鲁雅洁
- 作品数：51 被引量：124H指数：7
- 供职机构：南京医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省“科教兴卫工程”医学重点人才基金江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程文化科学更多>>
- 斑马鱼胚胎早期发育过程中WFS1基因的时空表达特征分析
- 哺乳动物细胞中WFS1(Wolfram syndrome 1)基因编码一类膜结构的转运蛋白,其主要功能与膜物质运输、蛋白加工和胰岛β细胞的抗凋亡密切相关。WFS1突变可导致在临床上以1型糖尿病、视神经萎缩、双侧重度耳聋和...
- 魏钦俊姚俊鲁雅洁曹新
- 关键词：斑马鱼
- 文献传递
- 人催乳素受体胞外区蛋白的原核表达及纯化
- 2010年
- 目的:建立人催乳素受体的原核表达系统,并在大肠杆菌中获得表达。方法:由RT-PCR获得人催乳素受体(human prolactin receptor,hPRLR)胞外区氨基酸的编码序列,扩增并通过酶切位点修饰后克隆至pMD18-T载体,经测序正确后,切下编码序列连接到重组表达载体pGEX-4T-2中,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),用IPTG诱导重组工程菌表达,使用谷胱甘肽偶联的GSTrapFF柱亲和层析纯化重组蛋白。结果:重组菌株可以表达GST-hPRLR融合蛋白,用免疫印迹反应鉴定纯化的融合蛋白,在相对分子质量为37.6×103处有一条带。结论:利用大肠杆菌表达系统获得了较高纯度的GST-hPRLR融合蛋白,为进一步研究催乳素受体的功能和制备特异性的抗体奠定了基础。
- 刘雪瑶鲁雅洁屈芫姚俊魏钦俊曹新冯振卿
- 关键词：融合蛋白原核表达纯化
- 医学院校生物技术专业实验教学体系的改革与实践被引量：4
- 2010年
- 论述了医学院校生物技术专业进行实验教学体系改革的思路,提出新形势下生物技术专业的实验教学必须顺应社会需求,合理定位,体现特色,强化实践。结合教学实践,确立了"点、线、面至立体"的递进式实验教学新体系,并对该教学体系的进一步实施和完善进行了深入探讨。
- 姚俊曹新魏钦俊鲁雅洁
- 关键词：医学院校生物技术专业实验教学
- 基于CRISPR/Cas9技术建立敲除OSBPL2基因的HeLa细胞株被引量：2
- 2016年
- 目的 :利用CRISPR/Cas9技术构建OSBPL2基因敲除的稳定HeLa细胞株。方法 :设计3个单导向RNA(singleguide RNA,sg RNA),分别靶向OSBPL2基因的第2、3和5外显子,以PGK1.1为载体,构建出3个重组真核表达载体。分别转染HeLa细胞后,使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选,Cruiser TM敲除检测实验和测序共同检验载体靶向效率。选出靶向效率最高的质粒转染HeLa细胞,进行单克隆细胞培养,最后用Western blot鉴定敲除效果。结果:sg RNA正确插入到PGK1.1载体,靶向第2外显子的重组载体转染HeLa细胞并筛选单克隆后,细胞未检测出OSBPL2蛋白的表达。结论:敲除OSBPL2基因的稳定HeLa细胞株构建成功。
- 陈庆鲁雅洁姚俊魏钦俊曹新
- 关键词：HELA细胞株
- 常染色体显性遗传性听神经病MPZ基因序列分析被引量：2
- 2008年
- 目的:了解MPZ基因是否与1个常染色体显性遗传性听神经病中国家系的发病相关。方法:选择1个现存3代9人的常染色体显性遗传性听神经病家系为研究对象,用基因组DNA抽提试剂盒提取外周血DNA。首先,对所有家系成员DNA进行MPZ基因第3外显子的PCR扩增,扩增产物经纯化后直接测序;然后,采用相同方法对1名家系听神经病患者进行MPZ基因全部6个外显子的PCR扩增和测序分析。测序结果与标准序列对照进行突变检测。结果:所有研究对象的基因区域均扩增成功,序列分析在MPZ基因第3外显子上未检测到Thr124Met和Tyr145Ser 2个已知的突变,整个MPZ基因编码区也未见新的致聋突变。结论:该家系成员MPZ基因上未发现有意义的突变位点,提示新基因参与家系耳聋的发生。
- 周涵徐帅陈智斌鲁雅洁魏钦俊曹新邢光前
- 关键词：听神经病基因突变常染色体显性遗传
- 联合表达microRNAs抑制乳腺癌细胞增殖的载体及其构建方法和应用
- 本发明为联合表达microRNAs抑制乳腺癌细胞增殖的载体及其构建方法和应用，公开了一种核酸构建载体。本发明还公开了核酸构建载体用于制备抑制乳腺癌细胞增殖的组合物方面的应用。本发明还公开了一种真核联合表达载体pEGFPC...
- 魏钦俊曹新秦路洋姚俊鲁雅洁
- 文献传递
- 非综合征型耳聋GJB2基因和mtDNA 12SrRNA A1555G位点的突变分析被引量：15
- 2008年
- 目的:分析南京聋校散发性耳聋患者GJB2基因突变率和线粒体DNA(mtDNA)12SrRNA A1555G基因突变率。方法:收集聋校学生135名和健康对照人群162名外周血样本,PCR扩增GJB2和mtDNA 12SrRNA基因,通过限制性内切酶酶切鉴定突变热点,对PCR产物直接测序进行突变确定。结果:对GJB2检测结果显示:散发性耳聋患者样本中发现9种碱基改变(V27I、E114G、I203T V37I、176-191del16、235delC、299-300delAT、T123N和504insGCAA),其中235delC为主要突变方式,携带率为27.41%,其中纯合突变18例,杂合突变19例;162例正常对照中发现了15种碱基改变,其中4种为常见多态。散发聋135例和正常对照162例共计297例样本中未发现有mtDNA 12SrRNA A1555G位点突变存在;结论:GJB2基因突变是引起散发性非综合征耳聋患者听力损失发生的重要原因,不同人种GJB2基因的突变热点存在差异,235delC是GJB2基因在中国人中的主要致病突变位点;GJB2基因在人群中存在较多类型的突变和较多形式的多态性;在散发性耳聋中mtDNA 12SrRNA A1555G位点的突变率明显低于全国平均水平。
- 鲁雅洁程洪波邢光前曹新戴大春陈智斌冀强魏钦俊卜行宽
- 关键词：GJB2基因基因突变
- 一个母系遗传非综合征型耳聋家系线粒体12SrRNAG709A位点的突变分析被引量：2
- 2009年
- 目的通过对一个母系遗传非综合征型耳聋家系进行线粒体DNA（mitochondrialDNA，mtDNA）12SrRNA、tRNASer（UCN）以及核基因GJB2突变分析，研究mtDNA突变与遗传性耳聋的相关性。方法临床听力测试以明确诊断，收集非综合征型遗传性耳聋家系中18例母系成员和53名对照（包括6名父系亲属、7名配偶对照和40名当地无关对照）外周静脉血样本，采用聚合酶链反应和测序技术对mtDNA12SrRNA、浓NAser（UCN）和GJB2基因进行突变分析，并对发现的基因突变进行计算机辅助的二级结构模拟分析。结果测序结果表明，此家系线粒体DNA12SrRNA存在mtDNAG709A点突变，该突变未见报道；无tRNASer（UCN）基因突变；对GJB2突变分析发现4例具有299—300delAT。计算机分析显示12SrRNA的二级结构中第8、9茎环结构发生改变。结论家系中8例耳聋患者都具有线粒体12S水NAG709A位点的突变，该突变在正常人群中具有高度保守性，提示GT09A点突变与母系遗传家系成员的进行性耳聋具有相关性；10例具有G709A突变的母系遗传家系成员未出现耳聋的临床表现，提示G709A点突变可能在其他核修饰基因的协同作用下参与了听力损害的过程。
- 魏钦俊鲁雅洁张艳陈智斌邢光前曹新
- 关键词：母系遗传线粒体DNARRNA
- 常染色体显性遗传性听神经病家系候选致病基因突变筛查被引量：3
- 2012年
- 目的:了解DIAPH3基因以及25个已克隆的常染色体显性遗传非综合征型聋(DFNA)基因的已知突变是否与一个中国听神经病家系的发病有关。方法:以一个现存3代9人的常染色体显性遗传性听神经病核心家系为研究对象,对所有家系成员进行DIAPH3基因5′端非翻译区(5′UTR)的PCR扩增,1例听神经病患者进行DIAPH3、GJB2和GJB3基因全部编码区以及对其余23个DFNA基因的50个外显子进行PCR扩增,扩增产物经纯化后直接测序,筛查致病突变。结果:该家系未发现DIAPH3基因5′UTR的已知突变c.-172G>A和新的致聋突变,对GJB2、GJB3基因全部编码区及其余23个DFNA基因已知突变位点的筛查也无阳性发现。结论:结合前期工作,对照该家系成员DIAPH3基因及已克隆的25个DFNA基因的筛查结果,进一步提示该家系听神经病的发生可能是由新基因所致。
- 卢新红陈睿春鲁雅洁魏钦俊陈智斌曹新邢光前
- 关键词：听神经病基因突变常染色体显性遗传
- 在高脂血症小鼠耳蜗组织中Osbpl2蛋白的表达变化对听觉功能的影响
- 为了研究氧化固醇结合蛋白样蛋白2(Oxysterol Binding Protein-like 2, OSBPL2)基因突变致聋伴固醇代谢异常的分子致病机制,本研究在成功构建高脂血症小鼠模型的基础上,采用荧光定量PCR分...
- 姚俊魏钦俊鲁雅洁曹新
- 关键词：高脂血症耳聋
- 文献传递
