宫玉珍
- 作品数：8 被引量：9H指数：2
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- 传染性支气管炎病毒DS10株S基因分析及其杆状病毒表达产物免疫原性鉴定被引量：2
- 2011年
- 对肾型鸡传染性支气管炎病毒分离株Ck/Jiangsu/DS10/2008株(DS10株)S基因进行扩增、克隆和序列测定,并与GenBank中的其他25株参考株构建进化树进行比对分析,研究其遗传进化关系。另将S基因克隆至杆状病毒表达系统pFastBac 1载体并转染Sf9昆虫细胞进行表达,经间接免疫荧光鉴定其表达,用琼扩试验验证表达产物的反应性。S基因序列分析表明,S基因高变区域主要集中在157～230位、349～433位、787～886位之间,裂解位点序列为SHRRRRμSI。遗传进化分析表明,DS10与Vic株处于同一分支,而与H120等常用疫苗株相距较远。经间接免疫荧光检测表明,S蛋白在Sf9细胞中得到表达,琼扩试验验证表达产物具有良好的反应性,表明所表达的S蛋白具有良好的生物学活性。本研究表达的S蛋白可为传染性支气管炎诊断抗原的研制、新型疫苗的开发等提供基础材料。
- 唐应华吴培培宫玉珍王永伟何家惠侯继波
- 关键词：传染性支气管炎病毒S基因杆状病毒表达系统
- 肾型传染性支气管炎病毒的鉴定和结构蛋白的表达被引量：3
- 2011年
- 对分离自江苏省某发病蛋鸡群中1株病毒(Ck/Jiangsu/DS10/2008,DS10)进行了生物学特性鉴定。同时利用RT-PCR扩增该病毒的S基因、M基因和E基因并进行测序,与GenBank中其他参考株构建进化树,进行比对分析,研究其遗传进化关系。另将S基因、M基因和E基因克隆至杆状病毒表达系统pFastBac 1载体并转染Sf9细胞进行表达,用间接免疫荧光鉴定其表达,用琼扩试验验证表达产物的反应性。经生物学特性鉴定,DS10病毒为嗜肾型传染性支气管炎病毒(IBV)。遗传进化分析表明,各基因之间的遗传进化关系无明显相关性。间接免疫荧光检测表明,S蛋白、M蛋白和E蛋白在Sf9细胞中得到表达。琼扩试验证实,S基因和M基因的表达产物具有良好的反应性,而E蛋白未发现与阳性血清反应所产生的特异沉淀线,表明所表达的S蛋白和M蛋白具有良好的生物学活性,E蛋白可能因其自身分子质量小,在病毒中的含量较少相关。研究结果提示,现有传染性支气管炎疫苗对流行株保护效果不佳,表达的S蛋白。
- 唐应华吴培培宫玉珍王永伟于漾张道华何家惠侯继波
- 关键词：传染性支气管炎病毒S基因M基因E基因杆状病毒表达系统
- 重组禽流感M2e的鸡传染性法氏囊VP2亚单位疫苗、其构建方法及其应用
- 本发明提供了一种重组禽流感M2e的鸡传染性法氏囊VP2亚单位疫苗、其构建方法及其应用。所说的重组禽流感M2e的鸡传染性法氏囊VP2亚单位疫苗中包含带有鸡传染性法氏囊病毒VP2基因的重组表达质粒，所说的VP2基因中融合有H...
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- 文献传递
- 重组禽流感M2e的鸡传染性法氏囊VP2亚单位疫苗、其构建方法及其应用
- 本发明提供了一种重组禽流感M2e的鸡传染性法氏囊VP2亚单位疫苗、其构建方法及其应用。所说的重组禽流感M2e的鸡传染性法氏囊VP2亚单位疫苗中包含带有鸡传染性法氏囊病毒VP2基因的重组表达质粒，所说的VP2基因中融合有H...
