王辉
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗体库技术中辅助噬菌体的研究进展被引量：1
- 2008年
- 噬菌体抗体库作为噬菌体展示和抗体库2种技术的集合体，可以，奈需经过免疫而直接获取各种人源抗体，目前已广泛应用于生物学及医学等领域。在通常使用的噬菌粒系统中，使用野生型辅助噬菌体会导致“噬菌体污染”，使得仅有很少部分子代噬菌体带有抗体片段，这对抗体库的筛选工作非常不利。近年来，研究人员通过对噬菌体衣壳蛋白基因（g3）部分缺失、引入琥珀突变、构建新型辅助噬菌体或辅助质粒等策略，不仅有效避免了辅助噬菌体污染问题，使抗体展示效率提高了5～20倍，进而通过增加单价抗体展示在每个噬菌体表面，使抗原结合能力提高400倍，并且在第二轮筛选中即可得到有效富集（阳性克隆率超过50％）。本文综述了近年来应用在噬菌体抗体库的一些新型的辅助感染系统。
- 王辉王琰沈倍奋
- 关键词：噬菌体抗体库辅助噬菌体
- 大容量天然噬菌体抗体库的建立及多样性初步验证被引量：2
- 2008年
- 目的:构建超大容量天然噬菌体抗体库。方法:从正常人外周血和新生儿脐血中分离淋巴细胞(>180份),提取RNA,用RT-PCR分别扩增抗体可变区轻重链基因(VH和VL),通过重叠PCR技术将VH和VL连接为单链抗体ScFv形式,克隆插入到pDF噬菌粒载体,转化XL1-Blue细菌得到ScFv初级抗体库,并以高感染复数(MOI≥100)感染Cre+菌株BS1365,利用Cre/LoxP位点特异性重组原理,使VH和VL基因定向同源重组匹配,随后以低感染复数(MOI<1)感染XL1-Blue,获取次级工作库。分别用5种不同抗原进行筛选,所获阳性克隆送测序以获取抗体基因。结果:抗体V区基因得到有效扩增,初级库库容3.6×107,工作库容1.8×1011,5种不同抗原筛选均得到特异性结合噬菌体抗体;测序结果表明,所获取抗体涵盖了不同的基因亚群,进一步证明抗体库具有良好的多样性。结论:经Cre/Loxp定位重组系统成功构建了超大容量天然噬菌体抗体库,初步尝试对5种抗原进行筛选均获成功,提示该抗体库多样性较好,可用于制备人源抗体。
- 王辉黄英王琰沈倍奋
- 关键词：噬菌体抗体库CRE/LOXP重组系统单链抗体
