鲁照明
- 作品数：47 被引量：125H指数：7
- 供职机构：郑州大学药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省医学科技攻关计划项目国家教育部“211”工程更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学政治法律更多>>
- PTEN表达载体的构建及转染食管鳞癌细胞系EC9706
- 2007年
- 目的筛选稳定表达野生型PTEN基因的食管鳞癌细胞株EC9706。方法提取胎盘总RNA,设计引物,PCR扩增人野生型PTEN基因,经测序鉴定后,连接于pcDNA3.1(+)真核表达载体,构建pcDNA3.1-PTEN,用脂质体介导的方法将其转染EC9706。而后加抗生素G418筛选稳定表达株,用RT-PCR方法检测稳定表达株PTEN基因的mRNA水平,通过绘制生长曲线观察细胞生长情况。结果PCR产物的电泳结果显示,在1500bp左右有一明显亮带,测序结果与GenBank上PTEN序列完全一致;稳定表达PTEN基因的细胞株RT-PCR结果显示,PTEN的mRNA水平比对照细胞株相比明显升高;生长曲线结果显示,转染后的细胞生长速度明显减慢。结论所扩基因为野生型PTEN基因,所构建的载体为野生型PTEN基因真核表达载体,并筛选出PTEN基因稳定表达的食管鳞癌细胞株。
- 侯桂琴鲁照明薛乐勋田芳范天黎刘兰琦许培荣
- 关键词：PTEN食管鳞癌MTOR转染
- 肿瘤相关抗原p62应用于肿瘤免疫诊断的Meta分析被引量：2
- 2011年
- 目的分析肿瘤相关抗原p62在免疫诊断中的作用和价值。方法采用Cochrane系统评价方法,通过计算机检索中国学术期刊全文数据库、万方数据库、维普咨询网、中国生物医学文献数据库和PubMed、Springer、Elsevier、EBSCO外文数据库,并辅以手工检索,检索时间截止至2010年6月。获取p62用于肿瘤血清学免疫诊断的病例-对照研究共18篇文献,采用Cochrane协作网Review Manager 4.2.8软件进行Meta分析。结果以p62能否应用于肿瘤的免疫诊断为题,共纳入17项研究,包括6种不同的肿瘤类型,含1554例肿瘤患者病例和1461例正常人对照,目的均是检测p62自身抗体在肿瘤患者和正常对照中出现的例数。统计得出总的效应统计量比值比(odds ratio,OR)及其95%CI为10.74(7.25～15.90),差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 Meta分析结果表明肿瘤患者血清中抗p62自身抗体的检测在免疫诊断中具有实际应用价值。
- 李慎柯柴玉荣张春霞鲁照明王凯娟代丽萍张建营
- 关键词：META分析肿瘤相关抗原P62肿瘤诊断
- 沉默RICTOR基因表达提高食管鳞癌细胞对依维莫司的敏感性
- 2018年
- 目的:探讨沉默雷帕霉素不敏感的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白伴侣(rapamycin insensitive companion of mammalian target of rapamycin,RICTOR)基因表达后食管鳞癌细胞对依维莫司敏感性的变化,及其可能的分子机制。方法:蛋白质印迹法检测食管鳞癌ECa109、EC9706、TE1、KYSE450和KYSE790细胞中RICTOR蛋白的表达情况。采用脂质体转染法将携带有RICTOR-shRNA和Control-shRNA(对照组)的重组质粒分别转入ECa109细胞中,并筛选稳定转染的细胞株(命名为ECa109-RICTORshRNA和ECa109-control-shRNA)。采用CCK-8法检测沉默RICTOR基因表达后依维莫司对ECa109细胞增殖的影响,再用蛋白质印迹法检测磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)通路中相关因子RICTOR、Akt、磷酸化Akt(phospho-Akt,p-Akt)(Ser473)、核糖体蛋白S6激酶70 kDa肽(ribosome protein subunit 6 kinase of 70 kDa,p70S6K)、p-p70S6K、40 kDa富含脯氨酸的Akt底物(proline-rich Akt substrate of 40 kDa,PRAS40)和p-PRAS40(r246)蛋白的表达水平。最后,用ECa109-RICTOR-shRNA和ECa109-control-shRNA细胞建立裸鼠移植瘤模型,并用依维莫司进行治疗,观察依维莫司对裸鼠体内移植瘤生长的影响。