李良维
- 作品数：5 被引量：7H指数：1
- 供职机构：中国科学技术大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 细胞动粒蛋白Hec1启动子的结构及功能分析
- 2006年
- 细胞的分裂是一个严格调控,高度有序的过程.为了将复制后的染色体均匀、准确地传递给两个子细胞,细胞在分裂中后期受到纺锤体检验点的严格监控.Hec1定位于动粒,是纺锤体检验点调控的关键蛋白之一,它通过螺旋-螺旋结构域与其他动粒蛋白相互作用调节姐妹染色体的精确分离.为研究Hec1转录水平的调控机理,采用BLAST工具,从GenBank中搜索到了人Hec1基因上游的序列,并利用在线工具http://mbs.cbrc.jp/research/db/TFSEARCH.html提供的转录因子结合位点搜索引擎,对其5′启动子调节区段进行了分析.分析结果表明:在Hec1基因上游-200～-1序列内,存在E2F、ATF4和cAMP应答元件结合蛋白(CREB)等转录因子调控元件.在结构分析的基础上,提取HeLa细胞基因组DNA,用PCR方法克隆了Hec1基因启动子,并构建了多个含启动子不同区段的pGL3荧光素酶报告基因表达质粒.瞬时转染HeLa细胞后的结果表明,-70～-63以及-155～-144之间的启动子区对维持荧光素酶活性最为关键.凝胶迁移实验证明,这两个区段分别能够和转录因子CREB以及ATF4结合.随后,采用野生型的以及含有133位磷酸化位点突变的CREB转染HeLa细胞,通过荧光定量PCR实验发现,Hec1的表达水平分别出现明显上升和下降.该结果表明,Hec1表达的调控是通过CREB的活化来完成的.
- 李良维刘兢姚雪彪程联胜
- 关键词：动粒启动子
- 膜蛋白p185胞外区在大肠杆菌中的可溶性表达以及抗p185抗体表位的测定
- Her2／c-erbB-2基因(其产物为膜蛋白p185)是表皮生长因子受体(EGFR)基因家族的一员,在约 30％的乳腺癌中发现了其过量表达。研究证明,抗膜蛋白p185抗体可抑制或促进p185表达是与抗体识别表位直接相关...
- 李良维程联胜刘兢
- 关键词：胞外区可溶性表达大肠杆菌
- 文献传递
- 抗ErbB2工程化抗体A21表位鉴定、结构分析及其肿瘤抑制机理初步研究
- 本实验室前期工作获得了一株抗ErbB2单克隆抗体A21,并且构建了基因工程单链嵌合抗体chA21,体外和体内实验证明该抗体具有明显的抑制ErbB2高表达肿瘤细胞增殖的能力,因此在肿瘤治疗中具有潜在的应用价值。本研究联合使...
- 胡思怡朱志强李良维程联胜腾脉坤刘兢
- 关键词：ERBB2表位晶体结构
- 文献传递
- 富含二硫键的膜蛋白p185胞外区在大肠杆菌中的可溶性表达和性质鉴定被引量：7
- 2005年
- Her2/c_erbB_2基因(其产物为膜蛋白p185)是表皮生长因子受体(EGFR)基因家族的一员,在约30%的乳腺癌中发现了其过量表达。为了鉴定抗p185单克隆抗体的抗原表位并进一步研究它们的相互作用,采用PCR的方法从含Her2/c_erbB_2基因的pBabe/erbB_2质粒中扩增了p185胞外区的富含二硫键的第一、二结构域和第四个结构域。产物克隆到pGEX/4T_1载体后,转化大肠杆菌OrigamiB(DE3)pLysS菌株,用低浓度IPTG进行低温过夜诱导后将菌体压力破碎,SDS_PAGE检测表达上清,得到了可溶性表达的融合有GST的目的蛋白。经ELISA、Westernblot等方法鉴定,可溶性表达产物具有完全的抗体结合活性,且当用凝血酶把GST切掉后该活性仍然保留。p185胞外区融合蛋白的成功表达将为二硫键富含类蛋白的表达提供参考;并为将来具有肿瘤细胞生长抑制活性的抗p185单克隆抗体的抗原表位鉴定,以及为EGFR家族受体的结构和功能关系的研究打下基础。
- 李良维刘海波胡思怡梁顿程联胜刘兢
- 关键词：融合蛋白谷胱甘肽S转移酶
- 膜蛋白p185胞外区表达和性质鉴定Hecl基因肿瘤细胞中的转录调控研究
- 本文对膜蛋白p185胞外区表达和性质鉴定Hecl基因肿瘤细胞中的转录调控进行了研究。结果发现，Herceptin和Heregulin均下调了Hec1转录水平。然而他们在对SKBR-3细胞周期的影响并不相同，Hercept...
- 李良维
- 关键词：膜蛋白基因转录细胞调控肿瘤细胞
- 文献传递
