32a-VP1抗原的最佳包被浓度分别为2 mg/mL和2.5 mg/mL,反应条件均为37℃、1 h;封闭液最佳条件为5%脱脂乳,37℃、2 h;血清最佳孵育条件为1∶200,37℃、1 h;二抗最佳孵育条件分别为1∶20000和1∶15000,37℃、1 h;最佳显色时间为10 min,两种间接ELISA检测方法临界值分别为0.306和0.277。试验结果表明本研究成功建立了能够有效检测PKV血清特异性抗体的间接ELISA方法,且方法具有重复性好、敏感性高、特异性强、稳定性好等特点,对今后PKV的临床诊断及抗体检测试剂盒的开发奠定了重要基础。
- 沈俊强张莉萍于瑞明王永录潘丽刘霞刘新生
- 关键词：VP1原核表达间接ELISA
- RT‑RPA与侧向流动层析技术相结合的猪嵴病毒快速检测方法及其检测试剂盒
- 本发明公开了一种RT‑RPA与侧向流动层析技术相结合快速检测猪嵴病毒的特异性引物和探针，建立了RT‑RPA与侧向流动层析技术相结合的猪嵴病毒快速检测方法，该方法最低可检测到6.4×10<Sup>3</Sup>copies...
- 刘新生张永光王永录方玉珍周鹏刘占旭
- 文献传递
- 一种口蹄疫病毒抗原、表达口蹄疫病毒抗原的基因及其重组载体和重组乳酸乳球菌
- 本发明提供了一种口蹄疫病毒抗原、表达口蹄疫病毒抗原的基因TB1‑Co1及其重组载体和重组乳酸乳球菌，属于基因工程疫苗技术领域，所述抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。经动物免疫试验证实，本发明的口蹄疫病毒抗原具...
- 潘丽张中旺吕建亮张富东马中元刘新生周鹏王永录张永光
- 文献传递
- 一种检测猪德尔塔冠状病毒抗体管式磁微粒化学发光试剂盒及其应用
- 本发明提供了一种检测猪德尔塔冠状病毒抗体管式磁微粒化学发光试剂盒及其应用，属于体外诊断产品技术领域。所述试剂盒包括偶联猪德尔塔冠状病毒N蛋白的磁微粒悬浊液和酶标抗体溶液。与商品ELISA检测试剂盒相比，本发明提供的基于N...
- 刘新生林密包艳芳张莉萍潘丽何莉王永录李善涛方玉珍潘晓乐周鹏蒋涛张中旺李昕吕建亮孙燕燕杨光郭慧琛张永光
- 细胞免疫检测方法研究进展被引量：2
- 2011年
- 细胞免疫在机体的免疫过程中发挥着重要的作用,掌握细胞免疫的各个过程对全面了解机体免疫反应、监测抗原变异、正确理解病原体致病的分子机制、自身免疫性疾病的治疗以及疫苗的研制等都具有重要的意义。笔者从体内功能检测、体外表型检测、体外功能检测3个方面系统地介绍了目前在细胞免疫检测研究中常用的检测方法,并对这些方法的优缺点进行了分析比较。
- 刘新生王永录
- 关键词：细胞免疫
