李宁博
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
- 供职机构：郑州大学第一附属医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 沉默过氧化物酶体增殖子活化受体γ表达降钙素基因相关肽基因重组载体的构建与鉴定被引量：5
- 2014年
- 目的 构建与鉴定沉默过氧化物酶体增殖子活化受体γ（PPARγ）同时表达降钙素基因相关肽（CGRP）基因重组载体.方法 选用pGFP-V-RS载体,将PPARγ小干扰RNA（siRNA）寡核苷酸靶序列连接入pGFP-V-RS载体,酶切鉴定及测序正确后得到重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ;将CGRP片段与Mlu Ⅰ酶切,并与末端羟基化的线性质粒pGFP-V-RS重组连接,得到重组载体pGFP-V-RS-exCGRP.将获取的CGRP基因片段连接入线性化重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ,酶切鉴定及测序正确后得到重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP.收集第3代HEK-293细胞,将细胞分为4组：CON组：转染空载体pGFP-V-RS质粒,作为对照；SI组：转染重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ质粒；EX组：转染重组pGFP-V-RS-exCGRP质粒；DOU组：转染重组双基因载体pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP质粒.每组电极杯中加入5x106个细胞,并分别加入上述质粒2.5μl,给予直流电低压脉冲1次,时间15 ms.培养48 h后收集各组细胞,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）与Western blot检测细胞内PPAR、CGRP mRNA及蛋白的表达.结果 重组双基因载体pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP经酶切鉴定及测序结果与设计完全一致.电转染HEK-293细胞后,DOU组细胞PPARγ基因呈低表达,PPARγmRNA与其蛋白的相对表达量为0.036±0.003、0.108 ±0.031,与EX组（0.156±0.014、0.778±0.103）及CON组（0.148±0.014、0.742 ±0.143）比较,差异有统计学意义（P＜0.05）,与SI组（0.054±0.005、0.135 ±0.039）比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.DOU组细胞CGRP基因呈高表达,CGRP mRNA与其蛋白的相对表达量为1.144±0.106、1.244±0.184,与SI组（0.320±0.030、0.370±0.089）及CON组（0.444 ±0.041、0.274±0.062）比较,差异有统计学意义（P＜0.05）,与EX组（1.021 ±0.095、1.221±0.181）比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 成功构建出沉默PPARγ基因并表达CGRP基因的重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP,能够有效阻断PPARγ基因表达,同时促
- 王义生李宁博李劲峰施佳辰孙俊魁李月白赵国强
- 关键词：RNA干扰降钙素基因相关肽
- 晚期乙醇性股骨头坏死骨组织中相关基因的表达被引量：5
- 2014年
- 目的 观察晚期乙醇性股骨头坏死（ONFH）坏死区骨组织细胞中相关基因的表达.方法 收集在全髋关节置换术中切除的20个股骨头,其中,10例世界骨循环研究学会（ARCO）分期Ⅲ-C、Ⅳ期乙醇性ONFH,作为实验组;10例GardenⅢ、Ⅳ型新鲜股骨颈骨折的股骨头,作为对照组.采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）分别测定两组坏死骨组织细胞中骨形态发生蛋白-2（BMP-2）、成骨转录因子-2（Runx-2）、过氧化物酶体增殖子活化受体-γ（PPAR-y）、护骨素（OPG）、破骨细胞分化因子（RANKL） mRNA的表达.结果 实验组细胞中BMP-2、Runx-2、PPAR-γ、OPG、RANKL mRNA表达水平均较对照组明显降低,2-△△Ct值分别为0.51 ±0.04、0.46 ±0.09、0.59±0.07、0.31 ±0.04、0.52±0.06,两组间差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论 晚期（ARCOⅢ-C、Ⅳ期）乙醇性ONFH的骨组织坏死区很大,股骨头内残存的骨活性成分和细胞很少,其成骨与成脂基因表达均降低,股骨头已毁损,适于行人工髋关节置换术.
- 李明王义生王宸李宁博赵国强李月白
- 关键词：乙醇股骨头坏死晚期基因
- 晚期激素性股骨头坏死股骨头骨组织中相关基因表达
- 研究背景: 随着激素在临床上的广泛使用，其所引起的并发症也不断增多，并且已经引起医务工作者的重视，临床比较常见的骨科并发症有:骨质疏松症、股骨头缺血性坏死。目前，激素的应用已经成为非创伤性股骨头坏死的最主要原因之一，随...
- 李宁博
- 关键词：骨组织PCR技术
- 激素性股骨头坏死晚期患者中相关基因表达被引量：1
- 2015年
- 目的 观察激素性股骨头坏死（ONFH）晚期患者坏死区骨组织中相关基因的表达.方法 收集手术切除的20个股骨头,其中,10例晚期激素性ONFH作为实验组,10例头下型股骨颈骨折作为对照组.采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）分别测定两组坏死骨组织中骨形态发生蛋白-2（BMP-2）、过氧化物酶体增殖子活化受体γ（PPARγ）、护骨素（OPG）、成骨转录因子（Runx2）及核因子（NF）-κB受体活化因子配基（RANKL） mRNA的表达水平.结果 实验组坏死骨组织中BMP-2、PPARγ、OPG、Runx-2及RANKL mRNA水平均较对照组明显下调,2-△△Ct分别为0.38±0.05、0.47 ±0.05、0.44±0.06、0.37 ±0.05、0.43 ±0.05,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 晚期激素性ONFH坏死区面积大,其内残存骨活性成分很少,其成骨与成脂基因表达均下调,股骨头已毁损而不可能再生,应施以全髋关节置换术.
- 张弛王义生李宁博王宸赵国强李月白
- 关键词：股骨头坏死激素全髋关节置换术基因
