王慧
- 作品数：11 被引量：60H指数：2
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：美国帕斯适宜卫生科技组织基金国家自然科学基金World Health Organization更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 中国人乳头瘤病毒30型分布及型下分类研究被引量：1
- 2023年
- 目的了解国内人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)30型(HPV30)的感染情况及型下系(lineage)分类。方法收集就诊于中国人民解放军总医院妇产科,并在30d内进行新柏氏薄层液基细胞学检测女性患者宫颈脱落细胞样品,从中提取DNA并进行HPV30型特异性聚合酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR)检测;对HPV30阳性样本进行病毒基因组全长PCR扩增和序列分析。结果1600例受试者中,共获得HPV30阳性样品9例(0.56%,9/1600),其中6例HPV30基因组全长PCR扩增成功;9例HPV30毒株在型下系分类上都属于A,其中A1占66.7%(6/9)、A4占22.2%(2/9)、A5占11.1%(1/9)。结论国内女性中存在HPV30感染,型下系分类上全部HPV30毒株都属于A。
- 李颖郭一帆王慧王娇张杰琼刘宏图
- 关键词：宫颈癌
- 高通量测序揭示EBV再激活过程中宿主细胞miRNA差异表达的动态变化
- 2025年
- 目的明确EBV潜伏感染细胞中EBV再激活后宿主细胞miRNA表达谱的动态变化。方法使用佛波酯(TPA)诱导Raji细胞促使EBV激活进入裂解期,提取EBV激活后的细胞总RNA,构建sRNA文库,采用Illumina SE50平台进行高通量测序,通过生物信息学分析差异表达的miRNA,预测其潜在靶基因并进行功能富集分析;使用miRanda和RNAhybrid软件预测和筛选宿主细胞已知和未知miRNA中能够潜在靶向结合EBV基因组的miRNA。使用实时定量RT-qPCR验证差异表达的宿主细胞未知miRNA。结果通过高通量测序鉴定出宿主细胞miRNA共1301个,包括已知1189个、未知112个。其中差异表达的宿主细胞miRNA包括已知264个、未知13个。RNA二级结构预测结果显示未知miRNA均具有典型的pre-miRNA发夹结构。采用miRNA茎环法RT-qPCR对其中2个未知miRNA(Novel_miR_183和Novel_miR_242)进行验证,结果显示其在TPA激活组和未激活组间的表达差异与高通量测序结果中的差异无统计学意义(Novel_miR_183:F=1.407,P=0.3707;Novel_miR_242:F=1.277,P=0.3970)。宿主细胞差异表达的miRNA靶基因参与了多种重要的生物学过程和信号通路。1189个已知宿主细胞miRNA和108个未知miRNA可能靶向结合EBV基因组。结论EBV再激活导致Raji细胞中miRNA表达谱的显著变化,差异表达的miRNA可能靶向EBV基因组进而参与调控EBV的感染和复制过程,从而在EBV的感染、潜伏和再激活过程中发挥重要的调控作用。
- 李昊天王慧王娇卢学新张杰琼王明明于东渤李颖王世文
- 关键词：EBVRAJI细胞MIRNA高通量测序
- 实时荧光定量PCR与酶法预处理联合应用对H9N2禽流感病毒灭活效果评价的初步研究
- 2025年
- 本研究旨在建立一种快速、准确的禽流感病毒灭活效果评价方法。传统方法通过鸡胚繁殖或细胞培养对禽流感病毒灭活效果进行定量检测,但存在操作时间长且无法客观反映残余病毒量的局限性。实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)虽可作为直接定量消毒剂作用后的残余病毒量的一种方法,但无法评估病毒的感染性。本研究将RT-qPCR技术与酶法预处理相结合,对中低效消毒剂新洁尔灭和75%乙醇灭活H9N2病毒的效果进行评估。结果显示,333 U/mL的蛋白酶K处理30 min,可有效降解受损的病毒囊膜蛋白;随后使用0.2 mg/mL的RNase A处理30 min,可降解裸露的病毒RNA。1%和0.25%的苯扎溴铵分别作用5 min后,经酶法预处理联合RT-qPCR检测,病毒基因组水平分别降低5.67和5.62 lg拷贝数/μL;75%乙醇作用1 min,病毒基因组水平降低5.65 lg拷贝数/μL;作用时间延长至5 min时,病毒基因组水平降低至检测值以下。本研究通过RT-qPCR联合酶法预处理建立了定量评价苯扎溴铵和75%乙醇有效灭活H9N2禽流感病毒的方法 。
- 王慧王明明张杰琼王娇李颖王大燕王世文卢学新董婕
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型实验室生物安全
- 一种流行病学数据集成系统及方法
- 本发明涉及互联网+医疗技术领域，具体公开了一种流行病学数据集成系统及方法，包括总控端和分控端，所述总控端与所述分控端之间可以进行数据传输；所述分控端用于生成当地病例库和环境参数数据库；确定关键词，建立与当地网络监测站的连...
