李玉英 作品数:24 被引量:135 H指数:7 供职机构: 中国预防医学科学院 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 更多>>
中国人促红细胞生成素基因组的克隆及其在COS-7细胞中的表达 被引量:2 1994年 本文利用PCR技术,从正常人胎肝染色体DNA库中分离克隆了长度分别为506bp,465bp的中国人促红细胞生成素(EPO)基因组片段。506bp基因片段包括外显子2(信号肽),内含子2和外显子3;465bp片段包括外显子4,内含子4和外显子5。通过在引物中设置的酶切位点将两个克隆片段进行了正确的拼接,从而得到了约1.0kb的EPO次全基因组片段,它包括除信号肽中第2,3,4位氨基酸外的所有编码区及两个内含子序列。 所克隆的次全EPO基因组插入表达载体pSV2-dhfr中的不同克隆位点,构建了3种不同的转移载体质粒,分别转染导入COS-7细胞后,3种转移载体质粒转染的细胞上清液都有明显的EPO活性。本工作证明仅含有内含子2,4序列,去除负调控区和氧敏感区序列的人次全EPO基因组可以在COS-7细胞中获得表达。 黄利文 韩峰 郑秋君 马学军 陈广南 李玉英 蒋盘宏 吴淑华 侯云德关键词:聚合酶链反应 EPO 带有上皮生长因子受体干扰序列的γ干扰素新分子具有较高的抗肿瘤细胞增殖活性 1991年 人γ干扰素具有抗病毒、抗肿瘤及免疫调节活性.成熟的 IFN-γ由143个氨基酸组成.C端长度参差不齐,但不影响生物学活性;如果去掉 C 端13个氨基酸,其抗病毒活性只有原来的千分之一.我们的工作证明 IFN-γ从 N 端至 C 端的132个氨基酸为其生物学活性的基本结构.在许多癌细胞表面,上皮生长因子(EGF)受体明显增多.其配体除了 EGF 外,还包括了转化生长因子(TGF),痘苗病毒的生长因子(VGF)等.这类 EGF 王晓鸣 金奇 李玉英 张智清 赵明 侯云德关键词:干扰素 抗肿瘤 细胞增殖活性 复方干扰素抗病毒合剂及其制作技术和用途 复方干扰素抗病毒合剂是基于发现黄芪与干扰素的抗感冒病毒及其它病毒有明显的协同作用而研制的一种广谱抗病毒合剂,其中主要成分为黄芪提取液,重组人α2b型干扰素和保护剂。0.3%黄芪与10万单位干扰素联合应用可产生约25万单位... 张丽兰 侯云德 洪涛 李玉英 马国良 钱止维文献传递 一组通用性温控型大肠杆菌高效表达载体的组建及其应用 张智清 侯云德 李福胜 金冬雁 金奇 李玉英 用原核细胞生产多肽药物的关键是要有高效的原核表达载体,使外源基因能转送到细菌细胞内并获得高效表达。我们采用DNA重组技术和人工合成DNA的方法组建了一组通用性较强的,可温控的,可表达非融合蛋白的高拷贝高效表达载体-pBV...关键词:关键词:大肠杆菌 高效表达载体 DNA重组 丙型肝炎病毒核壳蛋白抗原的化学合成及其在血清学诊断中的应用 被引量:7 1992年 选取丙型肝炎病毒(HCV)核壳蛋白区两个可能含有优势抗原表位的19和16氨基酸的肽殴(C-19肽和C-16肽),利用固相多肽合成技术进行了化学合成。经用反相高压液相层析(HPLC)及脉冲液相多肽测序技术检定合成肽产品的纯度及序列后,以C-19和C-16肽作为包被抗原组装成检测HCV血清抗体的ELISA诊断试剂。用所组装的合成肽试剂检测中国药品生物制品检定所提供的HCV标准参比血清,并比较利用该试剂和美国Abbott实验室生产的HCV第二代EIA诊断试剂平行检测109份献血员血清的结果,表明C-19肽能够特异、重复、灵敏地检出HCV血清抗体,可以作为我国第一代HCV诊断试剂的合成肽抗原。 金冬雁 李景源 杨永平 薛水星 吴长龙 刘崇柏 李玉英 侯云德关键词:丙型肝炎病毒 ELISA 肝炎病毒 人γ干扰素(IFN-γ)-表皮生长因子(EGF)融合蛋白的抗肿瘤细胞增殖作用与靶细胞的EGF受体有关 被引量:1 1995年 采用表皮生长因子(EGF)受体丰富的A431细胞进一步研究了人IFN-γ-EGF3融合蛋白 ̄〔1〕的抗细胞分裂活性,以及它和靶细胞EGF受体的关系。结果表明,IFN-γ-EGF3融合蛋白的抗肿瘤细胞增殖作用明显高于其母体分子。 ̄125I-EGF受体竞争抑制试验表明,IFN-γ可与EGF竞争A431细胞的EGF受体,而INF-γ-EGF3融合蛋白的EGF受体竞争抑制作用更为明显,说明人IFN-γ和IFN-γ-EGF3融合蛋白的抗肿瘤细胞分裂活性,与靶细胞EGF受体被竟争抑制密切相关。 陈望秋 张笑冰 迟捷 李玉英 段书敏 张丽兰 侯云德关键词:Γ干扰素 融合蛋白 表皮生长因子 受体 抗肿瘤性 人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子cDNA 5'端的修饰提高其在大肠杆菌的表达 被引量:19 1993年 应用聚合酶链反应(PCR)法和人工合成的寡聚DNA引物,对人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的cDNA作了修饰。在不改变氨基酸的前提下,将一些G或C改成A或T,以避免形成不利的二级结构,并将一些密码子换成大肠杆菌喜用的密码子。修饰后的GMCSF cDNA在大肠杆菌的表达水平高于其母株。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明其表达量约占菌体总蛋白的20%,免疫学和生物学活性检测表明该表达产物具有天然GM-CSF的构型和生物学活性。部分纯化的重组人GM-CSF已用于维持依赖人GM-CSF的TF-1细胞系的生长。 张智清 张颖 路秀华 王世骢 邵魁 马丽娟 李玉英 周圆 姚立红 贺秉坤 侯云德关键词:粒细胞 巨噬细胞 集落刺激因子 人γ干扰素突变体(rIFN-γ132-PGIL)的构建及其生物学活性的测定 被引量:4 1989年 利用DNA重组技术,去掉人γ干扰素(IFNγ)基因3′端含编码多肽羧基(C)端11个氨基酸的核苷酸序列,与编码P,G,I,L的DNA序列相连接,构成IFNγ突变体(rIFN-γ132-PGIL)基因,将后者插入pBV220P_RP_L串连启动子下游,转化大肠杆菌DH5α,在CIts857基因的调节下,通过升温诱导,获得了高效表达,表达量约占菌体可溶性蛋白的30%以上,抗病毒活性平均可达4.9×10^-8U/L,比母体菌株高10倍。SDS—PAGE结果表明,rIFN-γ132—PGIL分子量为17kd。 王晓鸣 李玉英 金奇 张智清 赵小侠 侯云德关键词:Γ干扰素 生物学活性 带有EGF受体干扰序列的γ干扰素新分子抗肿瘤细胞增殖活性的提高 被引量:4 1991年 利用基因工程技术,将天然IFN-γ分子的N端132个氨基酸与带有上皮生长因子(EGF)样多肽C端保守序列融合,构建了干扰素重组体IFN-γ132PGIX_(16).其中X_(16)由EGF样多肽C端16个氨基酸组成,PGI为连接肽序列。将此重组体基因插入表达载体pBV220P_RP_L串连启动子下游,转化大肠杆菌DH5α,在cIts857基因的调节下,通过升温诱导表达.表达产物与其母体天然IFN-γ相比,不仅保持了较高的抗病毒活性,抗病毒滴度达530MU/L菌液,而且明显地提高了抗肿瘤细胞增殖活性.在EGF存在的条件下,干扰素重组体的抗鼻咽癌细胞CNE-2增殖活性明显高于其母体分子(p<0.01).提示重组体分子IFN-γ132PGIX_(16)同时具有EGF受体干扰活性. 王晓鸣 金奇 李玉英 张智清 赵明 侯云德关键词:IFN-Γ 抗肿瘤细胞 增殖活性 逆转录病毒表达载体N2A/hGM-CSF的构建及其在COS-7细胞的初步表达 被引量:1 1995年 用特异性核酸内切酶BamHI剪切质粒pCD/hGM-CSF,制备人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子基因片段,低融点胶回收后,连接至N2A载体BglⅡ位点,转化大肠杆菌DH5a,经快提质粒进行酶切鉴定和核酸打点杂交筛选出重组质粒N2A/hGM-CSF。利用DEAE-葡聚糖介导该重组质粒转化COS-7细胞,收集48h培养上清液,免疫学和生物学活性检测表明该上清中表达产物具有天然GM-CSF的活性,而用质粒N2A转化COS-7细胞,培养上清中未检测出GM-CSF活性。 陈庆华 路秀华 张智清 毕秋娜 李玉英 侯云德关键词:HGM-CSF 集落刺激因子 逆转录病毒 COS-7细胞