芦春斌
- 作品数：54 被引量：162H指数：9
- 供职机构：暨南大学生命科学技术学院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目转基因生物新品种培育专项广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 转基因植物(农产品)中转基因成分的PCR检测被引量：1
- 2006年
- 转基因(植物)食品的安全性是科学界及公众普遍关心的问题。在转基因植物研究中,根据转基因植物所带有的转基因成分的DNA序列,设计引物对耐草铵膦转基因植物中转入的转基因成分进行了PCR分析,结果表明,采用PCR扩增对外源基因和遗传标记基因的分析方法灵敏、准确。
- 芦春斌
- 关键词：转基因成分PCR分析
- 人巨细胞病毒重组基因表达质粒的构建被引量：3
- 2002年
- 目的 用基因工程技术克隆人巨细胞病毒 (Humancytomegalovirus ,HCMV)中抗原性较强的蛋白片段—gp5 2C末端和pp15 0C末端的DNA序列 ,插入pPIC9K质粒 ,构建适于酵母表达系统的重组表达质粒。方法 根据人巨细胞病毒糖蛋白gp5 2和磷酸蛋白pp15 0C末端的cDNA序列 ,设计出 2对引物。利用PCR的方法 ,以病毒培养液上清为模板 ,进行二轮PCR扩增 ,把两个目的基因串联在一起 ,将所得的DNA片段经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后用T4连接酶与pPIC9K质粒进行连接 ,然后导入大肠杆菌DH5α ,筛选出阳性转化子 ,并用PCR和双酶切鉴定阳性重组子。结果 从人巨细胞病毒培养液上清中扩增出目的基因 ,PCR反应和双酶切鉴定结果与预期相符。
- 郑育声谢琪璇潘善培芦春斌肖銮娟
- 关键词：基因表达人巨细胞病毒重组PCR
- 密码子植物化的小鼠ZP3蛋白基因人工合成被引量：1
- 2009年
- 对小鼠ZP 3蛋白基因cDNA序列进行生物信息学分析,并将其核心区分成两部分进行分部合成。设计了多对特异性的重叠引物,采用多步PCR方法合成了植物化的小鼠ZP 3蛋白基因的不同片段。再经重叠PCR技术将这两段DNA连接在一起,构成完整的ZP 3基因的编码区。DNA序列测定人工合成的基因为植物化的ZP 3基因。
- 芦春斌
- 关键词：重叠PCR
- 花生种子贮藏蛋白的热稳定性与氨基酸组成的关系被引量：8
- 2001年
- 分析两种不同蛋白类型的花生种子贮藏蛋白热稳定性 ,表明各品种类型花生种子贮藏蛋白的 3种主要组分的的热稳定性存在显著的差异 ,即伴花生球蛋白 热稳定性最高 ,伴花生球蛋白 次之 ,花生球蛋白最低。高甲硫氨酸品种类型 (汕油 5 2 3)的贮藏蛋白中无论花生球蛋白还是伴花生球蛋白 的热稳定性都高于低甲硫氨酸品种类型 (海花 1号 )相应组分的热稳定性。氨基酸分析表明 ,各品种 3种组分中 17种氨基酸中的大多数氨基酸含量无显著变化 ,并且天冬氨酸 ,谷氨酸和精氨酸的含量最高 ,三者之和可达总量的 45 %以上 :3种组分中 ,伴花生球蛋白 除了谷氨酸和精氨酸含量显著高于花生球蛋白 ,伴花生球蛋白 外 ,含硫氨基酸 (甲硫氨酸和半胱氨酸 )也明显高于后两者。 3个组分中含硫氨基酸水平与热稳定性正相关 ,即含硫氨基酸水平越高 ,其热稳定性越高。冷藏过程中含硫氨基酸高的伴花生球蛋白 不易降解、保持高热稳定性水平。
- 芦春斌黄上志傅家瑞
- 关键词：花生种子贮藏蛋白氨基酸组成热稳定性
- 植物化的猪α-乳清蛋白基因人工合成被引量：2
- 2004年
- 根据猪α-乳清蛋白基因 c DNA序列设计了多对特异性引物 ,采用循环 PCR方法人工合成了植物化的猪α-乳清蛋白基因编码区 (398bp)并对该 PCR产物进行测序。DNA序列测定结果表明 ,采用循环 PCR法扩增的产物是预期的猪 α-乳清蛋白基因编码区 ,该植物化的猪 α-乳清蛋白基因编码区可以用于植物转化 ,为猪 α-乳清蛋白基因转基因植物研究和在转基因植物中进行动物基因表达研究奠定了基础。
- 芦春斌
- 关键词：基因编码区基因CDNA基因表达扩增植物转化PCR产物
- 抗草甘膦转基因大豆对雄性生殖损伤小鼠体外受精作用的影响
- 2017年