- 李颖刘宏图王慧王娇王湛
- 突发急性传染病数据脱敏方法
- 本发明是一种突发急性传染病数据脱敏方法，该方法包括如下步骤：101、输入文件数据；点击选择数据原始数据，选取需要脱敏文件；102、字段脱敏设置；设置数据保存模式，选择脱敏字段，并选择脱敏方式；103、输出脱敏后文件数据；...
- 王娇王慧李颖刘宏图
- 文献传递
- 不同接种方法在单纯疱疹病毒分离中的实践应用
- 2025年
- 目的建立混接法病毒分离方案,评估悬接法和混接法分离单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)的效果。方法使用单纯疱疹病毒1型(HSV-1)F株和CDC-P1株模拟HSV感染的临床样本,采用悬接法和混接法从中分离HSV-1。通过半数组织培养感染剂量(50%tissue culture infective dose,TCID_(50))测定评估不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)、接种细胞密度以及病毒吸附时间条件下的混接法病毒分离效果,比较低病毒载量条件下两种方法的病毒检出阳性率。结果在MOI为0.005、病毒吸附时间为15 min、接种细胞密度为1×10^(6)个/ml的条件下进行混接法病毒分离,达到了较好的HSV-1分离效果。当样本病毒滴度为100 TCID_(50)/ml时,混接法的阳性率达到100%,而悬接法的阳性率在培养72 h和96 h后分别为50.7%(38/75)和52.0%(39/75)。当样本病毒滴度为10 TCID_(50)/ml时,混接法的阳性率为100.0%,而悬接法的阳性率为0。结论混接法在HSV分离效率上明显优于悬接法。在病毒载量高的情况下,悬接法和混接法均能有效分离HSV-1;对于病毒载量较低的临床样本,混接法具有更高的适用性。
- 王慧张杰琼李颖王娇王明明李昊天于东渤王世文卢学新
- 关键词：单纯疱疹病毒病毒分离
- 自噬受体蛋白p62的表达及功能研究被引量：6
- 2022年
- 目的:构建人自噬受体蛋白p62的真核表达质粒,初步探索p62在氧化应激中的功能。方法:从HeLa细胞系中扩增SQSTM1基因,插入真核表达载体nFLAG/pRK5,构建p62的重组表达质粒nFLAG-SQSTM1/pRK5。采用HEK293T细胞表达带有FLAG标签的重组p62蛋白,免疫共沉淀法观察p62和核因子E2相关因子2(Nrf2)相互作用。结果:重组表达质粒nFLAG-SQSTM1/pRK5经琼脂糖凝胶电泳和测序对比均与预期结果一致,Western blot实验中p62蛋白可正常表达,且大小与预期结果一致。免疫共沉淀和蛋白质谱证明p62与氧化应激转录调控蛋白Nrf2可相互作用。结论:采用真核表达系统成功表达p62蛋白,并发现其与Nrf2可相互作用,为进一步研究p62与Keap1-Nrf2通路关系提供依据。
- 王娇张莉李颖王慧王湛刘宏图
- 关键词：自噬真核表达
- 中国七个地区1998-2005年急性腹泻住院患儿中星状病毒感染研究被引量：53
- 2006年
- 目的研究中国5岁以下腹泻住院患儿中星状病毒感染的流行病学特点,确定流行毒株血清型。方法选择国内7个地区收集5岁以下腹泻住院患儿粪便标本,应用酶联免疫或PCR方法检测星状病毒,对星状病毒阳性标本应用RT-PCR方法分型并经测序确证。结果1998-2005年在7个地区的凋查点共收集1668份急性腹泻粪便标本,检测出星状病毒阳性标本91份,平均检出率为5．5％;病例全年均有发生,发病高峰主要集中在10月份到次年1月份;95％患儿年龄在2岁以下,其中以9-11月龄儿童发病最多,检出率为7.4％,12-17月龄、6-8月龄、0-6月龄儿童的检出率依次为6．1％、5.6％、5．6％。确定型别的49份标本中45份为HAstV-1型,1例为HAstV-3型,2例为HAstV-5型,1例为HAstV-8型。结论星状病毒是中国婴幼儿病毒性腹泻的重要病原之一,流行毒株以1型为主,同时存在多个型别的散在流行。
