吕晓慧
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
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- Armillariella tabescens EJLY2098 MAN47 -甘露聚糖酶体外分子定向进化和结构分析
- 吕晓慧
- 关键词：定向进化Β-甘露聚糖酶易错PCR
- Armillariella tabescens EJLY2098 MAN47 β-甘露聚糖酶体外分子定向进化和结构分析
- 目的：由于动物摄食、营养和饲料加工过程的特殊需求,饲用β-甘露聚糖酶需具有一定的特殊性。一是好的热稳定性,能够耐受至少80℃的制粒温度而同时在常温下具有高活性；二是饲用甘露聚糖酶需为酸性稳定同时在酸性和中性的pH范围内又...
- 吕晓慧
- 关键词：定向进化Β-甘露聚糖酶易错PCR
- 文献传递
- 一种定点突变的甘露聚糖酶及其应用
- 本发明公开了一种定点突变的甘露聚糖酶。它是由氨基酸序列为SEQ IDNO.1的来源于Armillariella tabescens的β‑甘露聚糖酶MAN47中制造多个氨基酸取代而产生的突变体，所述的氨基酸取代包括第197...
- 姚冬生虞晓丹吕晓慧胡凤娟谢春芳刘大岭
- 文献传递
- 耐高温耐酸稳定假密环菌(Armillariella tabescens)MAN47β-甘露聚糖酶体外分子定向进化被引量：2
- 2012年
- 从已经建立的易错PCR初级突变文库中筛选得到的16个兼具耐酸、高温稳定、高酶活力的克隆出发,将其作为DNA shuffling的亲本基因,利用DNA shuffling技术,结合易化筛选和96微孔板通量筛选的方法获得耐酸、高温稳定的克隆。并且,对筛选出来的耐酸高温稳定的突变子进行测序分析和同源建模,比较分析β-甘露聚糖酶突变基因序列的生物学信息。经过两轮DNAshuffling,最终筛选得到一个耐酸高温稳定突变体1108,其在90℃时酶活力还能维持在70%;在pH 3.0时酶活力维持在70%;在高温80℃和pH 4.0的条件下,酶活力是野生型的10倍;常规条件下(pH 6.0,40℃),酶活力是野生型酶的5倍。序列比对发现耐酸、高温稳定突变体1108有三个碱基发生了改变(T289A、A535T、T1085C),导致相应的氨基酸发生了改变(Ser97Thr、Val362Ala、Ile179Leu)。根据同源建模结果和氨基酸性质研究发现,突变位点位于催化中心附近,推测第97位的突变与酶的耐酸性和活性有关,第179位和第362位的突变与酶的高温稳定性有关。实验结果为进一步了解β-甘露聚糖酶MAN47的结构与功能之间的关系提供有用参考。
- 吴秀秀吕晓慧胡亚冬谢春芳刘大岭姚冬生
- 关键词：定向进化Β-甘露聚糖酶DNASHUFFLING
- 基于易错PCR的假密环菌Armillariella tabescens MAN47 β-甘露聚糖酶耐高温定向进化被引量：7
- 2009年
- 本研究利用易错PCR技术突变假密环菌Armillariella tabescens MAN47 β-甘露聚糖酶野生型基因,PCR产物与大肠杆菌-酿酒酵母穿梭表达载体pYCα上连接,在大肠杆菌DH5α中扩增后电转入酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae,构建了库容为104的初级突变体库,筛选得到耐高温最佳突变株M262。DNS法测得80oC处理30min后最大酶活力为25U/mL,较之野生型最适条件酶活力提高了4.3倍。序列分析表明,突变体有3个碱基发生了突变:T343A/C827T/T1139C,相应的氨基酸改变为Ser115Thr/Thr276Met/Val380Ala,利用SWISS-MODEL数据库同源建模显示,这3个突变氨基酸分别位于第4个β折叠的第6个氨基酸、第6个α螺旋的第1个氨基酸、第10个α螺旋和第11个β折叠之间的转角。
- 吕晓慧胡亚冬胡凤娟刘大岭姚冬生
- 关键词：定向进化Β-甘露聚糖酶易错PCR热稳定性
- 耐高温耐酸稳定A.tabescens MAN47β-甘露聚糖酶体外分子定向进化
- β-甘露聚糖酶(β-1,4-D-Mannanase;EC 3.2.1.78)是一类能够水解含β-1,4-D-甘露糖苷键的内切水解酶,属于半纤维素酶类,可水解半乳甘露聚糖、葡萄甘露聚糖、半乳葡萄甘露聚糖和甘露聚糖,产物有少...
- 吴秀秀吕晓慧胡亚冬谢春芳刘大岭姚冬生
- 关键词：分子定向进化甘露聚糖酶耐高温
- 文献传递