结果:RICTOR蛋白在5株食管鳞癌细胞中均有表达,且在ECa109细胞中表达水平相对较高。与ECa109-control-shRNA细胞相比,ECa109-RICTOR-shRNA细胞的增殖速度明显变慢(P<0.05);依维莫司对ECa109-RICTOR-shRNA和ECa109-control-shRNA细胞的增殖均有明显抑制作用,依维莫司对ECa109-RICTOR-shRNA和ECa109-controlshRNA细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)值分别为(17.68±1.25)μmol/L和(36.84±1.57)μmol/L。沉默RICTOR基因表达后,ECa109细胞中p-Akt(Ser473)和p-PRAS40(r246)蛋白的表达水平明显降低(P值均<0.001),而依维莫司使p-p70S6K蛋白的表达水平下调(P<0.001),但促进了p-Akt(Ser473)和
- 鲁照明田菲赵琦彭柯峥白一汝师莹莹侯桂琴
- 关键词：食管肿瘤依维莫司哺乳动物雷帕霉素靶蛋白
- Notch1-NICD胞内结构域真核表达载体的构建及其初步功能分析被引量：2
- 2009年
- 目的:构建包含Notch1胞内结构域的Notch1-NICD真核表达载体及绿色荧光蛋白载体并转染食管鳞状细胞癌细胞株EC9706及Eca109,并对Notch1-NICD1在食管鳞状细胞癌中的功能进行初步探索。方法:根据GenBank上的Notch1-NICD序列设计扩增引物,由RT-PCR扩增NICD片段,测序鉴定,并通过Blast进行序列比对,然后回收目的片段并与真核表达载体pcDNA3.1(+)相连,构建Notch1-NICD真核表达载体pNotch1-NICD1,同时将扩增的NICD与pEGFP-C1载体相连构建绿色荧光蛋白表达载体pENotch1-NICD1,并转染EC9706及Eca109,观察Notch1在细胞中的定位及其途径的激活状态。同时将pNotch1-NICD1真核表达载体转染EC9706及Eca109,用MTT法分别在24h、48h、72h、96h及120h观察外源性Notch1片段的导入对EC9706及Eca109细胞增殖的影响。结果:通过RT-PCR获得1个Notch1胞内区片段,并成功构建了包含Notch1胞内区结构域的绿色荧光蛋白载体及真核表达载体。转染pENotch1-NICD1后,Notch1在胞质和胞核内均有表达,表明Notch1信号通路被激活。此外,MTT结果表明转染Notch1-NICD1片段的食管鳞状细胞癌细胞的增殖受到明显抑制(P<0.05)。结论:成功构建了Notch1绿色荧光蛋白表达载体及pcDNA3.1(+)真核表达载体。外源Notch1片段的引入能够明显抑制食管鳞状细胞癌细胞的增殖,提示Notch1基因有可能成为治疗食管鳞状细胞癌的一个潜在的分子靶点。
- 巩天晓刘红涛鲁照明许培荣薛乐勋
- 关键词：真核表达载体
- TaqMan探针分析p62/IGF2BP2基因多态性
- 2012年
- 目的在临床实践中建立一种有效的检测p62/IGF2BP2基因多态性的方法。方法盐析法提取40例肝癌患者的外周血基因组DNA。采用实时荧光PCR TaqMan探针方法对p62/IGF2BP2的一个单核苷酸多态性位点:rs11705701进行基因分型分析,并进行基因序列测序验证。结果通过对肝癌DNA进行测试分析,表明该位点在肝癌样品中存在多态性。结论目前的数据初步表明TaqMan探针方法能够用于IGF2BP2基因多态性分型分析。
- 韩凯昊鲁照明柴玉荣李丹陈俊林
- 关键词：单核苷酸多态性TAQMAN探针
- 人食管鳞癌及正常食管组织中Notch1基因的mRNA及蛋白的表达被引量：14
- 2007年
- 采用RT-PCR方法,分别从人食管鳞癌及正常食管组织中扩增Notch1基因,结果表明Notch1基因在人食管鳞癌及正常食管组织中均有表达.此外,通过免疫组织化学方法检测不同病理特征的35例食管鳞癌、16例原位癌及35例癌周正常食管粘膜上皮组织Notch1蛋白表达的变化,结果显示:Notch1蛋白在正常食管粘膜上皮组织和原位癌中的阳性率分别为82.9%、68.7%,二者无显著性差异(P>0.05),但均显著高于食管鳞癌组织37.1%(P<0.05);食管鳞癌Notch1蛋白的低表达与肿瘤的直径、分期和发生部位无关(P>0.05),但与淋巴结转移有关(P<0.05).这表明在正常食管粘膜上皮组织中Notch1蛋白高表达,而在食管癌鳞中Notch1蛋白呈现低表达或不表达.该研究为进一步探明Notch1基因的表达对食管癌细胞的发生、发展的影响奠定了良好的基础.
