杜晓华
- 作品数：82 被引量：164H指数：8
- 供职机构：甘肃农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金甘肃省教育厅研究生导师科研项目甘肃省高等学校基本科研业务费项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生理学更多>>
- 基于塞内卡病毒A猪源中和性Fab抗体的竞争ELISA检测方法的建立与评价被引量：1
- 2025年
- 塞内卡病毒病是由塞内卡病毒A(Senecavirus A,SVA)引起的一种主要感染猪的病毒性传染病,监测其流行情况对防控具有重要意义。为了建立一种快速检测SVA中和抗体的ELISA检测方法,本研究利用HEK293F细胞表达SVA特异性猪源Fab(fragment of antigen binding)抗体,经间接ELISA、免疫荧光试验(immunofluorescence assay,IFA)、病毒中和实验(virus neutralization test,VNT)、蛋白免疫印迹(Western blotting,WB)等方法验证Fab抗体的生物学活性,将其用生物素标记后作为竞争抗体,以竞争ELISA(competitive ELISA,C-ELISA)反应模式建立一种SVA中和抗体C-ELISA检测方法,并对其敏感性、特异性、重复性、与VNT的符合率进行测定。结果表明,成功制备了1株具有中和活性的Fab抗体,且与SVA之间有较高的亲和力,将其命名为1M33Fab,用生物素标记后命名为Bio-1M33Fab;确定C-ELISA方法的SVA粒子最佳包被浓度为1μg/mL、Bio-1M33Fab最适工作浓度为0.5μg/mL、待检血清样本最佳稀释比例为1:10、酶标亲和素最佳稀释比为1:30000;确定抑制百分率(percent inhibition,PI)为47%时,敏感性和特异性最高,分别为96.88%和100%,且与常见的主要猪病毒病阳性血清不发生交叉反应;批内变异系数范围为1.12%–7.34%、批间变异系数范围为1.10%–8.97%,表明重复性较好;利用该方法和VNT同时检测了224份临床猪血清样本,2种方法的符合率为93.75%。本研究利用SVA猪源Fab抗体成功建立了一种检测SVA中和抗体的C-ELISA方法,为开发检测试剂盒产品奠定了基础。
- 梁玉斌马雪青何宜轩王彩荷李坤李平花付元芳卢曾军杜晓华刘霞孙普
- 关键词：竞争ELISA中和抗体
- 一种基于截短N蛋白的猪丁型冠状病毒抗体ELISA检测方法的建立被引量：1
- 2025年
- 为了建立一种猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)抗体检测方法,将PDCoV CH/XJYN/2016毒株N基因序列插入原核表达质粒载体pColdⅡ中,表达重组蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2,经SDS-PAGE分析和Ni+-NTA纯化后,检测重组原核蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2与猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)阳性血清的反应原性和特异性。同时对重组真核蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2进行Western blotting和间接免疫荧光实验验证分析。最后使用重组原核蛋白PDCoV-N2建立间接ELISA方法,优化反应条件,检测敏感性、特异性及重复性,并对102份临床血清进行了检测。重组原核蛋白PDCoV-N2与PEDV抗血清交叉反应较低。以PDCoV-N2蛋白制备的间接ELISA方法的最优条件为:抗原包被浓度1.25μg/mL,37℃包被1 h,BSA封闭液4℃过夜,血清最佳稀释浓度1:50,37℃孵育1 h,酶标二抗最佳稀释比例为1:80000,37℃孵育1 h,加入四甲基联苯胺(tetramethylbenzidine,TMB)显色液37℃反应10 min。待检样品的S/P值(样本值–阴性对照值)/(阳性对照值–阴性对照值)≥0.45为阳性,S/P值≤0.38为阴性,S/P值介于0.45和0.38之间,则为可疑。检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissiblegastroenteritis of swine,TGEV)、口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)、非洲猪瘟病毒(african swine fever virus,ASFV)阳性血清,结果显示,其他冠状病毒的S/P值均小于0.38,表明其具有良好的特异性;PDCoV抗血清800倍稀释后仍为阳性;批间和批内重复性实验结果显示,本方法变异系数均小于10%;临床血清样本检测结果显示,该方法与中和实验的符合率为94.12%。本研究基于截短的PDCoV N蛋白,建立了能够检测抗PDCoV特异性IgG抗体的ELISA方法,且该方法敏感、特异、稳定、重复性好,为PDCoV的临床诊断提供了新的方法。
