目的:低风险微小乳头状甲状腺癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)的检出增加与过度诊断和治疗有关。N^(6)-甲基腺苷(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)修饰导致的微RNA(microRNAs,miRNA)失调在肿瘤转移和进展中发挥重要作用。然而,m^(6)A靶向miRNAs在PTC中的功能仍不清楚。本研究旨在探究m^(6)A-miR-139-5p在PTC中的表达调控机制,明确其与PTC转移的关联,并评估其作为PTC转移诊断生物标志物的潜力,为PTC的精准诊断和治疗提供实验依据。方法:通过癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)和GSE130512队列筛选与PTC转移相关的候选靶向m^(6)A-miRNA分子。收集13例PTC转移患者和18例非转移患者的临床标本,检测m^(6)A-miR-139-5p的表达水平,分析其与转移的相关性。通过实验探究脂肪质量和肥胖相关蛋白(fat mass and obesity-associated protein,FTO)对pri-miR-139甲基化水平及加工过程的影响,明确其对miR-139-5p表达的调控作用。在TPC-1细胞中,通过四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)实验检测miR-139-5p过表达对FTO过表达介导的细胞增殖的影响。通过细胞侵袭实验验证miR-139-5p对PTC细胞侵袭能力的作用,并探究其是否通过靶向ZEB1/E-钙黏蛋白轴发挥功能。结果:通过比较TCGA和GSE130512队列,发现血清循环m^(6)A-miR-139-5p可作为检测PTC转移的生物指标。对13例转移和18例非转移临床标本的检测表明,FTO通过降低其甲基化水平抑制pri-miR-139的加工,导致miR-139-5p在PTC中表达失调(P<0.05)。在TPC-1细胞中,MTT实验显示miR-139-5p过表达可部分逆转FTO过表达介导的细胞增殖(P<0.05)。此外,miR-139-5p通过靶向ZEB1/E-钙黏蛋白轴抑制PTC细胞的侵袭能力,而FTO过表达可部分削弱这种抑制效应。结论:血清循环miR-139-5p可作为评估PTC转移的潜在标志物,FTO通过调控pri-miR-139的m^(6)A修饰影响miR-139-5的表达及功能,但其临床价值需进一步验证。
目的:膝骨关节炎(osteoarthritis,OA)是最常见的慢性退行性疾病之一,主要病理变化为软骨细胞凋亡和细胞外基质退化。机械刺激可以延缓软骨细胞凋亡并促进细胞外基质合成,但其分子机制不明确。本研究旨在探究初级纤毛(primary cilia,PC)在介导机械刺激影响OA进展中的作用。方法:体内实验:构建鞭毛内转运体88(intraflagellar transport 88,IFT88)条件性敲除的IFT88flox/flox小鼠(即初级纤毛缺失小鼠),并以野生型小鼠为对照。通过外科手术(前交叉韧带横切术联合内侧半月板失稳术)建立OA模型,进行跑台运动干预,通过苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、番红O-固绿染色和免疫组织化学评估OA进展,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)染色评估凋亡水平,转棒测试评估下肢功能。体外实验:提取小鼠关节软骨原代细胞,使用慢病毒转染技术降低IFT88基因表达,构建初级纤毛缺失细胞模型;使用白细胞介素-1β诱导炎症环境,通过细胞拉力器施加循环拉伸应变(cyclic tensile strain,CTS)模拟机械负荷对关节软骨的影响;免疫荧光和蛋白质印迹法检测II型胶原α1链(type II collagenα1 chain,COL2A1)、初级纤毛、IFT88和半胱天冬酶12(cysteinyl aspartate specific proteinase 12,caspase-12)的蛋白质表达水平,反转录聚合酶链反应检测COL2A1 mRNA水平,流式细胞术检测细胞凋亡程度。结果:体内实验显示:野生型OA小鼠经跑台运动后国际骨关节炎研究学会(Osteoarthritis Research Society International,OARSI)评分和凋亡阳性细胞率显著降低,且平衡能力改善;而IFT88敲除的OA小鼠未表现出显著变化。体外实验发现:CTS可抑制白细胞介素-1β诱导的原代关节软骨细胞外基质降解和细胞凋亡;但在初级纤毛表达受抑制的细胞中,上述保护作用消失。结论:机械刺激通过初级纤毛�
