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HCV E2和HBV preS融合蛋白真核表达载体的构建及在哺乳动物细胞中的表达被引量：1: 1999年; 目的：构建丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ２和乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ｐｒｅＳ融合蛋白的真核表达载体。方法：用ＰＣＲ方法扩增ＨＢＶｐｒｅＳ和ＨＣＶＥ２蛋白基因，并将二者克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３中，用脂质体转染试剂将其转入ＣＯＳ７细胞，通过免疫荧光检测细胞瞬时表达的融合蛋白。结果：Ｅ２ｐｒｅＳ融合蛋白基因包括了全长的ＨＢＶｐｒｅＳ和ＨＣＶＥ２蛋白基因，嵌合基因长度约１．６ｋｂ。表达载体在ＣＯＳ７细胞表达出了Ｅ２ｐｒｅＳ融合蛋白。结论：构建的Ｅ２ｐｒｅＳ融合蛋白表达载体能在哺乳动物细胞中表达融合蛋白。; 谢尧陶其敏; 关键词：丙型肝炎病毒

大肠癌发生中DNA与AgNOR蛋白量变的相关性研究被引量：9: 1994年; 对９例正常大肠粘膜、４５例大肠腺瘤和２７例腺癌的组织切片进行Ｆｅｕｌｇｅｎ－ＡｇＮＯＲ结合染色，并用图象分析仪对其进行ＤＮＡ和ＡｇＮＯＲ蛋白定量检测。结果显示，随正常大肠粘膜经腺瘤到癌，其ＤＮＡ与ＡｇＮＯＲ蛋白含量逐渐增加，腺瘤组和腺癌组的ＤＮＡ与ＡｇＮＯＲ蛋白的含量之间有极显著的相关性。但无论是ＤＮＡ含量或ＡｇＮＯＲ蛋白含量，在正常组与腺瘤组和腺瘤组与腺癌组之间，都有较大的重叠范围和较多的重叠例数，而从ＤＮＡ和ＡｇＮＯＲ蛋白含量两者的相关性角度来判断，可使正常组与腺瘤组和腺瘤组与腺癌组的重叠范围明显减小，重叠例数明显减少。因此认为，用同细胞ＤＮＡ和ＡｇＮＯＲ蛋白含量相关性区分大肠良恶性病变，可使判断更为准确。; 屈汉廷谢尧陈希琳吴佐周; 关键词：肠肿瘤腺瘤腺癌嗜银蛋白 DNA

基因免疫中HBV preS对HCV E2蛋白免疫原性的调控被引量：2: 1999年; 在丙型肝炎病毒的自然感染过程中，机体无足够的中和抗体来清除循环中的ＨＣＶ，但只有高滴度的抗包膜蛋白抗体才能完全保护猩猩免受ＨＣＶ的感染〔１〕。在ｐｒｅＳ－Ｓ疫苗中，ｐｒｅＳ能显著增加Ｓ抗体的产生，使单独接种Ｓ抗原无反应的小鼠产生显著的抗ＨＢｓ反应〔２...; 谢尧陶其敏; 关键词：基因免疫 HBV PRES 免疫原性

大肠肿瘤组织印片和切片DNA及AgNOR蛋白定量的对比观察: 1995年; 用Ｆｅｕｌｇｅｎ－ＡｇＮＯＲ结合染色方法对大肠肿瘤组织印片和切片细胞的ＤＮＡ和ＡｇＮＯＲ蛋白进行染色，用图像分析进行同一细胞二者含量同步检测。结果表明，在ＤＮＡ和ＡｇＮＯＲ含量的检测中，印片样品比组织切片样品更能精确、真实地反映ＡｇＮＯＲ与ＤＮＡ含量在大肠癌发生过程中相关性变化。印片样品方法简单、出结果快，并能推广到脱落细胞和穿刺取材细胞的ＤＮＡ和ＡｇＮＯＲ含量的同步测定。; 谢尧屈汉延; 关键词：结肠肿瘤 DNA

丙型肝炎病毒E2基因激发小鼠细胞免疫的实验研究: 2000年; 目的 :研究丙型肝炎病毒E2基因接种能否诱导机体产生细胞免疫以及乙型肝炎病毒preS基因对其诱导细胞免疫能力的影响。方法 :以BALB/c小鼠的骨髓瘤细胞株 (SP2 /O)为宿主细胞 ,建立表达丙肝病毒E2蛋白的靶细胞 ,将其注射于E2基因或 preS与E2融合蛋白基因免疫的小鼠腹腔 ,记录小鼠接种瘤细胞后的存活期 ,以小鼠存活期的长短作为反映基因免疫小鼠对HCVE2蛋白细胞免疫的有无或强弱的指标。结果 :靶细胞表达了相对分子质量约为 70 0 0 0的E2蛋白 ,E2基因接种小鼠的存活期长于对照组 ,单独E2基因接种组的存活期显著长于对照组 ,也长于 preS与E2融合蛋白基因免疫组。结论 :E2基因接种能诱导细胞免疫 ,但与 preS融合后 ,其诱导细胞免疫的能力会降低。; 谢尧高建恩梁庆华陶其敏; 关键词：丙型肝炎 E2基因细胞免疫

