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抗ICOSL核糖体展示单链抗体库的构建被引量：4: 2013年; [目的]构建出鼠源抗ICOSL核糖体展示抗体库。[方法]通过RT-PCR从人B淋巴瘤细胞Daudi的总RNA中扩增出ICOSL胞外区基因,并将此基因插入到原核表达载体pET28a中进行表达。以表达纯化的ICOSL蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾脏提取总RNA,通过RT-PCR扩增小鼠的重链可变区和Linker(VH-linker)序列,以及轻链可变区和Linker(Vκ-linker)序列。经重组PCR将两段基因连接起来,将VH/κ与pMD19-T载体链接产物转化E.coli DH 5α,PCR鉴定并测序。[结果]VH和κ链得到正确的扩增,长度分别为421和689 bp,VH/κ连接产物正确,连接产物长度为1 079 bp。[结论]所采用的引物及反应条件能够扩增出目的基因,成功构建了鼠源抗ICOSL核糖体展示抗体库,为进行核糖体展示体外筛选抗ICOSL特异性单链抗体奠定基础。; 严浩王芳毛伟平王文倩孟素芳邵峦峦刘小綪; 关键词：单链抗体核糖体展示技术原核表达

ICOSL分子的克隆表达及ICOSL核糖体单链抗体库的构建及筛选: 本研究旨在通过运用核糖体展示技术,在鼠源性单链抗体库中筛选出抗ICOSL的特异性抗体,以期在减轻器官移植的排异反应方面能有更广阔的应用。第一,通过RT-PCR从人B淋巴瘤细胞Daudi的总RNA中扩增出ICOSL...; 严浩; 关键词：核糖体展示单链抗体; 文献传递

一种共享单车动态调度方法和系统: 本发明提出一种共享单车动态调度方法和系统，涉及城市交通优化领域。步骤包括：标定所有规定停车区域，确定所述规定停车区域的容量，构建调度系统；用户开锁；划定目标范围，其中针对被动参与调度用户，以目的地所在规定停车区域的中心点...; 罗怡君窦万峰严浩刘凌云陆诗吟; 文献传递

一种共享单车动态调度方法和系统: 本发明提出一种共享单车动态调度方法和系统，涉及城市交通优化领域。步骤包括：标定所有规定停车区域，确定所述规定停车区域的容量，构建调度系统；用户开锁；划定目标范围，其中针对被动参与调度用户，以目的地所在规定停车区域的中心点...; 罗怡君窦万峰严浩刘凌云陆诗吟; 文献传递

pcDNA3.1-GFP-LC3B真核表达载体的构建: 2015年; [目的]构建含GFP-LC3B基因的真核表达载体。[方法]从HEK293细胞中提取总RNA,以反转录得到c DNA为模板,根据Gen Bank公布的人源LC3B基因序列设计引物,通过PCR方式扩增目的基因,将基因和pc DNA3.1-GFP载体双酶切后,通过T4连接酶将基因连接到pc DNA3.1-GFP载体上,得到pc DNA3.1-GFP-LC3B真核表达载体。[结果]扩增出目的基因,构建了含目的基因的真核表达载体pc DNA3.1-GFP-LC3B。[结论]成功构建了含有人LC3B基因的真核表达载体pc DNA3.1-GFP-LC3B,为研究细胞自噬提供了基础。; 刘宣宣王文倩毛伟平严浩孟素芳王芳; 关键词：HEK293 CELLS 真核表达

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严浩