顾洪涛
- 作品数：32 被引量：153H指数：7
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- 人肝癌Fas途径免疫逃逸机制及其反义基因治疗的研究
- 毛海婷刘倩李杰王义国张娇时昌文鹿伟李晓冰顾洪涛
- 该课题采用组织芯片、免疫组化及图像分析扫描技术反义寡脱氧核苷酸(ASODN)脂质体转染技术、流式细胞术、限制性片段长度多态性分析、RT-PCR法、混合淋巴细胞共培养法、激活性Fas单抗CH11诱导细胞凋亡等多种先进的技术...
- 关键词：
- 关键词：肝癌反义基因治疗生物治疗
- 中药淫羊藿苷抑制肝癌HepG2.2.15细胞增殖和免疫逃逸作用研究被引量：39
- 2007年
- 目的:观察中药淫羊藿苷(ICA)对HepG2.2.15细胞增殖及对CD3AK细胞杀伤活性的影响,探讨ICA对肝癌细胞Fas/FasL途径免疫逃逸的逆转作用,为ICA的开发应用提供新的理论和实验依据。方法:MTT法检测细胞增殖和细胞杀伤活性;流式细胞术检测细胞表面分子表达水平和细胞凋亡率。结果:50μg/mlICA作用HepG2.2.15细胞48、72小时的增殖抑制作用明显,抑制率分别为22.04%、29.68%(P<0.05),呈时间依赖效应。HepG2.2.15细胞经ICA处理后,FasL的表达率由16.22%显著下降至8.29%,Fas表达率由0.79%提高到1.70%(P>0.05)。ICA可明显抑制HepG2.2.15细胞诱导Jurkat细胞凋亡,凋亡率从46.66%下降为18.20%。ICA处理HepG2.2.15细胞后,不同效靶比的CD3AK细胞的杀伤活性,可分别由对照组的15.81%、35.04%、42.85%显著提高至42.58%、67.55%、88.93%(P<0.05,P<0.01),呈效靶比依赖效应。结论:ICA能有效地抑制HepG2.2.15细胞增殖,并有一定时间依赖效应;ICA可下调FasL的表达,上调细胞表面Fas的表达,对HepG2.2.15细胞诱导的T淋巴细胞凋亡作用有一定阻断,逆转肿瘤细胞的免疫逃逸作用;ICA显著增强HepG2.2.15细胞对CD3AK细胞杀伤的敏感性。
- 王谦张玲毛海婷顾洪涛夏武青温培娥李翠玲杨尚军
- 关键词：HEPG2.2.15JURKAT细胞FAS/FASLCD3AK免疫逃逸
- CD44反义寡核苷酸对肿瘤细胞表面抗原和对CD3AK杀伤敏感性的调节作用被引量：2
- 2006年
- 目的:观察CD44反义寡核苷酸调节人低分化黏液腺胃癌MGC80-3细胞Fas分子和凋亡抵抗基因bc l-2的表达水平,提高免疫效应细胞杀伤敏感性的作用和机制。方法:RT-PCR法检测CD44、bc l-2 mRNA的表达水平。MTT法检测CD3AK杀伤活性。流式细胞术检测细胞表面CD44及Fas、FasL蛋白表达水平。结果:CD44反义寡核苷酸(1.6μmol/L)处理后,明显地抑制MGC80-3细胞CD44 mRNA和蛋白表达水平,在CD44配体低分子量透明质酸(HA)存在下,使MGC80-3表面下调的Fas分子显著增高,表达率从6.69%提高到16.81%(P<0.01)。CD3AK对反义寡核苷酸处理的MGC80-3细胞杀伤活性显著增高,并呈效靶比依赖效应(P<0.01)。MGC80-3细胞bc l-2 mRNA的相对表达定量值由1.06降至0.32。结论:CD44反义寡核苷酸可通过抑制MGC80-3细胞CD44 mRNA和蛋白表达,上调Fas分子的表达,下调凋亡抵抗基因bc l-2的表达,并提高其对免疫效应细胞的杀伤敏感性。
- 荆雪宁张玲王芸毛海婷温培娥顾洪涛崔树龄李登华
- 关键词：CD44反义基因BEL-2CD3AK
- 淫羊藿苷与黄芩苷联合多柔比星对肝癌细胞APRIL表达和血管内皮细胞生长抑制的研究被引量：11
- 2009年
