李亚栋
- 作品数：32 被引量：60H指数：6
- 供职机构：河北省农林科学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金河北省科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 番茄褪绿病毒河北株系基因组、克隆引物、侵染性cDNA及应用
- 本发明提供了番茄褪绿病毒河北株系基因组、克隆引物、侵染性cDNA及应用。属于基因工程技术领域。本发明针对石家庄地区流行的番茄褪绿病毒样本，采用分段PCR引物分别扩增并整合番茄褪绿病毒基因组RNA1和RNA2，构建了番茄褪...
- 吴志明康忱田哲娟李亚栋高亢王鹏
- 来源于西瓜银斑驳病毒的黄瓜侵染性核酸及其构建方法和应用
- 本发明公开来源于西瓜银斑驳病毒的黄瓜侵染性核酸及其构建方法和应用。本发明针对石家庄地区流行的西瓜银斑驳病毒，采用分段引物分别扩增并整合西瓜银斑驳病毒基因组L RNA、M RNA和S RNA，构建侵染性全长cDNA克隆，并...
- 康忱吴志明田哲娟李亚栋高亢王鹏宋雪吴楠
- 甘薯近缘种Ipomoea trifida (Kunth) G.Don基因组Fosmid文库构建及PCR筛选体系建立被引量：2
- 2014年
- 为挖掘有价值的基因资源,对甘薯近缘种I.trifida的基因组文库进行了研究。通过流式细胞法测定I.trifida（2x,编号DLP4597）基因组大小为531.699 Mb。以叶片为材料采用包埋法提取基因组DNA,通过物理剪切进行基因组DNA片段化并进行末端平滑化和磷酸化处理,脉冲场电泳回收33-48 kb的DNA片段,然后连接到Fosmid载体pCC1FOS（Epicentre）上,包装转化大肠杆菌EPI300,构建了I.trifida的基因组Fosmid文库,该文库包含101 952个单克隆,保存于1 062个96孔培养板中,平均插入片段35 kb,覆盖基因组约6.7倍,理论上任意片段筛出率达到99.88%。以20个96孔板为一组构建三维PCR筛选体系,共分为53个组（第53组包含22个96孔板）,每组包含1个超级池,20个板池,12个列池,8个行池,理论上最多通过93个PCR反应即可筛选到1个阳性单克隆。随机选择来自I.trifida的10个基因进行文库克隆筛选,平均阳性克隆数为8.2个,最少阳性克隆数为3个,最多为16个。
- 李昂吴志明周志林赵冬兰张安马代夫李亚栋唐君曹清河
- 关键词：基因组FOSMID文库
- 检测黄瓜白粉病抗病基因mlo的KASP引物及其应用
- 本发明涉及分子生物学和黄瓜育种技术领域，特别是指检测黄瓜白粉病抗病基因mlo的KASP引物及其应用。本发明设计了可用于检测mlo基因该插入/缺失片段不同基因型的KASP引物和包含KASP引物的试剂盒。本发明提供的KASP...
- 康忱王鹏李亚栋田哲娟赵雪芳吴志明
- 番茄核体系酵母文库的构建及ToCV CP互作蛋白的筛选
- 2025年
- 旨在从cDNA文库中筛选潜在与番茄褪绿病毒(ToCV)外壳蛋白(CP)互作的蛋白,探究ToCV的侵染机制及CP在侵染过程中的功能,以应对当前越夏、秋延后番茄生产中因番茄褪绿病毒病大肆传播而致使番茄产量和品质严重受影响的状况。以感染ToCV的Moneymaker番茄品种作为试验材料,采用Gateway技术构建感染ToCV的番茄核体系酵母cDNA文库,并构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-CP(CP-BD)。以CP为诱饵蛋白,通过核体系酵母文库筛选出上百种参与多种生理过程的潜在互作蛋白,并进一步通过一对一的酵母双杂交验证以及NCBI BLAST比对确定与ToCV CP互作的相关蛋白。构建了核体系酵母文库,初级文库总克隆数为1.60×10^(7),重组率达100%,平均插入片段长度超过1000 bp;次级文库总克隆数同样为1.60×10^(7),重组率为100%,平均插入片段长度大于1000 bp,达到质量标准,满足后续酵母杂交试验的条件。由文库筛选得到的ToCV CP互作蛋白涵盖了细胞过程、生物调节、细胞物质运输等类别,其中在病毒复制和运输、侵染宿主细胞以及调节宿主细胞的代谢和细胞周期等生物过程相关的蛋白数量较多。此外,还涉及蛋白质结合、核酸结合、水解酶活性等相关蛋白,其中RNA酶最为丰富,在病毒侵染过程中发挥重要作用。最终确定了HSPs、DnaJ与TCPs等30种与ToCV CP互作的蛋白,为后续深入研究ToCV的侵染机制及CP在侵染过程中的功能奠定了良好基础。
