刘卫敏
- 作品数：35 被引量：88H指数：5
- 供职机构：山西大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金山西省青年科技研究基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生理学更多>>
- 一种飞蝗脂肪酸合成酶基因LmFAS3的dsRNA及其制备方法和应用
- 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种飞蝗脂肪酸合成酶基因LmFAS3的dsRNA及其制备方法和应用。本发明飞蝗脂肪酸合成酶基因LmFAS3的dsRNA的制备方法，包括以下步骤：a，设计上游引物序列和下游引物序列，并合...
- 张建珍杨洋赵小明刘卫敏马恩波
- 文献传递
- 亚洲玉米螟反式烯酰辅酶A还原酶编码基因OfTER及其应用
- 本发明涉及生物技术领域，具体涉及亚洲玉米螟反式烯酰辅酶A还原酶编码基因OfTER及其应用。为了提供一种防治亚洲玉米螟的新靶标，利用黑腹果蝇序列，进行同源序列比对，获得一种亚洲玉米螟反式烯酰辅酶A还原酶编码基因，核苷酸序列...
- 赵小明李慧慧刘卫敏张建珍
- 蜡蚧轮枝菌入侵蚧虫表皮过程中蛋白酶和几丁质酶的作用被引量：21
- 2009年
- 研究了蜡蚧轮枝菌两个菌株No.V3.4504和No.V3.4505感染沙里院褐球蚧的外观症状、入侵体壁的过程及胞外蛋白酶与几丁质酶的作用.结果发现,用菌株No.V3.4504的孢子悬浮液感染蚧虫2d后,在虫体表面蜡粉稀薄的位置和柔软的虫体腹面出现了菌丝,5d后菌丝覆盖虫体,7d后菌丝层加厚,虫体开始死亡.显微切片观察,在体壁的外表皮、内表皮和真皮层都发现了菌丝,说明该菌已侵染成功.以蚧虫的表皮为培养基对这两个菌株连续培养8d,发现菌株No.V3.4504的蛋白酶活性在前6天连续上升,最大值为(33.94±1.61)U/g,然后降低;几丁质酶活性在前期维持在一个较低水平,d5开始增加,最大值为(7.28±1.36)U/g.菌株No.V3.4505的蛋白酶和几丁质酶的活性变化趋势与No.V3.4504相似.说明蛋白酶在菌丝侵染体壁的前期发挥了作用,降解表皮中的蛋白质,使几丁质暴露,诱导几丁质酶的大量产生,从而分解几丁质.
- 彭国良薛皎亮刘卫敏谢映平
- 关键词：蜡蚧轮枝菌蚧虫表皮蛋白酶几丁质酶
- 一株感染杨尺蠖蛹的病原真菌的分离及鉴定被引量：5
- 2016年
- 【目的】从山西省洪洞县的杨树丰产林中采集到几头自然染菌的杨尺蠖Apocheima cinerarius越冬蛹虫尸,经分离纯化得到一株病原真菌,定名为YHT01,确定该菌株的分类地位。【方法】用该菌株孢子悬浮液(1.0×108 conidia/m L)感染杨尺蠖蛹进行回接杀虫实验,扫描电镜观察菌株形态学特征,ITS序列测定并构建系统发育树对YHT01菌株进行分子鉴定。【结果】经YHT01菌株感染之后,杨尺蠖蛹节间处长出白色菌丝。该菌株在PDA培养基上的菌落呈椭圆形,白色,绒毛状,菌落背面呈橙黄色;扫描电镜观察结果显示,该菌株孢梗束呈扫帚状,分生孢子小,卵形至椭圆形,壁光滑,大小为(2.1-3.4)μm×(1.1-1.8)μm。该菌株的r DNA-ITS序列与Gen Bank中粉棒束孢Isaria farinosa(Holm:Fr.)Fr.(AB233337)的序列相似性达99%,在系统发育树的同一分支上。【结论】YHT01是杨尺蠖蛹的一株病原真菌,粉棒束孢Isaria farinosa。
- 王妮姚红青谢映平刘卫敏张永杰
- 关键词：病原真菌拟青霉菌种鉴定
- 一种飞蝗脂肪酸合成酶基因LmFAS2的dsRNA及其制备方法和应用
- 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种飞蝗脂肪酸合成酶基因LmFAS2的dsRNA及其制备方法和应用。本发明飞蝗脂肪酸合成酶基因LmFAS2的dsRNA的制备方法，包括以下步骤：a，设计上游引物序列和下游引物序列，并合...
