陈方园
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
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- 针对NSP4基因的shRNA抑制牛轮状病毒的体外增殖被引量：2
- 2010年
- 本研究根据牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)的NSP4基因序列,设计并构建了shRNA重组慢病毒载体RNAi-H1-89,利用脂质体介导法,将RNAi-H1-89与辅助质粒共转染293细胞,包装shRNA重组慢病毒;重组慢病毒感染MA104细胞24h后继续接种BRV,以针对LacZ基因的shRNA重组慢病毒为对照,48h后与LacZshR-NA对照比较,RNAi-H1-89明显抑制MA104细胞病变;RT-PCR检测结果表明,针对NSP4基因的shRNA可特异性抑制牛轮状病毒NSP4基因表达;病毒滴度测定表明,在转染50%、75%、95%RNAi-H1-89质粒的细胞培养上清液中,病毒滴度分别是对照组的50%、20%和10%。上述实验结果表明,针对NSP4基因的shRNA能高效地沉默NSP4基因,并且能阻断牛轮状病毒增殖。
- 陈方园王洪梅杨少华武建明高运东刘晓杨宏军王长法仲跻峰王立群何洪彬
- 关键词：SHRNA
- NSP4基因突变的重组牛轮状病毒的拯救及其鉴定被引量：1
- 2012年
- 【目的】通过反向遗传技术结合RNAi筛选和蚀斑克隆方法,拯救出毒力减弱的轮状病毒(rotavirus,RV)。【方法】以野生型轮状病毒CHLY基因组RNA为模板,通过重叠PCR方法在NSP4基因93—104 nt引入5个沉默突变核苷酸,并将毒力位点区135aa、136aa和138aa对应的核苷酸进行定向突变,构建了含有突变位点的转录质粒△pT7-NSP4/89/M。将该质粒与携带RNA聚合酶基因的重组质粒pcDNA3.1/T7-RNAP共转染已接种野生型RV病毒的MA104细胞单层,继续培养24 h,获得了携带NSP4变异基因的RV病毒粒子和野生型RV病毒粒子的混合病毒。将获得的混合病毒接种MA104细胞,通过RNA干扰和蚀斑克隆方法逐步筛选纯化以获得拯救RV。【结果】成功拯救出了NSP4基因变异的RV,该病毒在MA104细胞上的病变和致乳鼠腹泻效果较野生型RV明显减弱。【结论】通过反向遗传技术结合RNAi筛选和蚀斑克隆方法成功拯救出毒力减弱的RV;NSP4毒力位点135aa、136aa和138aa的变异对RV毒力改变和腹泻严重程度有影响。
- 杨少华何洪彬杨宏军陈方园高运东仲跻峰
- 关键词：轮状病毒反向遗传技术
- 针对NSP4基因的shRNA抑制牛轮状病毒的体外增殖
- 本研究根据牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)的NSP4基因序列,设计并构建了shRNA重组慢病毒载体RNAi-H1-89,利用脂质体介导法,将RNAi-H1-89与辅助质粒共转染293细胞,包装shR...
- 陈方园王洪梅武建明高运东刘晓杨宏军王长法仲跻峰王立群何洪彬
- 关键词：SHRNA
- 文献传递
- 针对NSP4基因的shRNA抑制牛轮状病毒的体外增殖
- 本研究根据牛轮状病毒(Bovino rotavirus，BRV)的NSP4基因序列，设计并构建了shRNA重组慢病毒载体RNAi-H1-89，利用脂质体介导法，将RNAi-H1-89与辅助质粒共转染293细胞，包装shR...
- 陈方园何洪彬王洪梅武建明高运东刘晓杨宏军王长法仲跻峰王立群
- 关键词：轮状病毒SHRNA
- 文献传递