- 目的:探讨中药单体淫羊藿苷(ICA)、黄芩苷(BAI)联合化疗药多柔比星(ADM)抑制肝癌HepG2细胞APRIL、VEGF的表达,进而抑制血管内皮细胞生长的作用机制。方法:MTT法检测血管内皮细胞ECV304的增殖活性;RT-PCR法检测HepG2细胞APRIL表达水平和ECV304细胞中APRIL受体HSPG的表达情况;免疫细胞化学检测HepG2细胞VEGF表达水平。结果:HepG2细胞中VEGF蛋白、APRIL和ECV304细胞中APRIL受体HSPG的mRNA均呈高表达状态,且APRIL与VEGF两者高表达呈显著正相关(P<0.001);HepG2细胞经25μg/mLICA、200μg/mLBAI、2μg/mLADM以及12.5μg/mLICA+1μg/mLADM、100μg/mLBAI+1μg/mLADM5组药物处理后,与未用药对照组相比,APRILmRNA表达水平明显下降;HepG2细胞经5组药物处理后的上清液与未用药对照组相比,对ECV304细胞具有明显的增殖抑制作用,抑制率分别为(2.79±5.57)%、(15.20±3.79)%、(12.10±4.50)%、(19.34±8.17)%和(20.27±4.77)%(P均<0.05);HepG2细胞经5组药物处理后,与未用药对照组相比,VEGF的表达水平明显下降。结论:A-PRIL具有促进静脉内皮细胞ECV304增殖的作用。ICA、BAI联合ADM能降低HepG2细胞中APRIL与VEGF的表达水平,从而发挥其抑制血管内皮细胞ECV304生长的作用。
- 唐菁张玲李翠玲顾洪涛杨尚军阴海鹏温培娥姜国胜
- 关键词：淫羊藿苷黄芩苷多柔比星人肝癌细胞APRIL
- 淫羊藿苷体内抑瘤作用及其机制被引量：34
- 2007年
- 目的:探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)对肝癌细胞H22荷瘤小鼠体内抑瘤作用及其机制。方法:肝癌细胞株H22右腋皮下接种C57BL/6小鼠,建立小鼠体内荷移植瘤模型。接种H22细胞后24h,用高、中、低不同剂量(9、4.5、2.25mg/ml)的ICA和环磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)(30mg/kg)进行局部注射治疗,待荷瘤对照组肿瘤长至1g左右,各组小鼠称重,处死。留自凝血,取血清检测TNF-α;依次取脾脏及肿瘤组织称重;取1/2脾脏和肿瘤组织制成单细胞悬液,剩余的用10%中性甲醛溶液固定,做病理切片和H-E染色以及TUNEL实验;脾单细胞悬液用流式细胞术(FACS)检测CD3、CD4、CD8、DX5等抗原分子的表达;肿瘤单细胞悬液用AnnexinV/PI双染检测肿瘤细胞的早期与晚期凋亡情况,同时取适量的瘤细胞用70%乙醇固定以FACS检测肿瘤细胞周期各时相的分布情况。结果:Cy治疗组抑瘤率为67.16%,ICA高、中、低剂量治疗组抑瘤率分别为24.63%、32.84%、5.22%。AnnexinV/PI双染结果表明,Cy治疗组与ICA治疗组早期凋亡细胞率均高于荷瘤对照组[Cy组为(9.11±1.584)%,ICA组为(7.14±1.376)%,荷瘤对照组为(3.6±2.38)%]。TUNEL结果显示,ICA治疗组凋亡指数为(5.35±0.73)%,显著高于荷瘤对照组中的凋亡指数[(1.03±1.17)%](P<0.01)。正常小鼠血清中未检测到TNF-α的存在,而ICA治疗组及Cy治疗组中检测到微量TNF-α。病理检测表明,ICA中、高剂量组肿瘤组织中出现较多的灶状及小片状坏死,包膜处及肿瘤边缘可见瘤细胞坏死,包膜及肿瘤组织中可见少量的炎细胞(淋巴细胞与单核细胞)浸润。结论:ICA有显著的抑瘤作用,可能通过促进实体瘤细胞早期凋亡引起肿瘤组织坏死而起作用。
- 李翠玲张玲顾洪涛王军毛海婷杨尚军温培娥
- 关键词：淫羊藿苷抑瘤作用细胞凋亡细胞周期
- 淫羊藿甙体内抑瘤及作用机制的初步研究
- 目的:淫羊藿甙(icariin ICA)是来源于小檗科淫羊藿属的植物的活性成分,其化学结构属黄酮类化合物,具有一定的抑瘤作用。体外研究表明ICA可抑制肿瘤细胞生长与增殖,对白血病细胞有诱导分化和诱导凋亡作用。ICA还可抑...
- 李翠玲张玲顾洪涛毛海婷杨尚军
- 关键词：淫羊藿甙抑瘤率
- 文献传递
- 二氢青蒿素诱导乳腺癌细胞凋亡的分子机制初探
- 研究目的：
青蒿素（Artemisinin）最初是由我国学者从菊科植物黄花蒿（Artemisiaannua Linn）叶中提取分离到的具有过氧化基团的倍半萜内脂类化合物，青蒿琥酯（artesunate）、蒿甲醚...
