郑铁龙
- 作品数：10 被引量：11H指数：2
- 供职机构：首都医科大学更多>>
- 发文基金：北京市科委基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- JC病毒蛋白VP3原核表达载体的构建及诱导表达被引量：1
- 2009年
- 目的构建JC病毒蛋白VP3原核表达载体,并观察其表达情况。方法通过聚合酶链式反应(PCR)获得VP3基因,将其连接到pGEM-T载体,测序正确后插入至原核表达载体pET-32a(+)中,转化BL21大肠杆菌,IPTG诱导,并通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blot免疫印迹分析鉴定融合蛋白的表达情况。结果扩增获得VP3基因片段,成功构建了大肠杆菌原核表达JC病毒VP3载体。经IPTG诱导,得到了分子质量为59 ku的目的蛋白,Western blot证实其具有良好的抗原性。结论本研究成功表达了VP3蛋白,对于研究VP3蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了的基础。
- 李小权毛羽郑铁龙成军张树林王琦李兴旺
- 关键词：JC病毒VP3蛋白原核表达
- JC病毒t抗原的融合蛋白表达及抗体制备
- 2009年
- 目的构建JC病毒t抗原的原核融合蛋白表达载体，表达并纯化该融合蛋白。方法采用PCR方法从患者脑脊液中扩增JC病毒t抗原，测序正确后再克隆入pET32a（＋）质粒，构建pET32a（＋）-t表达重组体，并诱导表达t抗原融合蛋白。大量制备该融合蛋白并以镍柱亲和层析纯化。然后以纯化蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。结果pET32a（＋）-t表达出相对分子质量为41000左右的重组蛋白。十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SD-PAGE）分析显示，异丙基-β-D硫代半乳糖苷诱导后3．5～20．0h融合蛋白均高水平表达。Western印迹证实具有良好的抗原性，免疫BALB／c小鼠后，成功制备了鼠多克隆抗体。结论成功构建原核表达载体pET32a（＋）-t，表达纯化t抗原融合蛋白，成功制备了JC病毒小包膜蛋白t的抗体，为进一步流行病学调查及该基因的功能研究奠定了基础。
- 郑铁龙王殿丽李兴旺毛羽洪源王琦成军
- 关键词：JC病毒抗体生成重组融合蛋白质类
- JC病毒小包膜蛋白VP2抗原及鼠多克隆抗体的制备
- 2010年
- 目的构建JC病毒小包膜蛋白VP2的原核表达载体，表达纯化VP2蛋白，并制备其抗体。方法用PCR方法从患者脑脊液中扩增JC病毒小包膜蛋白VP2基因，测序正确后克隆入pET-32a（＋）原核表达载体，转化BL21大肠埃希菌，用异丙基-G—D硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达该蛋白并纯化。纯化的VP2蛋白免疫BALB／c小鼠，制备鼠多克隆抗体。结果将pET-32a（＋）-VP2重组表达载体分别转化BL21大肠埃希菌，经IPTG诱导后，表达出相对分子质量为58．5×10^3左右的重组融合VP2蛋白。聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示，IPTG诱导6～10h重组蛋白表达水平较高。Western印迹证实其具有良好的抗原性，且免疫BAI．B／c小鼠后成功制备了鼠多克隆抗体。结论成功构建原核表达载体pET-32a（＋）VP2并获得纯化VP2融合蛋白，并制备JC病毒小包膜蛋白VP2抗体，为进一步对VP2蛋白的功能及JC病毒流行病学调查等研究奠定了坚实的基础。
- 王殿丽郑铁龙王琦向天新成军毛羽卢联合李兴旺
- 关键词：JC病毒病毒抗原病毒抗体病毒蛋白质类
- 不同病因肝硬化患者血清脂联素水平的差异被引量：2
- 2008年
- 目的探讨不同病因肝硬化患者血清脂联素水平的差异。方法采用放射免疫法测定研究对象血清脂联素水平,并比较不同病因肝硬化患者血清脂联素水平的差异。结果乙肝肝硬化组、丙肝肝硬化组脂联素水平与对照组相比较差异无统计学意义(P>0.05);酒精性肝硬化组脂联素水平明显高于对照组(P<0.05);非酒精性脂肪性肝硬化组脂联素水平明显低于对照组(P<0.05)。结论酒精性肝硬化患者血清脂联素水平升高,可能与胰岛素抵抗有关,而血清脂联素水平的降低可能是非酒精性脂肪性肝硬化的始动因素之一。
- 李锟郑铁龙
- 关键词：肝硬化脂联素
- 不同病因肝硬化患者血清瘦素水平的差异被引量：2
- 2009年
- 目的探讨不同病因肝硬化患者血清瘦素水平的差异。方法采用放射免疫法测定研究对象血清瘦素水平,并比较不同病因肝硬化患者血清瘦素水平的差异。结果各肝硬化组血清瘦素的水平明显高于正常对照组(P<0.01)。乙肝肝硬化组与丙肝肝硬化组相比较,瘦素水平无明显差异(P>0.05);酒精性肝硬化组与非酒精性脂肪性肝硬化组相比较,瘦素水平无明显差异(P>0.05);酒精性肝硬化组与非酒精性脂肪性肝硬化组瘦素水均高于乙肝肝硬化组与丙肝肝硬化组(P<0.05)。结论肝硬化患者血清瘦素水平明显升高,酒精性肝硬化与非酒精性脂肪性肝硬化患者血清瘦素水平升高更加明显,其原因除肝星状细胞(HSC)激活外,与存在瘦素抵抗有关。