- 王东升于瑞明张莉萍白英杰刘霞王永录杜晓华刘新生
- 关键词：IGG抗体间接ELISA
- 三种型号ABS塑料对制作绵羊支气管动脉铸型标本的影响被引量：2
- 2016年
- 探寻适宜于制备支气管动脉铸型标本的丙烯腈-丁二烯-苯乙烯(ABS)铸型剂材料。选用3种不同型号的ABS(PA-749SK、D-120、PA-717CK)对绵羊支气管动脉铸型标本的制作效果进行比较。结果表明,PA-749SK型ABS制备的铸型标本柔韧性和细密度较好;PA-717CK型ABS制备的标本表面光泽度好,但柔韧性和细密度较差;D-120型ABS制备的标本各项性能介于前两者之间。说明受试的3种型号ABS中,PA-749SK型号的ABS更适用于制作绵羊支气管动脉铸型标本,也可以作为其他细小管道的铸型材料被选用。
- 王宁王白雪韩志磊刘英杜晓华申超超芦延珍
- 关键词：丙烯腈-丁二烯-苯乙烯支气管动脉铸型标本
- 天祝白牦牛MSTN基因第3外显子的多态性分析被引量：8
- 2011年
- 为分析天祝白牦牛MSTN基因第3外显子的遗传多态性及变异特征,采用PCR-SSCP方法检测了698头天祝白牦牛MSTN基因第3外显子的多态性,对群体内各等位基因进行了克隆、测序。结果显示,天祝白牦牛MSTN基因第3外显子有AA、AB和BB 3种基因型,其基因型频率分别为0.892 6、0.106 0和0.001 4,由A和B 2个等位基因控制。序列分析表明,天祝白牦牛MSTN基因第3外显子在41bp处发生了A→G突变,但并未导致编码氨基酸序列发生改变。统计结果表明,天祝白牦牛MSTN基因第3外显子呈低度多态。
- 闫永红刘霞刘英罗玉柱杜晓华
- 关键词：MSTN基因遗传多态性聚合酶链反应-单链构象多态性白牦牛
- 脑红蛋白在家兔视网膜中的分布被引量：1
- 2015年
- 目的探讨脑红蛋白(NGB)在家兔视网膜的分布特征。方法选择健康成年家兔5只,利用免疫组织化学染色SP法,观察NGB在家兔视网膜中的分布情况。结果 NGB在家兔视网膜的视神经纤维层、节细胞层、内网状层、外网状层、光感受器内节段和色素上皮层中有强阳性表达,在视网膜的内核层有弱阳性表达,在视网膜的外核层和光感受器外节段中未见有阳性表达,内界膜、外界膜和视神经中亦发现有NGB阳性表达。家兔视网膜NGB阳性表达的细胞类型主要有节细胞、双极细胞和光感受器细胞,其中节细胞的阳性表达定位于细胞质,胞核中未见表达。结论除外核层和光感受器外节段外,NGB在家兔视网膜其它各层中均有表达,提示NGB在维持视网膜氧代谢平衡中发挥着重要作用。
- 杨阳刘霞曾国敏高雪晋梁春花杜晓华
- 关键词：脑红蛋白视网膜免疫组织化学家兔
- 甘南牦牛NGB基因的克隆及序列分析被引量：18
- 2013年
- 【目的】对甘南牦牛NGB基因进行克隆和序列分析,同时探讨NGB的生理功能。【方法】采用TA克隆法克隆甘南牦牛NGB基因,运用多种软件对其基因序列及编码产物的结构、功能进行了生物信息学分析。【结果】甘南牦牛NGB基因全长3 844bp,包括4个外显子和3个内含子,其内含子中存在2个反向重复序列和1个正向重复序列;牦牛NGBCDs区全长456bp,其编码产物是由151个氨基酸残基组成的可溶性蛋白质,分子质量约为16 876.36u,理论等电点为4.86,推测NGB编码产物可能在牦牛物质运输和结合、能量代谢等过程中发挥着重要作用;系统发育树分析表明,甘南牦牛NGB与牛、藏羚羊等物种之间存在较高的同源性。【结论】甘南牦牛NGB基因的成功克隆,为进一步研究牦牛NGB的遗传特性和生理功能奠定了基础。
- 石宁宁杜晓华罗玉柱曹亮刘霞
- 关键词：甘南牦牛脑红蛋白基因克隆生物信息学分析
- 一种带有冷冻功能的石蜡切片机
- 本实用新型公开了一种带有冷冻功能的石蜡切片机，包括底座、脚轮、控制箱、微米调节器、输出轴、夹持部、紧固件、罩盖、罩门、支架、推杆、刀片、制冷机构、管道、控制器及电源；所述底座下表面的四个拐角处安装有脚轮，底座的两端开设有...
