刘京军
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：华南农业大学兽医学院更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪β-干扰素基因真核表达的研究
- 近年来，由病毒引起的各种传染性疾病，如蓝耳病、猪瘟、口蹄疫等，给我国的养猪业带来了巨大的损失。如何控制和治疗病毒性传染病已成为困扰我国养猪业的的重大难题之一。干扰素(Interferon，IFN)是一类动物机体产生的多功...
- 刘京军
- 关键词：毕赤酵母分泌表达抗病毒活性
- 文献传递
- 猪β干扰素基因的修饰及其蛋白活性的检测被引量：1
- 2010年
- 为获得高效表达的重组猪β干扰素,在保留编码蛋白序列的同时,对PoIFN-β基因进行毕赤酵母偏嗜性改造,使基因序列G+C的含量增加到最大限度,并将其终止密码子改为TAA。构建了酵母表达载体pPICZαC-PIB。pPICZαC-PIB经SacⅠ酶切线性化后电转导入毕赤酵母菌株X-33。对PCR鉴定为阳性的酵母菌株进行高抗性筛选,获得1株高效表达PoIFN-β酵母菌株,其表达量约258.3 mg/L,是未经密码子改造菌株表达产物的3.4倍。经SDS-PAGE和Western blotting检测,表达产物为相对分子质量约22 000和24 000的蛋白,两者均可与抗PoIFN-β阳性血清发生特异反应。将表达产物进行氨基酸测序,测得2段随机肽段与PoIFN-β的氨基酸序列完全一致。在VSV-Vero系统上检测重组PoIFN-β对水泡性口炎病毒在Vero细胞中增殖的抑制作用,其抗病毒活性为1.88×106IU/L,是未经密码子改造菌株表达产物抗病毒活性的5.6倍。用MTT法检测PoIFN-β对猪外周血淋巴细胞成熟的影响,结果表明,猪重组PoIFN-β能有效刺激淋巴细胞转化,具有良好的免疫学活性。
- 徐蕙朱艳平刘京军刘德辉郭霄峰
- 关键词：基因修饰毕赤酵母抗病毒活性MTT