- 顾洪涛
- 关键词：二氢青蒿素乳腺癌细胞凋亡分子机制药物浓度
- 文献传递
- 双酚A对人卵巢癌3AO细胞、前列腺癌DU145细胞及子宫内膜癌HHUA细胞增殖活性的影响被引量：4
- 2011年
- 目的研究环境雌激素双酚A(bisphenol A,BPA)对3种激素相关肿瘤细胞株———人卵巢癌3AO细胞、前列腺癌DU145细胞及子宫内膜癌HHUA细胞增殖活性的影响。方法分别用1‰无水乙醇(溶剂对照)、BPA(终浓度为10-9mol/L)和β-雌二醇(终浓度为10-7 mol/L)染毒3AO、DU145及HHUA细胞。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞(细胞密度分别为1 000、3 000、5 000个/孔)的增殖活性,并采用逆转录-聚合酶链反应检测细胞增殖因子Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)的mRNA表达;采用电化学发光法检测糖类抗原15-3(CA15-3)在HHUA细胞培养上清液中的含量。结果与溶剂对照组比较,BPA组3AO、DU145及HHUA细胞的吸光度(A)值较高,差异均有统计学意义(P<0.05);对3AO、DU145及HHUA细胞的促增殖率分别为10.15%,14.04%及21.31%。β-雌二醇对DU145及HHUA细胞的促增殖率分别为14.91%及9.07%,而对3AO细胞未呈现促增殖活性(P>0.05)。与溶剂对照组比较,BPA染毒组3种细胞Ki67、PCNA mRNA的表达均较高,差异有统计学意义(P<0.05);β-雌二醇染毒组DU145、HHUA细胞Ki67、PCNA mRNA的表达均较高,差异有统计学意义(P<0.05),而3AO细胞Ki67、PCNA mRNA的表达与溶剂对照组比较,差异无统计学意义。与溶剂对照组比较,BPA染毒组和雌激素对照组HHUA细胞CA15-3分泌量均较高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BPA可以促进3AO、DU145及HHUA细胞的增殖活性。
- 阴海鹏张玲李翠玲顾洪涛刘文敏许强赵勇
- 关键词：双酚A细胞增殖环境雌激素细胞增殖抗原
- 修饰的肿瘤抗原肽CEA_(610D)疫苗的体外抗肿瘤作用被引量：2
- 2009年
- 目的:评价修饰的CEA610D抗原肽疫苗体外抗肿瘤免疫的有效性,为其临床应用提供依据。方法:多肽固相合成法合成HLA-A2CEA修饰肽(CEA610D)、HLA-A2天然肽CEA605-613(天然肽)和HLA-A2无关肽MAGE-3(无关肽),采用同种异体混合淋巴细胞与肽共孵育的方法,诱导肽特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL),利用MTT法检测CTL的增殖和杀伤活性;流式细胞术观察细胞表型;RT-PCR检测细胞穿孔素的表达;ELISA法检测CTL上清中IFN-γ的水平。结果:CEA610D疫苗产生肽特异性CTL的能力最强(P<0.05),其CD8+T细胞数也高于天然肽组和无关肽组;在效靶比为40:1时,CEA610D和天然肽所诱导的CTL对CEA+HLA-A2限制性人结肠癌细胞T84的杀伤活性可达(56.7±3.73)%和(51.2±1.86)%,而3种肽特异性CTL细胞对CEA+HLA-A2人结肠癌lovo细胞杀伤活性维持在本底水平;CEA610D组的CTL所释放的杀伤相关介质穿孔素和上清中IFN-γ的水平也显著高于其余两组(P<0.01)。结论:与天然肽相比,CEA610D疫苗可打破自身表位的免疫耐受,在体外抗肿瘤免疫中更具优势。
- 刘晶李翠玲顾洪涛阴海鹏朱传福温培娥张玲
- 关键词：肿瘤抗原肽细胞毒性T淋巴细胞抗瘤作用
- α-干扰素与5-FU联合作用对肝癌细胞HepG2．2．15生物学特性的影响被引量：4
- 2008年
- 目的:探讨α-干扰素(IFN-α)联合5-FU对肝癌细胞HepG2·2·15生物学特性的影响及其作用机制。方法:采用MTT法观察5-FU和IFN-α对HepG2·2·15细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡变化及细胞表面Fas表达变化;RT-PCR检测凋亡抑制基因Bcl-xL表达变化。结果:IFN-α单独应用对HepG2·2·15细胞增殖抑制作用较弱,与5-FU联合应用时对细胞的增殖抑制作用明显增强,P<0·01;两者联合应用对HepG2·2·15细胞周期的影响表现为与对照组和IFN-α、5-FU单用药组相比,联合用药组G0/G1期细胞比率升高(78·33%vs54·95%、60·08%和72·50%),S期比率降低(10·97%vs29·04%、18·69%和17·44%),P<0·01;经药物处理48h后,联合用药组的细胞凋亡率为(25·08±2·54)%,与对照组及IFN-α和5-FU单独应用组相比,细胞凋亡率明显增高,P<0·01。IFN-α对HepG2·2·15细胞表面Fas表达没有影响,但可协同5-FU明显提高细胞表面Fas的表达,P<0.01。联合用药组HepG2·2·15细胞Bcl-xL的表达较对照组和单药组明显下降,P<0·05。结论:IFN-α和5-FU联合应用可抑制HepG2·2·15细胞的增殖并诱导凋亡,其机制之一可能是调节凋亡抑制基因Bcl-xL的表达,影响内源性凋亡信号传导通路来发挥作用。
- 谢风祥毛海婷李晓冰张玲顾洪涛阴海鹏周宪宾王丽李殊吏
- 关键词：干扰素Α氟尿嘧啶细胞周期