丙型肝炎病毒E2蛋白作为酵母双杂交体系“饵”载体的构建及表达被引量：3: 2000年; 目的 :用丙型肝炎 (丙肝 )病毒 (hepatitisCvirus,HCV)胞膜蛋白 2 (envelopeprotein 2 ,E2 )胞外区片段 ,构建酵母双杂交体系中“饵”载体 ,明确其在酵母细胞中的表达 ,排除自身激活作用 ,验证其能否用于酵母双杂交体系筛选cDNA文库。方法 :设计引物 ,从本室构建的含中国株Ⅲ型HCVE2片段的载体上 ,扩增出不包含C末端跨膜区的E2片段E2 6 6 1,经EcoRI和PstI双酶切后 ,克隆到酵母双杂交的“饵”载体pAS2 1质粒上 ,构建成载体pAS2 1 E2 6 6 1。阳性克隆经EcoRI和PstI双酶切鉴定后 ,转入酵母中 ,用酵母蛋白抽提物作Western杂交 ,证实其表达 ;滤膜印记杂交验证其有无自身激活作用。结果 :所构建的载体 pAS2 1 E2 6 6 1双酶切后 ,片段大小正确 ;转入酵母后 ,提取酵母质粒 ,PCR扩增出预期大小的片段 ,Western杂交出现阳性条带 ;滤膜杂交 ,转有 pAS2 1 E2 6 6 1和阴性对照pLAM5 ' 1的酵母菌落没有激活报告基因 ,而GAL4全长的阳性对照菌落变为蓝色。结论 :含有HCVE2 6 6 1的“饵”载体构建正确 ,在酵母细胞中能表达出E2蛋白 ,并且没有自身激活报告基因的功能 ,能够应用于酵母双杂交体系。; 梁庆华蒋栋谢尧范涛陶其敏; 关键词：丙型肝炎病毒 E2蛋白

丙型肝炎病毒E2及preS融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达: 1999年; 丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｃ基因与ｐｒｅＳ２基因嵌合，嵌合基因免疫小鼠能产生抗ＨＣＶＣ蛋白的抗体，而单独接种ＨＣＶＣ基因则不能诱导小鼠产生抗Ｃ蛋白的抗体［１］。为研究ｐｒｅＳ能否增加ＨＣＶＥ２蛋白的免疫原性提供物质基础，我们在哺乳动物细胞稳定表达了Ｅ２?..; 谢尧陶其敏; 关键词：丙型肝炎病毒 E2 PRES 融合蛋白动物细胞

丙型肝炎病毒NS2-3蛋白酶基因在Sf9昆虫细胞中的表达: 2000年; HCV NS2-3 cDNA that encodes the Zn 2+ -dependent metalloprotease was amplified by RT-PCR from serum of a Chinese patient infected with HCV. By using a baculovirus expression system, the cloned NS2-3 cDNA was expressed in Sf9 insect cells. SDS-PAGE and Western blot analyses showed the NS2-3 protein product as well as the product corresponding to HCV protein cleaved from NS2-3 precursor. The results indicated that the expressed NS2-3 protein is likely of protease activity and carries out autocleavage at the NS2-NS3 junction. The expression of NS2-3 protease in Sf9 insect cells allows the study on the biological function of NS2-3 protease and constitutes the basis for testing influencing agents on NS2-3 protease activity.; 范涛谢尧梁庆华陶其敏; 关键词：HCV 蛋白酶杆状病毒表达系统

丙型肝炎病毒E2蛋白的高效表达及其临床应用: 1999年; 目的：在大肠杆菌中表达丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）Ｅ２包膜蛋白，并对其进行初步纯化。用纯化的包膜蛋白检测ＨＣＶＲＮＡ阳性血清中Ｅ２抗体，研究其检测Ｅ２抗体的敏感性和特异性。方法：将ＨＣＶＥ２蛋白基因克隆到原核表达载体中，并转化大肠杆菌。用ＩＰＴＧ诱导细菌表达Ｅ２蛋白，经离子交换层析纯化蛋白。用纯化的包膜蛋白包被微孔板，经ＥＬＩＳＡ方法检测ＨＣＶＲＮＡ阳性血清中的Ｅ２抗体。结果：在大肠杆菌表达了相对分子质量为４５０００的可溶性Ｅ２蛋白，占细菌总蛋白量的２１％，纯化后，蛋白纯度为８５％。用其检测ＨＣＶ患者血清１７１例，Ｅ２抗体的检出率为６３％。在Ｅ２抗体阳性的血清中，部分为抗ＨＣＶ阴性。结论：Ｅ２蛋白的表达及初步纯化的成功，可能用于临床检测。各基因型ＨＣＶＥ２包膜蛋白的抗体之间有交叉反应，在目前的抗ＨＣＶ诊断试剂中加入可溶性、非融合Ｅ２包膜蛋白，可以改善抗ＨＣＶ诊断试剂的特异性和敏感性。; 谢尧陶其敏; 关键词：丙型肝炎 HCV E2蛋白

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谢尧

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