- 杜晓华刘霞王海芳何玉琴
- 文献传递
- 不同饲喂条件下犊牛胃形态发育的比较研究被引量：4
- 2011年
- 为探讨3种不同饲喂条件对犊牛胃形态发育的影响,选择新生的健康荷斯坦公犊牛15头,每5头1组,随机分为牛奶和犊牛料自由采食组(Ⅰ组)、牛奶和犊牛料按比例定量采食组(Ⅱ组)和全乳饲喂组(Ⅲ组),饲喂3个月后,用大体解剖学方法,对3组犊牛胃的黏膜上皮颜色、胃黏膜形态各胃室及质量、大小比例进行观察和分析比较.结果表明:Ⅰ组犊牛胃前胃黏膜上皮颜色较深,呈现深褐色或黑色,Ⅱ组与Ⅰ组基本相似,但瓣胃黏膜上皮颜色略浅,Ⅲ组前胃与皱胃黏膜上皮颜色则均为白色;Ⅰ组、Ⅱ组黏膜形态与成年牛胃基本一致,Ⅲ组前胃黏膜乳头略显退化,但皱胃比前2组发达;Ⅰ组、Ⅱ组瘤胃质量占犊牛胃总质量的比例较大,分别为52.76%和49.78%,接近胃总质量的一半,而Ⅲ组为40.42%,占胃总质量的相对比例较小.不同饲喂条件对犊牛胃的形态发育影响显著,全乳饲喂条件下犊牛的前胃发育受到明显抑制,而牛奶与犊牛料自由采食或定量采食条件下的犊牛胃形态发育基本正常.
- 孔令强刘霞刘发央刘英罗玉柱杜晓华
- 关键词：犊牛发育形态学
- 甘肃省常见猪消化道寄生虫病的诊断及预防被引量：2
- 2015年
- 猪的消化道寄生虫病不仅严重影响着肉品的产量和质量,而且严重危害着家畜和人类的健康。本文对甘肃省常见猪的常见消化道寄生虫病的虫体类别和生物学特性进行了描述,论述了临床常见的诊断方法以及防治措施,提出了猪常见消化道寄生虫病的防控办法。
- 刘昊杜晓华
- 关键词：消化道寄生虫病
- 一日龄牦牛肺脏超微结构的形态计量学研究被引量：1
- 2014年
- 为了获得新生牦牛肺脏的形态计量学数据,探讨其与高原低氧环境适应性之间的关联,利用形态计量和超微结构技术相结合的方法,对一日龄牦牛肺脏超微结构的形态计量特征进行了研究,结果显示:一日龄牦牛肺脏中肺泡、肺泡隔、I型上皮、II型上皮、间质、毛细血管内皮以及毛细血管腔的体积密度分别为(0.665±0.026)(0.335±0.026)(0.025±0.002)(0.011±0.001)(0.048±0.004)(0.036±0.003)(0.214±0.017),其中肺泡所占的体积分数最大,II型上皮所占的体积分数最少.肺泡、Ⅰ型上皮、Ⅱ型上皮、毛细血管的面积密度分别为(62.462±5.441)(60.588±5.277)(1.874±0.163)(59.339±5.169)mm2/mm3,其中肺泡的面积密度最大.肺泡、毛细血管、Ⅰ型上皮、Ⅱ型上皮以及间质细胞的数量密度分别为(6.664±0.486)(6.331±0.462)(1.416±0.122)(4.248±0.365)(13.328±0.973)(×103/mm3).一日龄牦牛肺脏气血屏障的算术平均厚度为(1.757±0.048)μm,调和平均厚度为(0.697±0.048)μm,最小厚度约为(0.167±0.009)μm,气血屏障、血浆层和红细胞的氧导率分别为(9.501±2.774)(21.110±2.575)(0.874±0.098),全肺的氧弥散容量为(0.763±0.062)O2ml/(min·mmHg).一日龄牦牛肺脏单位组织结构内肺泡的面积密度和数量密度较高,气血屏障具有相对较小的调和平均厚度与较低的气体弥散阻力,可能是其对高原低氧环境的一种适应性结构.
- 杜晓华刘霞王海芳刘英
- 关键词：肺脏超微结构
