任立新
- 作品数：2 被引量：9H指数：1
- 供职机构：山西医科大学第二医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 兔膝关节软骨单位体外酶解法消化 分离的实验研究被引量：8
- 2010年
- 目的探讨兔膝关节软骨单位(Chondron)体外酶解法消化、分离的可行性及实验方法。方法 2月龄新西兰白兔8只,随机分为2组,各4只。无菌条件下剖取双膝关节全层软骨,一组采用常规0.4%Pronase酶和0.025%Ⅱ型胶原酶依次消化为软骨细胞;另一组采用0.3%dispase酶和0.2%Ⅱ型胶原酶联合搅拌消化3h为软骨单位。利用倒置显微镜观察、细胞爬片苏木素-伊红(HE)和Ⅵ型胶原免疫荧光染色以及微系统测试分析仪进行软骨细胞及单位形态学分析,Annexin-Ⅴ/PI流式细胞术检测软骨细胞及单位早期凋亡率。结果倒置显微镜下软骨单位主要由1或几个串珠状细胞形态构成,透亮程度较差;而软骨细胞均表现为单一透亮的圆形细胞形态。软骨细胞HE染色呈爬片形态,胞质膨松透亮;软骨单位细胞周围存在一层淡染基质成分,且Ⅵ型胶原免疫荧光染色强阳性表达,界限清晰,可见大量由其包裹1、2、3或4个软骨细胞的单位形态。微系统分析仪下软骨单位由高到低均分为细胞核、细胞质及PCM三层结构,每一层梯度高度约0.4μm。急性消化软骨细胞和单位在活细胞率、早期及晚期凋亡率方面差异无统计学意义。结论 0.3%dispase酶和0.2%Ⅱ型胶原酶联合搅拌消化3h可以成功获取兔膝关节软骨单位,为其体外进一步研究奠定基础。
- 段王平孙振伟李琦任立新卫小春
- 关键词：软骨细胞酶解法
- K＋、Cl-离子通道阻滞对体外培养兔关节软骨细胞基质合成代谢的影响被引量：1
- 2011年
- 目的观察阻断体外培养兔关节软骨细胞膜上的K＋、cl-离子通道对其糖胺多糖（GAG）、II型胶原基质合成代谢的影响。方法2个月龄新西兰白兔，无菌条件下切取双膝关节软骨，酶解法分离软骨细胞，以5×10^4／孔接种于24孔板中。正常培养2d细胞贴壁后换液，并以12个孔为1组随机分为3组，对照组：用DMEM／F12正常培养；K＋离子通道阻滞组（简称4-AP组）：利用含1mmol／L4-氨基吡啶（4一AP）的DMEM／F12培养，特异性阻断电压门控型K＋离子通道；c1一离子通道阻滞组（简称SITS组）：利用含1mmol／L4-乙酰氨基4＋-异硫氰基_2，2＋．乙拌磷酸均二苯乙烯（SITS）的DMEM／F12培养，阻断阴离子通道，主要是Cl-离子通道。分别在换液后第3、6、9天留取各孔上清液并分为2份，1份以阿尔新蓝法检测其GAG的含量，同时另1份以酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测Ⅱ型胶原的含量（n=12）。结果4-AP组在第3天时与对照组比较GAG含量明显下降（P〈0．05），但第6天和第9天差异无统计学意义（P〉0．05），同时在第3天和第6天Ⅱ型胶原含量显著增加（P〈0．05），第9天时有下降趋势，但差异无统计学意义（4-AP组GAG含量分别为17．23±1．47、20．98±2．61、33．13±8．13；11型胶原含量分别为0．793±0．214、0．789±0．084、0．715±0．388）；SITS组在第3、6、9天与对照组比较GAG含量都显著增加（P〈0．05），同时在第3天和6天Ⅱ型胶原含量显著增加（P〈0．05），第9天仍然有增加的趋势，但差异无统计学意义（SITS组GAG含量分别为54．30±4．43、56．47±3．14、58．71±2．50；II型胶原含量分别为0．793±0．125、0．853±0．060、0．925±0．053）。结论阻断K＋、cl-离子通道后显著促进软骨细胞GAG、Ⅱ型胶原的合成，尤其是阻断cl-离子通道后，GAG的合成增加尤为明显。
- 任立新王琦丁娟杨朝晖段王平卫小春
- 关键词：软骨细胞离子通道糖胺多糖
