干伟 作品数:6 被引量:4 H指数:1 供职机构: 北京医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国际科技合作与交流专项项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
RNA氧化在阿尔兹海默病发病中的作用机制研究 阿尔兹海默病(Alzheimer's disease,AD)是一种进行性、不可逆转的大脑(特别是皮层和海马)神经元损失的神经系统退行性疾病,以认知障碍、记忆损害和人格改变为主要临床特征。神经病理改变以细胞外老年斑(sen... 干伟关键词:阿尔兹海默病 快速老化模型 动物实验 Β淀粉样蛋白 MTH1基因的低表达对HeLa细胞内RNA氧化程度的影响 被引量:2 2011年 目的建立敲减MTH1基因的HeLa细胞稳定细胞株,研究MTH1基因的低表达对HeLa细胞内RNA氧化程度的影响。方法设计并合成针对MTH1基因的3条siRNA,分别转染HeLa细胞,选择干扰效果最为理想的靶序列连接入反转录病毒载体Retro-Q,在293T细胞内包装病毒颗粒,将病毒转染HeLa细胞后使用嘌呤霉素筛选抗性克隆株,用western b lot技术检测克隆株的MTH1的表达量以确定干扰效果最理想的稳定细胞株,用API5000型质谱仪检测稳定细胞株RNA中的8-oxoG与G的含量以评价RNA的氧化程度。结果本研究设计的3条siRNA中有2条干扰效率可达90%以上,所建立的敲减MTH1基因HeLa细胞稳定细胞株的干扰效果达80%以上,质谱检测结果表明MTH1基因低表达的稳定细胞株每106个G中含有14.9个8-oxoG,而对照细胞中则仅含9.7个8-oxoG。结论 MTH1基因的低表达可引起HeLa细胞中RNA氧化程度明显升高。 戴大鹏 干伟 张立群 聂犇 徐仁爱 蔡剑平关键词:RNA干扰 秀丽隐杆线虫NDX-4蛋白的体外表达及酶学活性研究 2014年 目的构建秀丽隐杆线虫NDX-4基因的克隆载体和表达载体,诱导NDX-4蛋白表达,研究NDX-4的体外酶学活性。方法构建NDX-4的克隆载体,将NDX-4的开放阅读框架(ORF)插入PGEM-T载体中扩增;采用双酶切将NDX-4ORF连入表达载体pET-30a(+)中;将连接质粒转入BL21(DE3)感受态细胞后,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)对NDX-4蛋白进行表达诱导,并进行树脂纯化;用SDS-PAGE和Western blot检测以评价NDX-4体外表达和纯化的质量;采用高效液相色谱-紫外检测技术(HPLC-UV)检测NDX-4蛋白水解8-oxodGTP和8-oxoGTP的活性。结果 SDS-PAGE和Western blot检测均在经IPTG诱导的蛋白提纯物泳道上出现单一条带,分子质量约为24kDa,而未诱导的和空载体均未见条带。HPLC-UV检测结果显示加入NDX-4蛋白的8-oxodGTP和8-oxoGTP均被水解为相应的单磷酸和二磷酸氧化核苷,并且随着蛋白量的增加,两种产物的量逐渐增多。结论秀丽隐杆线虫的NDX-4蛋白具有水解8-oxodGTP和8-oxoGTP的双重功能,可能对抑制DNA和RNA的氧化损伤具有重要意义。 郭娇 徐新民 干伟 史飞 钱建畅 周晓阳 蔡剑平关键词:HPLC-UV 酶活性 ID-LC-MS/MS方法对被动吸烟大鼠肺组织DNA中8-oxo-dGsn的检测 被引量:1 2013年 目的用同位素稀释高效液相-串联质谱(ID-LC-MS/MS)方法检测大鼠肺组织中DNA氧化标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-oxo-dGsn)含量,评价长期被动吸烟的大鼠肺组织DNA的氧化损伤程度。方法健康雄性SD(Sprague-Dawleyrats)大鼠20只,随机分为4组:被动吸烟1个月模型组(Smoke-1M组)及其对照组(Control-1M组),被动吸烟4个月模型组(Smoke-4M组)及其对照组(Control-4M组)。被动吸烟组每次烟熏1h,每天2次,每次用烟5支。被动吸烟1个月、4个月后,分别取大鼠肺组织检测其DNA中的8-oxo-dGsn含量。结果被动吸烟1个月后,大鼠肺组织DNA中8-oxo-dGsn含量高于其正常对照组(P<0.05);被动吸烟4个月后,肺组织DNA中8-oxo-dGsn含量比正常对照组增加显著(P<0.01)。结论被动吸烟1个月即可造成大鼠肺组织DNA的氧化损伤,被动吸烟大鼠肺组织中DNA氧化损伤程度随烟龄增长有积累趋势,被动吸烟是肺组织中DNA氧化损伤的重要原因。 陈连国 王蒙蒙 干伟 陈晓乐 罗顺斌 蔡剑平 胡国新关键词:被动吸烟 氧化应激 不同年龄恒河猴羟基脱氧乌苷表达水平的研究 2017年 目的研究白细胞、血浆及尿液中8一羟基脱氧鸟苷(8-Hydroxy-2’deoxyguanine,8-oxodG)在不同年龄阶段恒河猴的表达水平的变化。方法采用30只雌性恒河猴,年龄分别为1岁、5岁、10岁、15岁、20岁、25岁组,每组5只。收集晨尿10m1和空腹静脉血5ml,采用高效液相色谱-串联质谱法检测血浆、白细胞及尿液中的8-oxodG表达水平。结果血浆、白细胞及尿液中的8-oxodG均随年龄的增加而增加,具有增龄性变化。25岁组血浆中的8-oxodGsn含量是1岁组的1.8倍,白细胞8-oxodGsn含量是1岁组的1.6倍。尿液中的8-oxodG含量是1岁组的1.4倍,差异均有统计学意义(P〈O.05)。而且与血浆比较,尿液中的8-oxodG含量为血浆的40倍。结论8-oxodG随年龄增加表达水平也在增加,8-oxodG可作为检测衰老标记物之一。 史飞 聂犇 干伟 周艳秋 蔡剑平关键词:衰老 恒河猴 自由基 低剂量饮酒抑制大鼠肝组织DNA中8-oxo-dGsn水平 2013年 目的检测低剂量饮酒大鼠肝组织DNA中氧化标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-oxo-dGsn)水平,评价低剂量饮酒对肝脏组织氧化应激的影响。方法 4月龄的健康雄性SD大鼠48只,随机分为对照组和饮酒组,饮酒组每天灌胃56度二锅头酒每天每公斤低于2g(<2g/kg),对照组每天灌胃同等体积的生理盐水。在灌胃4、8、12周时,用放射性核素稀释高效液相-串联质谱(ID-LC-MS/MS)方法检测大鼠肝组织DNA中氧化标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-oxo-dGsn)含量;用分光光度法测定抗超氧阴离子(O2-)能力和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力。结果低剂量饮酒4、8、12周后的肝组织DNA中8-oxo-dGsn含量均较同时间点对照组低,差异有统计学意义(P<0.05);低剂量饮酒4、8、12周后的肝组织中抗O2-能力与GSH-PX活性均增强,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论低剂量饮酒可抑制大鼠肝组织DNA中的氧化水平,可能与肝脏中抗氧化酶活性的增高有关。 王蒙蒙 陈连国 干伟 罗顺斌 蔡剑平 胡国新