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蒋茜
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1
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供职机构:
江苏大学附属医院
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相关领域:
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合作作者
李明辉
江苏大学附属医院
徐静
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蒋茜
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2011
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RNAi真核表达载体上报告基因的构建及其在人结肠癌HCT-8细胞中的表达
2011年
目的:构建携带绿色荧光蛋白报告基因的pSilencer3.1-H1真核表达载体,并转染真核细胞稳定表达,为进一步应用于RNAi相关研究奠定了基础。方法:应用PCR方法从pEGFP-C1标准质粒中获得GFP基因片段,在克隆载体中鉴定、测序;用DNA重组技术将片段定向插入RNAi常用载体pSilencer3.1-H1质粒中,构建pSilencer3.1-H1/GFP重组表达载体,经PCR及酶切鉴定后,通过脂质体介导转染HCT-8真核细胞;荧光显微镜观察GFP在细胞内的表达。结果:真核表达载体pSilenc-er3.1-H1中正确插入了GFP基因片段,并在人结肠癌HCT-8真核细胞中稳定的表达。结论:成功构建了pSilencer3.1-H1/GFP真核表达载体。
李明辉
徐静
蒋茜
关键词:
绿色荧光蛋白
真核表达
HCT-8细胞
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