潘勇兵
- 作品数：24 被引量：45H指数：4
- 供职机构：武汉生物制品研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗人CD25嵌合抗体基因的构建及其瞬时表达研究被引量：1
- 2011年
- 目的:构建抗人CD25嵌合抗体基因并在哺乳动物细胞中进行瞬时表达和初步鉴定。方法:采用RLM-RACE法克隆WuTac抗体可变区和信号肽序列,并利用基因拼接法构建嵌合抗体基因。用脂质体法瞬时转染三种哺乳动物细胞,并使用ELISA、FCM、WB、Dot blot和免疫荧光法进行检测。结果:成功克隆WuTac抗体可变区和信号肽序列,并构建了抗人CD25嵌合抗体表达质粒。瞬时转染结果表明所表达的嵌合抗体保留了亲本抗体WuTac的抗原结合力。结论:成功构建了抗人CD25嵌合抗体基因,为其进一步研究打下基础。
- 胡迪超张爱华潘勇兵詹珊珊杨晓明
- 关键词：CD25基因拼接嵌合抗体
- 抗人TNF-α单克隆抗体液质联用肽图分析方法的建立及验证被引量：5
- 2017年
- 目的:建立液相色谱-质谱联用肽图分析方法用于抗人肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor alpha,TNF-α)单抗的专属性鉴别。方法:TNF-α单抗样品经盐酸胍变性、还原,释放出的游离半胱氨酸残基进行烷化,还原剂中和过量的烷化剂。超滤置换酶切缓冲液后进行胰酶酶切并终止。色谱条件:采用Waters UPLC BEH 300 C_(18)(2.1 mm×150mm,1.7μm)色谱柱,以0.1%甲酸水溶液(A)-0.1%甲酸乙腈溶液(B)为流动相,梯度洗脱(5-120 min,2%B→45%B),流速为0.2 mL·min^(-1),检测波长为214 nm;质谱条件:采用电喷雾离子源及正离子模式,数据采集范围m/z为100~1990。结果:TNF-α单抗重链及轻链的6个互补决定区(CDR)对应肽段由质谱鉴定出,HC CDR2及HC CDR3在色谱峰图中共流出;利妥昔单抗用于评估本方法的专属性,结果显示本方法专属性强,且不受基质的干扰;选定m/z 1 344(M^(+5))的色谱峰为参考峰,根据CDR的相对保留时间考察该方法的变异程度,5次重复测定CDR相对保留时间的RSD在0.57%~1.19%之间;中间精密度考察测定的相对保留时间的RSD在0.00%~1.08%之间;胰酶酶切比例在20:1~30:1,酶切时间在17~23h范围内变化时,相对保留时间的均较小,符合方法耐用性的要求;样品消化后在8℃储存24h以及-20℃储存5d的稳定性良好。结论:基于CDR相关肽段鉴别的液质联用肽图分析方法可定性鉴定出TNF-α单抗,方法学验证结果显示该方法适用于抗人TNF-α单抗的专属性鉴别,可用于其质量控制及批检验放行。
- 桂芳杨兰兰潘勇兵张雅婷张银川
- 关键词：单克隆抗体液质联用
- 抗CD25人鼠嵌合抗体的构建与瞬时表达
- 目的：构建抗CD25嵌合抗体的真核表达载体并在293T细胞中进行瞬时表达。
方法：使用RT-PCR法，设计针对信号肽的简并引物钓取抗CD25杂交瘤细胞的重、轻链可变区基因，以质粒PAG4622为模板钓取人抗体I...
- 潘勇兵张爱华胡迪超闭兰杨晓明
- 关键词：嵌合抗体流式细胞术真核表达
- 文献传递
- 单克隆抗体药物国内外研发进展被引量：1
- 2016年
- 现代抗体药物主要包括治疗性单克隆抗体（单抗）和具有抗体效应功能的重组FC融合蛋白，具有特异性高、疗效确切等优点，已广泛应用于肿瘤、自身免疫病等疾病的靶向治疗以及国家战略储备，早已成为世界生物制药领域的主力军，具有广阔的临床价值和市场前景。
- 张银川潘勇兵张爱华
- 关键词：单克隆抗体药物治疗性单克隆抗体自身免疫病融合蛋白靶向治疗制药领域
- 全人源抗人肿瘤坏死因子-α单克隆抗体毛细管等电聚焦鉴别方法的建立及验证
- 2016年
- 目的建立用于全人源抗人肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)单克隆抗体鉴别的毛细管等电聚焦(capillary isoelectric focusing,c IEF)方法,并进行验证。方法通过优化c IEF过程中各关键实验参数,如阴极稳定剂浓度、阳极稳定剂浓度、两性电解质浓度、3-10与8-10.5两性电解质比例、聚焦时间、聚焦电压,建立c IEF方法,并对方法的专属性、重复性、中间精密度进行验证。结果确定c IEF方法的实验参数为:阴极稳定剂浓度30 mmol/L,阳极稳定剂浓度3.2 mmol/L,3-10两性电解质在样品溶液中体积比为6.0%,聚焦电压为25 k V,聚焦时间为10 min。保护剂在样品出峰时间无紫外吸收峰,阳性对照阿达木单抗与样品出峰时间及峰形一致,阴性对照利妥昔单抗生物类似药、贝伐珠单抗、曲妥珠单抗生物类似药、西妥昔单抗与样品出峰时间及峰形均不一致,且对样品无干扰;样品制备重复性主峰等电点的相对标准差(relative standard deviation,RSD)为0.114%,中间精密度RSD为0.837%。结论建立的c IEF方法 p H梯度和精密度良好,专属性较强,适用于制品的批放行鉴别试验。