- 李锟郑铁龙
- 关键词：肝硬化血清瘦素酒精性肝硬化
- 丙型肝炎病毒NS5A反式激活蛋白7的重组表达及生物信息学分析被引量：2
- 2007年
- 目的构建丙型肝炎病毒NS5A反式激活蛋白7(NS5ATP7)的原核表达载体,诱导其在大肠埃希菌中的表达,并初步探讨其结构与功能。方法应用逆转录PCR(RT-PCR)技术,以HepG2细胞mRNA为模板,扩增获得NS5ATP7基因片段,连接到pGEM-T载体,酶切鉴定及测序正确后插入至原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导以获得NS5ATP7融合蛋白的表达,SDS-PAGE、Western blot免疫印迹分析和证实该融合蛋白表达的特异性,并应用生物信息学方法对该融合蛋白的结构和功能进行预测。结果利用RT-PCR扩增获得大小为891bp的NS5ATP7基因片段,插入pET-32a(+)表达载体,转化BL21宿主菌,经IPTG诱导,成功获得了大小为48kD的目的蛋白,Western blot进一步证实了该蛋白具有特异性免疫反应识别。生物信息学预测结果显示此蛋白富含螺旋结构,为非跨膜蛋白,无信号肽。结论利用大肠埃希菌BL21成功表达了NS5ATP7融合蛋白,结合生物信息学分析结果,为研究NS5ATP7蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了基础。
- 李晓光成军洪源张延峰郑铁龙王慧芬
- 关键词：肝炎病毒NS5A反式激活计算生物学
- 丙型肝炎病毒NS5A反式激活基因1的原核表达及多克隆抗体制备被引量：3
- 2008年
- 目的构建丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A的反式激活蛋白1(NS5ATP1)基因的原核表达载体并诱导其表达,纯化表达的融合蛋白并制备多克隆抗体。方法从pGBKT7-NS5ATP1质粒上切取NS5ATP1基因,克隆入pET32a(+)质粒,构建pET32a(+)-NS5ATP1表达载体,IPTG诱导融合蛋白表达。亲和镍柱层析纯化该融合蛋白后,免疫新西兰兔,获得多克隆抗体,ELISA法检测多抗效价。结果以pET32a(+)-NS5ATP1表达载体分别转化DH5α、BL21菌后,经IPTG诱导,成功获得分子量为56kD左右的重组蛋白。SDS-PAGE分析显示,IPTG诱导4.5h时重组蛋白的表达量最高。Western blot证实其具有良好的抗原性。用该蛋白成功免疫新西兰白兔,获得了该蛋白的多克隆抗体,ELISA检测其效价>1∶512000。结论成功构建原核表达载体pET32a(+)-NS5ATP1,表达纯化NS5ATP1融合蛋白并制备了该蛋白的多克隆抗体,为进一步的研究奠定了基础。
- 郑铁龙成军洪源李晓光张延峰
- 关键词：肝炎病毒丙型原核表达
- NS5ATP1基因抗原抗体制备及功能的研究
- 研究背景与目的丙型肝炎病毒（HCV）感染所致丙型肝炎是慢性肝病及肝细胞癌（HCC）的原因之一；但迄今尚无疫苗和特异有效的治疗方式。深入研究丙型肝炎病毒的感染与致病机制具有重大的现实意义。我们在通过对过表达丙型肝炎病毒非结...
- 郑铁龙
- 关键词：重症肝炎坏死氧化应激
- 文献传递
- JC病毒Agnoprotein在大肠埃希菌中的表达及纯化被引量：2
- 2008年
- 目的构建JC病毒Agnoprotein基因的原核表达载体,表达纯化该蛋白。方法PCR扩增患者脑脊液中JC病毒晚期调节蛋白Agnoprotein基因,测序正确后克隆入pET-32a(+)原核表达载体,诱导表达Agnoprotein蛋白并纯化。结果pET-32a(+)-Agnoprotein表达出预期分子量大小的具有免疫活性的重组融合蛋白。结论成功地表达纯化了Agnoprotein融合蛋白,为进一步研究其生物功能奠定了基础。
- 郑铁龙成军毛羽李兴旺洪源
- 关键词：JC病毒AGNOPROTEIN原核表达
- 丙型肝炎NS5ATP6基因原核表达载体的构建和表达纯化及多克隆抗体的制备
- 2008年
- 目的构建丙型肝炎病毒NS5A蛋白反式激活蛋白6基因的原核表达载体并进行表达、鉴定。方法从已构建的pGBKT7-NS5ATP6质粒上切取NS5ATP6基因,再克隆入pET32a(+)质粒,构建pET32a(+)-NS5ATP6表达重组体。结果以pET32a(+)-NS5ATP6重组体分别转化DH5α和Rosseta大肠埃希菌后,经IPTG诱导,pET32a(+)-NS5ATP6表达出分子量为41KD左右的重组蛋白。免疫动物并经Westernblot检测证实其具有良好的抗原性。结论成功地构建了原核表达载体pET32a(+)-NS5ATP6,诱导表达和纯化了NS5ATP6融合蛋白,并制备了该蛋白的多克隆抗体,为下一步该基因功能研究奠定了基础。
- 郑铁龙成军洪源
- 关键词：丙型肝炎病毒原核表达