- 鲁照明刘红涛高媛许培荣鄢文海薛乐勋
- 关键词：食管鳞癌RT-PCR免疫组织化学NOTCH1表达
- 某高校药学专业本科生毕业论文现存问题与教改方案被引量：6
- 2020年
- 本科毕业论文是高等学校人才培养计划的重要组成部分,是实现本科生培养目标的重要教学实践环节,但近年来我国高校本科生毕业论文质量下滑严重。本文通过抽样调查分析某高校药学专业本科生毕业论文中存在的问题及可能原因,提出改革措施并就其重要性和可行性对药学专业教师和本科生进行问卷调查,据此形成教改方案,为提高药学专业本科生毕业论文质量的改革实践提供参考。
- 侯桂琴陈秀英鲁照明徐霞卢洁
- 关键词：药学本科生毕业论文
- 杜氏盐藻光系统Ⅱ反应中心蛋白D2基因的克隆及序列分析
- 2007年
- 根据莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)、Oryza sativa、Chlorella vulgaris以及Me-sostigma viride等真核生物的psbD基因的氨基酸高度保守序列,设计一对简并引物,利用TRIzol试剂提取杜氏盐藻(Dunaliella salina)细胞的总RNA,通过RT-PCR,得到杜氏盐藻cDNA片段的长度大约为1 000bp.该序列的PCR产物经T-A克隆并测序分析以及测序结果推导成氨基酸序列,Blast同源性分析表明所克隆的基因为杜氏盐藻psbD基因,编码杜氏盐藻光系统Ⅱ反应中心D2蛋白,该序列已递交GenBank(GenBank登录号为:DQ074450).编码的氨基酸序列,同源性依次为:Chlamydomonas reinhardtii92%,Nephroselmis olivacea88%,Pinus thunbergii88%,Am-borella trichopoda88%,Chlorella vulgaris88%.通过密码子偏爱性分析表明,psbD基因存在明显的密码子偏爱性,其(A+T)含量明显高于(G+C)含量.
- 刘红涛宋建伟臧卫东鲁照明王鹏举薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻密码子偏爱性
- 雷帕霉素对p70S6K-siRNA转染的EC9706细胞增殖的影响被引量：4
- 2013年
- 目的:观察雷帕霉素对p70S6K-siRNA转染的人食管鳞状细胞癌EC9706细胞增殖的影响。方法:用p70S6K-siRNA转染EC9706细胞,分别作用24、48 h后,采用RT-PCR和Western blot检测p70S6K mRNA及蛋白的表达情况;收集转染p70S6K-siRNA 24 h和未转染的EC9706细胞,加入0、25、50、100、150、250、500和1 500 nmol/L的雷帕霉素处理48 h,采用MTT法检测细胞存活率。结果:p70S6K-siRNA转染后,EC9706细胞中p70S6K mRNA及蛋白的表达均明显降低(mRNA:F=57.825;蛋白:F p70S6K=268.897,F p-p70S6K=35.584,P均<0.05)。随雷帕霉素浓度的增加,未转染和转染组EC9706细胞存活率均降低;与未转染组相比,转染组细胞存活率更低(F剂量=664.919,F组间=1 958.000,P均<0.05。)结论:p70S6K-siRNA能增强雷帕霉素对EC9706细胞增殖的抑制作用。
- 鲁照明杨帅周媛媛贝维娟侯桂琴
- 关键词：P70S6KSIRNA食管鳞状细胞癌EC9706雷帕霉素
- 人尿血管抑素测定方法的建立及在肿瘤患者中的应用被引量：1
- 2004年
- 目的:建立一种测定人尿液中血管抑素的方法,并探讨其在肿瘤患者中测定的意义。方法:依据ELISA的原理和技术要求,以赖氨酸作固相包被物,血管抑素为标准品,抗入K1～3的单抗为特异性的一抗,制备测定血管抑素的ELISA试剂盒。用此方法测定40例健康人(正常对照组)、92例恶性肿瘤(31例肺癌、31例食管癌、30例乳癌)患者治疗前尿中血管抑素含量。结果:该ELISA方法检测人尿中血管抑素的检出范围为1～200μg/L。正常对照组中尿血管抑素含量为0～27.4μg/L,x±s(16.15±6.82)μg/L。3种肿瘤患者尿中血管抑素平均水平均高于正常对照组(P<0.05),肺癌、食管癌、乳癌的诊断符合率分别为77.4％、71.0％和70.0％,其间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:该方法操作方便,敏感性、特异性高;人尿中血管抑素含量检测可用于某些肿瘤的检出。
- 鲁照明薛乐勋董子明
- 关键词：人血管抑素ELISA肿瘤
