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唐雪明: 作品数：24 被引量：180H指数：9; 供职机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室更多>>; 发文基金：高等学校骨干教师资助计划教育部重点实验室开放基金国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程政治法律更多>>

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碱性蛋白酶工程菌发酵条件及重组酶的纯化和性质的研究被引量：22: 2002年; 在 5L发酵罐中对重组碱性蛋白酶工程菌株BP0 71高产碱性蛋白酶的条件进行了研究 ,通过提高通气量和改变搅拌转速 ,BP0 71可在发酵 40h内达到产酶高峰 ,酶活力最高可达 2 44 80u mL。利用快速蛋白液相层析(FPLC)技术 ,建立了快速高效纯化碱性蛋白酶的方案。发酵液通过硫酸铵沉淀、DEAE A 5 0脱色及聚乙二醇浓缩得粗酶 ,再经过CM Sephadex C 5 0、Sephadex G 75柱层析后得到了单一组份的重组碱性蛋白酶 ,酶纯度提高了 76 .2倍。SDS -PAGE显示重组碱性蛋白酶分子量为 2 8kD。酶学性质研究表明 ,酶的最适作用pH为 11,最适作用温度为 6 0℃ ,具有良好的pH稳定性和热稳定性。Ca2 +、Mg2 +对酶的稳定性有促进作用 ,Hg2 +、Ag+、PMFS和DFP能强烈抑制酶的活力。; 唐雪明王正祥邵蔚蓝刘吉泉方慧英诸葛健; 关键词：碱性蛋白酶工程菌发酵条件重组酶纯化

松口蘑菌丝体蛋白质诱导细胞凋亡被引量：7: 2001年; 采用深层发酵技术培养菌丝体并提取分离出的蛋白质 ,进行体外抗人子宫颈癌HeLa细胞增殖及诱导细胞凋亡机理的研究 .试验发现松口蘑菌丝体水提液中活性蛋白质TMP在体外具有抑制肿瘤细胞增殖的作用 ,扫描电镜观察到TMP处理细胞产生明显的凋亡小体 ,TMP对细胞周期的影响是通过抑制细胞从S到G2 M期的转化来抑制HeLa细胞增殖 ,诱导细胞发生凋亡的 .DNA电泳出现以 2 0 0bp左右为单位的DNA碎片 .结果表明 :采用液体培养方法生产的松口蘑菌丝体蛋白质 ,具有显著的抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡作用 .; 刘萍陶文沂孙震唐雪明; 关键词：松口蘑细胞凋亡菌丝体抗肿瘤

利用FPLC技术建立重组碱性蛋白酶的快速纯化方案: 2002年; 在构建了以地衣芽孢杆菌为宿主的产碱性蛋白酶的工程菌BA0 71以后 ,为了给探索重组酶的性质及其稳定性奠定基础 ,利用快速蛋白液相层析 (FPLC)技术 ,建立了快速高效纯化碱性蛋白酶的方案。发酵液通过硫酸氨沉淀、DEAE A 5 0脱色及聚乙二醇浓缩得粗酶 ,再经过CM Sephadex C 5 0、Sephadex G 75柱层析后较好地得到了单一组份的重组碱性蛋白酶 ,酶纯度提高了 76.2倍。SDS PAGE显示重组碱性蛋白酶分子质量为 2 8ku。; 唐雪明沈微邵蔚蓝王正祥方惠英诸葛健; 关键词：碱性蛋白酶基因工程菌分离纯化

生物学发明及其专利保护被引量：1: 2002年; 本文参考中国专利法,欧洲专利法及美国、日本的相关专利法条文和有关国际公约讨论了生物学发明及其获得专利保护的一般方法和原则,以期帮助有关企业和科研机构能有效地对相应地发明进行专利保护。; 唐雪明王正祥方惠英诸葛健; 关键词：专利战略