- 杨兰兰张银川吴小丽张雅婷桂芳吴师师闭兰潘勇兵
- 关键词：肿瘤坏死因子-Α单克隆抗体
- 抗人CD4嵌合抗体基因真核表达质粒的构建及其瞬时表达被引量：2
- 2011年
- 目的构建抗人CD4嵌合抗体基因真核表达质粒,并在哺乳动物细胞中进行瞬时表达。方法采用RLM-RACE法克隆WuT4抗体可变区和信号肽序列,并采用基因拼接法构建嵌合抗体基因真核表达质粒。采用脂质体法瞬时转染HEK293T、CHO-DHFR-和COS-7 3种哺乳动物细胞,ELISA法检测转染细胞上清中嵌合抗体的浓度,流式细胞术、Western blot和Dotblot分析嵌合抗体的抗原结合活性,并对表达的嵌合抗体进行免疫荧光分析。结果成功克隆了WuT4抗体可变区和信号肽序列;抗人CD4嵌合抗体共表达质粒pOptiVEC-T4H和pcDNA3.3-T4L构建正确;表达的嵌合抗体保留了亲本抗体的抗原结合力,并能特异性识别人CD4分子;免疫荧光分析表明,表达的嵌合抗体含人抗体的重、轻链恒定区。结论 已成功构建了抗人CD4嵌合抗体基因真核表达质粒,并能在哺乳动物细胞中瞬时表达,为其进一步研究奠定了基础。
- 胡迪超张爱华潘勇兵端义坤孙可芳张银川杨晓明
- 关键词：基因拼接嵌合抗体
- 人用重组单克隆抗体电荷异质性的研究进展被引量：9
- 2016年
- 人用重组单克隆抗体是一种具有复杂的翻译后修饰的生物大分子,其微观不均一性导致单克隆抗体药物并不是单一纯净的物质,而是多种产品相关物质的混合物,因此,对这些产品相关的变体及其降解方式的进一步研究尤为重要。几乎所有变体均能导致抗体表面电荷分布的差异,电荷变量因此成为监测抗体降解最灵敏的方式,也是对产品质量一致性分析的一项重要参考标准。本文对几种主要电荷变体的成因、检测方法及其对产品有效性影响的研究进展作一综述。
- 张坤明潘勇兵张爱华
- 关键词：单克隆抗体
- 抗TRAJL细胞外段单克隆抗体的研制
- 研究背景肿瘤坏死因子相关的调亡诱导配体(TNF-related apoptosis-induced ligand,TRAIL)是新近发现的TNF超家族新成员,全长281个氨基酸残基,活性部分位于胞外第114-281氨基酸...
- 潘勇兵全家妩
- 关键词：杂交瘤细胞单克隆抗体组织表达分析
- 文献传递
- 表达全人源抗人IgE单抗的细胞株构建及筛选被引量：2
- 2015年
- 目的:构建及筛选高效表达原创性全人源抗人Ig E单克隆抗体的重组工程细胞株。方法:将采用核糖体展示技术筛选到的原创性全人源抗人Ig E单链抗体(sc Fv)基因改构设计为Ig G1κ型全长抗体,构建重组真核表达质粒并电转染CHO-S细胞,Dot-blot法选取多株高表达克隆进行40ml摇瓶批次培养,再据细胞生长特征及抗体表达量选取高表达克隆进行40ml摇瓶及3L摇瓶流加培养研究,选取候选细胞株并对改构前后抗体的生物学活性进行比较研究。结果:成功构建了p MH3-H、p MH3-L、p CApuro-H、p CApuro-L四种重组真核表达质粒并成功共转染CHO-S细胞。完成了4次电转染8轮细胞克隆筛选,获得两株表达量较高的候选克隆Mab1#和Mab2#,在3L摇瓶流加培养中抗体表达量分别达到470mg/L及499mg/L。生物膜光干涉技术(Bio-Layer Interferometry,BLI)亲和力结果显示Mab1#及Mab2#两株单抗亲和力均达到nmol/L级(10-9),与现有唯一上市的抗人Ig E单抗药物奥马珠单抗(Omalizumab)的亲和力相当。选取Mab1#全长抗体与其改构前的母本单链抗体的表面等离子共振技术(surface plasmon resonance,SPR)中和活性比较结果显示Mab1#抑制h Ig E与FcεRI结合的EC50为3nmol/L,EC90为9nmol/L,较改造前亲和力提高了4.3倍,中和活性(EC50)提高了23.7倍,中和活性(EC90)提高了41.3倍。结论:成功将表达原创性全人源抗人Ig E的单链抗体(约25k Da)改造为亲和力及中和活性均大幅提升的全长抗体(约150k Da),获得2个候选细胞株。
- 张银川刘萌萌张雅婷桂芳张爱华闭兰潘勇兵
- 关键词：单克隆抗体细胞株
- 新型冠状病毒中和抗体的研发策略及研究进展被引量：10
- 2020年
- 新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)已形成全球大流行,对公共健康、社会经济等造成严重负担,迫切需要有效的控制手段。抗体在突发烈性传染病的预防及治疗中已具有良好的应用先例。目前全球有数百个SARS-CoV-2抗体研发项目正采用不同的策略开展研究,其中部分已进入临床。本文从靶标的选择、抗体的筛选技术、功能评价及可能面临的挑战四个方面,对目前SARS-CoV-2中和抗体的研发策略及研究进展作一综述。
- 杜剑晖潘勇兵杨晓明(审校)
- 关键词：中和抗体单克隆抗体免疫逃逸