- 用化疗药物环磷酰胺(CP)处理小鼠建立雄性生殖损伤模型,以抗草甘膦转基因大豆饲料喂食30 d,进行体外受精实验,检测其受精率及2-细胞、4-细胞、8-细胞和囊胚的形成率和优胚率,评估转基因大豆饲料对雄鼠生殖功能的潜在影响。实验结果显示,在CP处理导致的生殖损伤条件下,与非转基因大豆喂食组相比,以抗草甘膦转基因饲料喂食30 d对小鼠受精率,及其分裂形成的2-细胞、4-细胞、8-细胞和囊胚形成率和优胚率无显著(P>0.05)影响,表明CP诱导的生殖损伤状态下,抗草甘膦转基因大豆饲料喂食30 d不会对雄性小鼠的生殖功能造成损伤。
- 芦春斌张雁陈博慧林泽斌仇平乐刘标
- 关键词：转基因大豆小鼠体外受精
- 多重PCR检测转基因水稻的转基因成分被引量：26
- 2012年
- 以水稻内源基因SPS、外源抗虫基因Cry1Ab、外源抗虫基因Cry1Ab/Ac、外源抗虫基因Btc、报告基因GUS、NOS终止子和CaMV35S启动子为检测对象,设计7对引物,通过优化PCR扩增体系中不同引物浓度的配比及退火温度,建立水稻转基因成分的七重PCR检测体系。结果表明:建立的七重PCR体系能有效检测出水稻及其他作物(大豆、玉米、棉花籽、菜籽粕)中的转基因成分,检测过程简便、特异性好。
- 魏霜陈贞芦春斌马骏白卫滨吴希阳
- 关键词：转基因检测水稻
- AgNO_3和低温处理对小麦细胞GST及GR酶活性的影响被引量：5
- 2001年
- 研究了AgNO3 和低温处理对小麦悬浮细胞谷胱甘肽转移酶 (GST)及谷胱甘肽还原酶 (GR)酶活性的影响 .结果表明 ,AgNO3 和低温处理对小麦细胞再生的影响因处理时间的不同而有差异 ,在处理的4d内低温处理使再生率明显增加 ,AgNO3 处理 2d使细胞再生率显著增高 ,但处理 4d则对细胞再生无明显影响 .低温处理使细胞蛋白质含量明显升高 ,AgNO3 处理对小麦细胞蛋白质含量无明显影响 .小麦细胞GST活性随处理时间的延长而迅速降低 ,AgNO3 处理对GST活性无明显影响 ,但低温处理明显延缓GST活性降低 .AgNO3 和低温处理都使小麦细胞GR酶活性明显降低 .AgNO3 处理 2d和低温处理对细胞谷胱甘肽 (GSH )含量无明显影响 ,但在处理的第 4dAgNO3 使细胞GSH含量明显降低 .
- 杜建芳廖祥儒侯小康王俊丽陈丕铃周艳芬芦春斌王建平
- 关键词：GSTGSH小麦悬浮细胞AGNO3
- 基于颜色判定的环介导等温扩增技术检测HPV6和HPV16被引量：9
- 2011年
- 建立了一种基于颜色判定的简单、快速和灵敏的检测方法,即环介导等温核酸扩增技术(LAMP)应用于HPV6和HPV16亚型的检测。该技术设计分别对应于HPV6和16的E6和E7基因序列中6个区段的4条特异引物,在等温条件下(63℃)进行核酸扩增反应1h,在扩增前加入HNB染料(羟基萘酚蓝)作为反应指示剂,以HNB染料颜色的变化做为结果判定的标准,并经LA-320实时浊度仪和琼脂糖电泳证实。文中利用这种技术对13份已知的单重感染13种HPV不同亚型的临床样本进行了特异性分析,同时对2个含目的片段的克隆质粒的系列稀释物进行了灵敏度分析。结果显示LAMP方法特异性高,颜色法判断的灵敏度均为1000个拷贝DNA分子水平,比Real-time PCR低10～20倍,对62份宫颈刮片临床标本的HPV6和HPV16检出率和HPV分型试剂盒一致。因此,基于颜色判定的环介导等温扩增方法有望应用于人乳头瘤病毒HPV6和HPV16感染的快速筛选,具有在基层疾病预防控制中心和医院推广和应用的潜力。
- 芦春斌罗乐杨梦婕聂凯王淼马学军
- 广东分离株HPV16型L2与重组E7融合蛋白原核表达载体的构建被引量：1
- 2010年
- 分析广东分离株HPV16型的L2和E7基因结构,并对E7的4个功能区重新排列组合形成失去致癌作用但其抗原表位不改变,其命名为rE7,构建pET-28a-L2、pET-28a-rE7、pET-28a-L2-rE7、pET-28a-rE7-L24个原核表达质粒.采用PCR技术从广东分离株HPV16基因组中扩增L2基因;用重叠PCR技术人工合成rE7基因和L2-rE7、rE7-L2融合基因,并构建到原核表达载体pET-28a(+)上.成功扩增广东分离株HPV16型L2基因,经重叠PCR技术成功得到rE7、L2-rE7和rE7-L2基因并成功构建了原核表达的4个载体:pET-28a-L2、pET-28a-rE7、pET-28a-L2-rE7、pET-28a-rE7-L2.广东分离株HPV16型L2基因与中国标准株有9处不同,同源性为99.37%,其编码氨基酸序列有8处突变.成功合成失去致癌作用的基因rE7及构建4个原核表达载体.
- 芦春斌辛庆玲
- 关键词：人乳头瘤病毒16型E7基因