- 方肇寅孙亚萍叶新华王慧章青段招军Xi JiangDuncan SteeleRoger Glass
- 关键词：星状病毒巢式逆转录聚合酶链反应流行病学
- 核转录因子Nrf2过表达对人乳头瘤病毒16型E6蛋白的抑制作用研究
- 2025年
- 目的探讨核转录因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor,Nrf2)过表达对高危型人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus type 16,HPV16)E6蛋白的影响。方法构建pRK5-FLAG-NFE2L2质粒,在HEK293T细胞中共转染pRK5-FLAG-NFE2L2和pRK5-HA-HPV16E6质粒,通过免疫印迹法(Western blot,WB)检测两个蛋白的表达。其次,利用体外转录系统表达pRK5-HA-HPV16E6和pRK5-FLAG-NFE2L2质粒,观察两者的表达情况。最后,在HEK293T细胞中共转染pEGFP-HPV16E6和pLVX-mCherry-Nrf2质粒,利用荧光显微镜观察E6蛋白和Nrf2蛋白的细胞定位。结果Nrf2蛋白在HEK293T细胞中成功过表达,WB结果显示Nrf2对HPV16 E6蛋白表达有抑制作用,且有明显的剂量依赖性。在兔网织红细胞表达系统中HPV16 E6蛋白的表达受到Nrf2蛋白的影响,而小麦体外表达系统中HPV16 E6的表达不再受到Nrf2的抑制。荧光成像进一步显示,Nrf2和HPV16 E6无细胞内共定位。结论核转录因子Nrf2过表达可降低HPV16 E6蛋白的表达,但二者在细胞内无共定位。
- 王娇王慧张杰琼王明明卢学新王世文李颖
- 关键词：人乳头瘤病毒16型E6
- 高效分离1型单纯疱疹病毒感染细胞外泌体的研究
- 2021年
- 目的建立并优化1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1,HSV-1)感染HEp-2细胞外泌体的分离方案。方法收集HSV-1感染HEp-2的细胞培养上清,经差速离心和滤膜过滤对上清液进行预处理,使用外泌体提取试剂(total exosome isolation,TEI)结合尺寸排除色谱法(size-exclusion chromatography,SEC)的组合方案对粗提的外泌体进行分离和纯化,最后经超滤浓缩,获得高纯度外泌体。使用3种检测方法对纯化的外泌体进行表征鉴定。结果Western blot结果显示,HSV-1感染或未感染HEp-2细胞外泌体均含有外泌体标志蛋白TSG101和CD9,另外,HSV-1感染细胞外泌体含有gB、VP16和ICP5等3种病毒蛋白。透射电镜观察显示,纯化的外泌体近似圆形,具有膜结构,直径50~150 nm,未发现典型HSV-1病毒颗粒。NTA结果显示,纯化的外泌体峰值粒径均为112.2 nm;单纯HEp-2细胞来源的粒子峰值浓度为3.4×10^(9)个粒子/ml,HSV-1感染细胞来源的粒子峰值浓度为4.1×10^(9)个粒子/ml。结论本研究建立了高效优化的HSV-1感染细胞外泌体分离纯化方案。
- 张莉王娇王湛李颖王慧宋敬东刘宏图
- 关键词：1型单纯疱疹病毒HEP-2细胞外泌体纯化