诱导条件下营养因子对粗糙脉孢菌合成漆酶的影响被引量：4: 2006年; 研究了粗糙脉孢菌合成漆酶的一些重要影响因素,包括诱导剂种类、碳源、氮源。获得了粗糙脉孢菌合成漆酶的较适宜条件:以20g/L葡萄糖为碳源,2g/L硝酸铵为氮源,粗糙脉孢菌静止培养2～3d后,再加入放线菌酮(终浓度2.8μmol/L)诱导培养6～7d后产生的漆酶的最高酶活可达4～5u/mL。; 谌斌唐雪明沈微方惠英诸葛健; 关键词：粗糙脉孢菌诱导剂营养因子

粗糙脉孢菌突变菌株合成漆酶的发酵条件研究被引量：1: 2005年; 研究了影响粗糙脉孢菌突变菌株合成漆酶的一些摇瓶发酵条件,包括通气量、培养温度、甲醇浓度、Cu2+浓度等。结果表明,在500m L三角瓶中装入含150μm olL/C u2+浓度的发酵培养基B M M Y 50m L,接种后于30℃,200rm/in培养7d,用0.5%甲醇诱导,在第5天时漆酶酶活最高可达3.88u m/L。; 谌斌唐雪明沈微方惠英诸葛健; 关键词：粗糙脉孢菌突变菌株漆酶发酵条件

地衣芽孢杆菌2709和6816碱性蛋白酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达及序列分析被引量：17: 2002年; 用PCR方法从地衣芽孢杆菌 2 70 9和 6 816中扩增了碱性蛋白酶基因 (apr1和apr2 ) ,扩增的DNA片段插入到大肠杆菌载体 pET -2 8a中 ,构建成重组分泌型表达载体pAPR1、pAPR2 .pAPR1、pAPR2中碱性蛋白酶基因在大肠杆菌宿主JM 10 9(DE3)中得到表达 .SDS -PAGE分析显示融合表达产物的分子量均为 30 .5× 10 3 ,同核酸序列测定所推导的值相符 .表达产物分别占细胞总蛋白的 8.0 %和 7.5 % .2 70 9重组菌所得酶活为 12 10u/mL ,6 816重组菌所得酶活为 1175u/mL .研究发现 ,重组的碱性蛋白酶在进入大肠杆菌周质空间时可能存在前肽自动脱落的现象 .同时 ,对地衣芽孢杆菌 2 70 9碱性蛋白酶基因序列进行了测定和比较分析 ,发现与地衣芽孢杆菌 6 816碱性蛋白酶基因的同源性为 98% .图 5参; 唐雪明邵蔚蓝沈微王正祥方惠英诸葛健; 关键词：地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶基因大肠杆菌克隆

整合型碱性蛋白酶基因工程菌中抗性基因的敲除被引量：5: 2003年; 利用大肠杆菌载体pET 2 8a和穿梭载体 pHY30 0PL构建了敲除载体 pHK ,通过DNA变性技术和同源重组技术成功地敲除了整合型碱性蛋白酶基因工程菌BP0 71中的卡那霉素抗性基因 (Kanr) ,得到 11株敲除卡那霉素抗性基因的阳性克隆 ,并使产酶水平保持稳定。该方法的建立为基因敲除技术在工业微生物研究中应用提供了经验。; 唐雪明邵蔚蓝王正祥方慧英诸葛健; 关键词：碱性蛋白酶抗性基因基因敲除

地衣芽孢杆菌感受态细胞的诱导形成及其高效电转化方法被引量：11: 2002年; 通过体外处理诱导地衣芽孢杆菌产生感受态性能 ,同时调整参数 ,建立了感受态细胞对质粒 pAPR的高效电转化方法 .当质粒DNA为 1.5 μg/mL、转化时电压为175 0V时 ,可得到 2 6 1个转化子 ,经鉴定均为阳性克隆子 .此为以芽孢杆菌为宿主进行高效电转化及为建立适合工业应用的分泌型表达载体提供参考 .; 唐雪明邵蔚蓝王正祥方惠英诸葛健; 关键词：地衣芽孢杆菌感受态细胞分泌型表达载体