- 王利娜高亢康忱田哲娟李亚栋王鹏李朝炜吴志明
- 关键词：外壳蛋白GATEWAY技术酵母双杂交
- 黄瓜CC-NBS-LRR家族基因鉴定及在霜霉病和白粉病胁迫下的表达分析
- 2022年
- 【目的】对黄瓜全基因组的CC-NBS-LRR(CNL)基因家族进行生物信息学和表达模式分析,为深入研究CNL基因家族在黄瓜生长、发育和病害胁迫响应中的功能提供参考。【方法】以拟南芥CNL为参考序列,利用本地Perl语言和Pfam等软件检索黄瓜‘9930’基因组并确定黄瓜CNL基因家族成员。通过ExPASy、GSDS2.0、MEGA、MEME、Tbtools、Mev等工具对黄瓜CNL家族基因进行生物信息学分析。根据转录组数据库、霜霉病菌(Pseudoperonospora cubensis)、白粉病菌(Podosphaera xanthii)接种处理和实时荧光定量PCR技术分析该类基因的表达模式。【结果】从黄瓜全基因组中鉴定得到17个CsCNL,这些基因分布在除1号染色体外的6条染色体上,其编码蛋白与其他植物CNL结构相似,均含有CC、NBS和LRR保守结构域,蛋白质大小介于197—1148 aa,分子量在22.6—131.3 kD,等电点在5.71—8.38。共线性分析表明其中不存在片段重复和串联重复基因,多物种系统进化关系表明,CsCNL基因家族成员在葫芦科植物之间具有较高的结构和功能相似性。CsCNL启动子中存在多种与抗病相关的顺式作用元件。CsCNL表达具有组织特异性。在接种霜霉病菌2 d和5 d后,Csa3G815400、Csa3G822360和Csa7G420890在抗性品种中均显著上调表达,Csa4G015850在抗性品种中下调表达,在敏感品种中显著性表现不一;在接种白粉病菌2 d和5 d后,Csa2G008000和Csa3G684170在敏感品种中显著上调表达,在抗性品种中显著下调表达;Csa4G016360、Csa7G420890和Csa7G425940在抗性品种中显著上调表达,在敏感品种中表达量无变化或显著下调。【结论】CsCNL家族成员具有组织表达特异性并且多数基因能够响应霜霉病菌和白粉病菌的胁迫。推测Csa3G815400、Csa3G822360和Csa7G420890表达量增加,Csa4G015850表达量减少可诱发抗病黄瓜品种的霜霉病抗病反应;Csa4G016360、Csa7G420890和Csa7G425940表达量增加,Csa2G008000和Csa3G684170�
- 康忱赵雪芳李亚栋田哲娟王鹏吴志明
- 关键词：黄瓜霜霉病白粉病
- 检测番茄黄化曲叶病毒病抗病基因Ty-3和Ty-3a的KASP引物及其应用
- 本发明涉及分子生物学和番茄育种技术领域，特别是指检测番茄黄化曲叶病毒病抗病基因Ty‑3和Ty‑3a基因分型的KASP引物及其应用。基因Ty‑3在其第3723位碱基的位置存在一处SNP位点，该SNP位点碱基的突变导致Ty‑...
- 康忱吴志明王鹏李亚栋田哲娟王美娥
- 一种掌叶半夏胰蛋白酶抑制剂基因、其编码的蛋白及抗虫应用
- 本发明公开了一种掌叶半夏胰蛋白酶抑制剂基因、其编码的蛋白及抗虫应用。基因的核苷酸序列表如SEQ ID NO：1所示。在培育耐抗虫转基因植物时，首先构建含有SEQ ID NO：1所示基因的重组表达载体，然后利用所得重组表达...
- 董文琦吴志明高俊平田哲娟蒲娜娜党红凯李亚栋
- 文献传递
- 检测番茄黄化曲叶病毒病抗病基因Ty-1的KASP引物及其应用
- 本发明涉及分子生物学及作物育种技术领域，特别是指检测番茄黄化曲叶病毒病抗病基因Ty‑1基因分型的KASP引物及其应用。番茄黄化曲叶病毒病抗病基因Ty‑1在第3461碱基的位置存在一处SNP位点，该SNP位点碱基的突变导致...
- 吴志明王鹏李亚栋 康忱 田哲娟王洪乐 邙光伟 杨超沙 王美娥
- 一种掌叶半夏胰蛋白酶抑制剂基因、其编码的蛋白及抗虫应用
- 本发明公开了一种掌叶半夏胰蛋白酶抑制剂基因、其编码的蛋白及抗虫应用。基因的核苷酸序列表如SEQ ID NO：1所示。在培育耐抗虫转基因植物时，首先构建含有SEQ ID NO：1所示基因的重组表达载体，然后利用所得重组表达...
- 董文琦吴志明高俊平田哲娟蒲娜娜党红凯李亚栋
- 文献传递