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- 蛋鸡场肾型传染性支气管炎病毒的分离鉴定及其S基因分析被引量：1
- 2011年
- 传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）可引起鸡的急性、高度接触传染性疾病。该病特征为病鸡咳嗽、打喷嚏、发出气管啰音,幼鸡流鼻液,蛋鸡产蛋数量和质量下降。IBV的血清型较复杂,已报道的血清型约有30种,且交叉保护力差。
- 唐应华吴培培宫玉珍于漾揭鸿英何家惠侯继波
- 关键词：传染性支气管炎病毒生物学特性S基因
- 肾型传染性支气管炎病毒M基因的遗传分析及其在杆状病毒表达系统中的表达被引量：2
- 2010年
- 对肾型鸡传染性支气管炎病毒分离株Ck/Jiangsu/DS10/2008株(DS10株)膜蛋白(M)基因进行扩增、克隆和序列测定,并与GenBank中的其它25株参考株的M基因进行比对分析并构建进化树,研究其遗传进化关系。另将M基因克隆至杆状病毒表达系统pFastBac1载体并转染Sf9昆虫细胞进行表达,经间接免疫荧光鉴定,用琼扩试验验证表达产物的反应性,以研究M基因表达产物的生物学活性。测序结果表明DS10的M基因全长为678bp,编码225个氨基酸。遗传进化分析表明,DS10病毒与其它不同致病型的传染性支气管炎病毒共属同一大分支。间接免疫荧光检测表明,M蛋白在Sf9细胞中得到表达,琼扩试验验证表达产物具有良好的反应性,以上结果表明所表达的M蛋白具有良好的生物学活性。本研究表达的M蛋白可为其生物学活性研究及其诊断抗原、新型疫苗开发提供基础材料。
- 唐应华吴培培宫玉珍王永伟何家惠侯继波
- 关键词：传染性支气管炎病毒M基因遗传进化杆状病毒表达系统
- 含禽流感病毒M2e氨基端抗原表位的重组传染性法氏囊病毒VP2蛋白的免疫原性鉴定被引量：2
- 2012年
- 【目的】构建传染性法氏囊病毒VP2蛋白展示禽流感M2e抗原表位的重组蛋白,研发预防H5或H9亚型禽流感和传染性法氏囊的基因工程疫苗。【方法】根据现有禽流感疫苗株M2e的氨基端12个氨基酸多肽序列(nM2e)序列,结合GenBank中H5和H9亚型禽流感病毒nM2e的比对结果,确定nM2e序列。用融合PCR分别将1拷贝H5或H9的nM2e序列插入IBD B87株VP2基因的PBC区,获得VP2BCnM2e重组基因。将重组基因克隆至杆状病毒表达系统,转染Sf9细胞进行表达。经间接免疫荧光和Western blotting检测Sf9细胞表达重组基因后,扩繁重组病毒,制备疫苗,间隔4周对非免鸡作2次重复免疫,用间接ELISA和鸡胚成纤维细胞中的病毒血清中和试验检测血清中VP2和nM2e的抗体效价。【结果】成功构建含H5或H9 nM2e的VP2BCnM2e重组基因,该重组基因在Sf9细胞中得到表达。经免疫鸡,两重组蛋白均能激发针对VP2和nM2e的抗体,VP2BCnM2eH5组抗体效价高于VP2BCnM2eH9组。【结论】两重组蛋白均具有免疫原性,VP2BCnM2eH5免疫原性更佳。
- 唐应华宫玉珍王永伟陆吉虎吴培培高峰陈滔何家惠侯继波
- 关键词：禽流感病毒传染性法氏囊病毒VP2
- 传染性支气管炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立
- 2012年
- 为了快速检测针对传染性支气管炎病毒(IBV)抗体,本研究建立相应的间接ELISA(iELISA)检测方法。以本实验室分离的临床毒株DS10为检测抗原,经过差速离心纯化获得DS10病毒作为包被抗原,利用方阵试验,优化一系列条件,最终确定了最佳的ELISA反应条件。抗原最佳包被浓度为0.11mg/mL,血清最适稀释度为1:100,封闭液为含1%BSA的PBST,封闭时间为60min,一抗作用时间90min,HRP标记的兔抗鸡IgG稀释倍数为1:3500,作用时间为60min,显色时间为10min。用iELISA方法和血凝抑制试验(HI)同时检测145份血清样品的结果表明,建立的iELISA方法与常规的HI检测的符合率为92.41%,iELISA和HI的阳性检出率分别为92.41%和90.34%,iELISA的敏感性略优于HI。
- 高峰唐应华宫玉珍陈涛陆吉虎吴培培傅童生侯继波
- 关键词：传染性支气管炎间接ELISA抗体检测