- 赵小明杨洋张建珍刘卫敏马恩波
- 文献传递
- 一种飞蝗脂肪酸延伸酶基因LmElo的dsRNA及其制备方法和应用
- 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种飞蝗脂肪酸延伸酶基因LmElo的dsRNA及其制备方法和应用。本发明飞蝗脂肪酸延伸酶基因LmElo的dsRNA的制备方法，包括以下步骤：a，设计上游引物序列和下游引物序列并合成；b...
- 张建珍杨洋赵小明刘卫敏马恩波
- 文献传递
- 飞蝗几丁质酶5-1抗体制备及表达特性分析被引量：1
- 2018年
- 【目的】通过制备飞蝗(Locusta migratoria)几丁质酶5-1(LmCht5-1)的多克隆抗体,建立飞蝗体内LmCht5-1蛋白水平检测方法,分析LmCht5-1在4龄飞蝗的表达特性及组织定位。【方法】采用MEGA软件对LmCht5-1和LmCht5-2氨基酸序列进行比对,利用Expression网站对LmCht5-1氨基酸序列进行抗原表位预测分析,获得LmCht5-1抗原结构区域;以飞蝗c DNA为模板,通过PCR扩增LmCht5-1的抗原片段;同时通过酶切连接构建含有鸡血清白蛋白OVA的载体p ET32a-OVA;然后通过酶切连接将LmCht5-1插入到p ET32a-OVA载体构建p ET32a-OVA-LmCht5-1;将p ET32a-OVA-LmCht5-1转入表达菌株BL21(DE3)中,IPTG诱导表达重组蛋白OVA-LmCht5-1;利用Ni-NTA纯化后免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体。通过ELISA方法检测抗体效价;利用Western blot检测抗体特异性。提取4龄飞蝗不同日龄表皮,采用Western blot分析LmCht5-1蛋白表达模式。对4龄飞蝗注射ds LmCht5-1,检测蛋白水平LmCht5-1表达量,并通过免疫组化方法对LmCht5-1进行定位及功能分析。【结果】通过LmCht5-1和LmCht5-2序列比对和抗原表位预测分析,获得LmCht5-1的471—533AA可作为抗原区域;通过酶切连接分别获得p ET32a-OVA和p ET32a-OVA-LmCht5-1。经诱导表达和纯化后获得重组蛋白OVA-LmCht5-1,分子量为71.34 k D;免疫后制备多克隆抗体OVA-LmCht5-1,ELISA检测效价为1﹕102 400。多克隆抗体OVA-LmCht5-1用于Western blot检测时可特异性识别LmCht5-1,与LmCht5-2蛋白无交叉反应。利用Western blot方法检测4龄若虫各日龄表皮中LmCht5-1蛋白的表达,发现LmCht5-1蛋白随发育日龄其表达量逐渐增加,在蜕皮当天达到峰值,蜕皮后快速降至最低点。对飞蝗若虫N4D2注射ds LmCht5-1,检测到在N4D5时,LmCht5-1的转录水平和蛋白水平均被显著抑制,抑制率分别为70.0%和73.6%。选取注射ds LmCht5-1和ds GFP的4龄飞蝗表皮,进行免疫组化实验显示LmCht5-1定位于表皮细胞和旧表皮中,其功能失活�
- 张婷婷柳伟伟高璐李任建付穗业刘晓健李大琪李大琪刘卫敏张建珍
- 关键词：飞蝗抗体制备WESTERNBLOT
- 飞蝗几丁质脱乙酰基酶基因的分子特性和生物学功能被引量：3
- 2017年
- 【目的】几丁质脱乙酰基酶(chitin deacetylase,CDA)是昆虫几丁质代谢系统的重要酶系,研究飞蝗(Locusta migratoria)几丁质脱乙酰基酶基因的分子特性和生物学功能,为新型农药靶标筛选提供科学依据。【方法】基于飞蝗转录组数据库,获得几丁质脱乙酰基酶基因的c DNA序列,将其与飞蝗基因组进行比对,绘制基因结构图。将其与赤拟谷盗CDAs序列进行比对,并采用Blast P和SMART软件进行功能域预测。将已鉴定的飞蝗CDAs分别与赤拟谷盗、果蝇、冈比亚按蚊、家蚕、中华稻蝗和云杉卷叶蛾的同源序列进行聚类分析,采用MEGA 5.02软件中的neighbor-joining(NJ)法构建系统发育树。采用reverse transcription quantitative PCR(RT-q PCR)方法检测分析CDA在飞蝗5龄若虫不同组织部位和不同发育日龄表皮中的表达特性,进一步采用RNA干扰(RNAi)技术研究其对飞蝗蜕皮发育的影响。采用化学检测法测定其几丁质含量。利用透射电镜(TEM)观察其对表皮几丁质排列的影响。【结果】在飞蝗转录组数据库中搜索获得3条几丁质脱乙酰基酶基因全长c DNA序列,生物信息学分析发现其均具有信号肽,开放阅读框包含几丁质结合区(Ch BD)和几丁质脱乙酰基催化域(CDA)2个功能域。与赤拟谷盗CDAs序列比对结果表明飞蝗2条CDAs部分序列存在差异,且与赤拟谷盗Tc CDA5的2个剪切子差异序列位置一致,显示2条序列为2个剪切子。聚类分析结果表明,3条序列分别与6种昆虫CDA4和CDA5以较高的置信度聚为一支。分别将其命名为Lm CDA4、Lm CDA5a和Lm CDA5b。不同组织部位表达结果表明Lm CDA4和Lm CDA5在飞蝗前肠、后肠和表皮中高表达,Lm CDA5在脂肪体中也有较高的表达;CDAs在5龄不同天数表皮表达结果显示Lm CDA4和Lm CDA5在5龄第1和第2天的表皮中表达量较高,之后逐步下降。注射ds Lm CDA4或ds Lm CDA524 h后,与对照组相比,基因表达量显著降低,沉默效率达�
- 于荣荣丁国伟刘卫敏张敏赵小明韩鹏飞马恩波张建珍
- 关键词：飞蝗日龄表型
- 飞蝗内表皮蛋白基因LmAbd-5的表达与功能分析被引量：7
- 2017年
- 【目的】基于飞蝗(Locusta migratoria)转录组数据库获得内表皮蛋白(endocuticle structural glycoprotein)基因Lm Abd-5的c DNA序列,分析该基因的序列特征和m RNA表达特性,采用RNAi方法分析其生物学功能,探讨其在飞蝗表皮形成中的作用,为害虫防治提供新的分子靶标。【方法】采用生物信息学方法搜索飞蝗转录组数据库,获得Lm Abd-5 c DNA全长序列并克隆验证;采用Signal P在线软件分析蛋白的信号肽,利用SMART网站预测其功能域,使用MEGA 7.0软件中neighbor-joining(NJ)方法,与其他昆虫同源序列进行聚类分析;采用reverse-transcription quantitative PCR(RT-q PCR)方法检测Lm Abd-5在飞蝗5龄第2天若虫不同组织部位和5龄不同发育时期体壁组织中的表达情况,揭示其组织和时期表达模式;采用RNA干扰(RNAi)技术及透射电镜技术(TEM)观察沉默Lm Abd-5后对飞蝗生长发育和表皮结构的影响。【结果】通过搜索得到Lm Abd-5 c DNA全长序列并进行了克隆和测序验证,获得520 bp全长c DNA序列,其中ORF为303 bp;基因结构分析显示该基因含有3个外显子;功能域分析发现其含有1个信号肽和1个几丁质结合域(chitin binding domain 4,Cht BD4),与沙漠蝗、白蚁、赤拟谷盗等的Abd-5结构类似;BLAST分析结果表明Abd-5在昆虫中高度保守,飞蝗与沙漠蝗Abd-5序列一致度高达81%;对其保守基序进行Web Logo分析发现Lm Abd-5属于表皮蛋白CPR家族中的RR-1亚类;聚类分析结果显示,Lm Abd-5与沙漠蝗和白蚁的Abd-5显示出较近的亲缘关系;RT-q PCR结果显示Lm Abd-5在前肠、后肠、气管和体壁等由外胚层形成的组织中高表达,而在胃盲囊、中肠、马氏管、脂肪体和翅芽中低表达或不表达;不同时期表达分析发现,Lm Abd-5在4龄若虫蜕皮后0—72 h(5龄早期)具有高表达,其中蜕皮后72 h时达到最大表达量,随后表达量急剧降低(96—168 h),其表达时期与内表皮形成时间一致;采用RNAi技术分析该�
- 赵小明贾盼勾昕刘卫敏马恩波张建珍
- 关键词：飞蝗表皮蛋白RNAI透射电镜
- 日本松干蚧(同翅目:松干蚧科)发育过程中形态、习性及天敌被引量：11
- 2015年
- 【目的】研究日本松干蚧各龄期在我国3个气候区的发生时间、形态特征、生活习性及天敌昆虫,为有效监测日本松干蚧发育和种群动态、确定最佳的防治时期提供依据。【方法】根据日本松干蚧在我国的分布现状,选择辽宁省抚顺市(LNFS)、山东省青岛市(SDQD)和浙江省金华市(ZJJH)作为3个气候区的代表,于2011—2013年,在日本松干蚧危害的林区布点,采用野外连续调查和室内显微镜检相结合的方法进行研究。【结果】1)日本松干蚧在3个气候区1年都发生2代,以1龄寄生若虫越冬,但各虫态的发育历期明显不同,ZJJH种群3月上旬开始出蛰,SDQD和LNFS种群4月下旬—5月上旬才出蛰,LNFS种群在10月份进入越冬期,而ZJJH种群在12月才开始越冬。2)日本松干蚧雌雄两性在不同发育阶段具有不同的形态特征和泌蜡特点,初孵化的1龄若虫具有发达的触角和足,虫体表面未分泌蜡质;1龄若虫固定寄生后,开始分泌白色蜡丝,隐蔽于树皮缝隙下;2龄若虫的触角、眼和足均消失,虫体表面具有薄的蜡质层,称"珠形期";春季2龄若虫大量取食后,虫体膨大部分暴露,可见虫体表面蜡质,为"显露期";雄性3龄若虫具有发达的触角和足,初期爬行灵活,寻找化蛹场所,随后虫体表面的蜡腺分泌白色蜡丝,形成蜡茧;在蜡茧内经历预蛹和蛹期2个阶段;雄成虫头部具有1对长的触角和1对复眼,胸部具1对前翅,后翅退化为平衡棒,腹部的第7腹节背面有成簇的柱状管腺分泌白色的长蜡丝,腹部末端具交配器;雌成虫与3龄雄若虫形态相似,但胸部和腹部肥大;雌成虫初期体表泌蜡不明显,交尾后,分泌蜡丝形成卵囊。3)日本松干蚧的天敌昆虫已记录14科59种,其中半翅目的花蝽科、脉翅目的草蛉科和鞘翅目的瓢虫科是主要类群。【结论】本研究首次系统描述了日本松干蚧各龄期的发育过程和形态特征变化,特别是2龄若虫珠形期和�
- 刘卫敏谢映平薛皎亮张艳峰田芬杨钤吴俊唐喜军耿以龙张英伟赵常胜
- 关键词：日本松干蚧天敌昆虫
