张会
- 作品数：30 被引量：53H指数：5
- 供职机构：东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划黑龙江省自然科学基金黑龙江省高等教育教学改革工程项目更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程农业科学更多>>
- 白曲霉酸性蛋白酶在黑曲霉中表达被引量：7
- 2016年
- 研究分析固态发酵酸性蛋白酶生产菌株及其产品,ITS序列鉴定结果表明,该菌株为曲霉属,质谱分析结果表明其产品为Aspergillus saitoi酸性蛋白酶Aspergillopepsin I（EC.3.4.23.18）。根据Aspergillus saitoi酸性蛋白酶Aspergillopepsin I基因序列pep1（GI：473517）设计引物,以固态发酵酸性蛋白酶生产菌株基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增获得pep1基因。序列分析结果表明,扩增片段与白曲霉Aspergillus kawachii酸性蛋白酶基因组序列相似性为99%,其编码蛋白与白曲霉Aspergillus kawachii酸性蛋白酶（GAA90749.1）相似性为100%,将该基因命名为pep B。构建黑曲霉表达载体p SZHG-pep B,通过农杆菌介导法转化黑曲霉CICC2462,筛选得到在gla A位点发生同源重组纯合转化子。经摇瓶发酵后,对产物进行SDS-PAGE、酶活检测以及酸性蛋白酶酶学性质和酶稳定性研究。结果表明,纯合同源重组菌株经SDS-PAGE检测时在47 ku左右处有明显目的蛋白条带,其发酵产物酸性蛋白酶酶活达5 543 U·m L-1,为出发菌株152倍。对菌株所产酸性蛋白酶酶学性质研究发现,该酶最适反应温度为50℃,最适反应p H 3.0,在4℃和25℃条件下,酶在p H 3.0~4.0时较稳定。
- 李杰吴婷马南王欣杨建乐李健友张会
- 关键词：酸性蛋白酶黑曲霉同源重组分泌表达
- 简易快速高效表达葡萄糖氧化酶基因的黑曲霉培养装置
- 简易快速高效表达葡萄糖氧化酶基因的黑曲霉培养装置，属于微生物学技术领域，由盛皿桶（1）、支架（2）组成，其特征在于：所述的盛皿桶（1）上端横架杆（32）两端的摆轴（33）放置在横支架（3）的置轴槽（6）里，盛皿桶壁（15...
- 张会李杰刘天奇邵志伟樊俊博马佳欣
- 食品级木聚糖酶黑曲霉工程菌的构建被引量：19
- 2013年
- 从黑曲霉CICC2462中扩增得到木聚糖酶基因xynB的成熟肽编码序列(746 bp),并针对黑曲霉CICC2462中高表达的糖化酶基因位点,通过重叠延伸PCR将xynB基因片段与糖化酶基因的5'同源臂、3'同源臂进行拼接得到同源重组表达框GBG,将其定向插入表达载体pSZH-CYM中,构建黑曲霉表达载体pSZH-xynB。将载体pSZH-xynB通过冻融法转化农杆菌AGL1,通过农杆菌介导法转化黑曲霉CICC2462菌丝体。经潮霉素筛选和PCR鉴定获得47株重组菌株,并从其中12株中筛选出在糖化酶基因位点发生基因置换的同源重组菌株9株。而后通过连续传代、筛选和PCR检测,获得消除潮霉素基因的纯合的同源重组菌株,获得符合食品级生产要求的工程菌。对工程菌进行发酵培养、酶活性检测和SDS-PAGE分析,表明在糖化酶摇瓶发酵条件下,工程菌培养液上清的木聚糖酶活性高达4 495.8975 U·mL-1。研究结果为生产低木糖苷酶活性的内切木聚糖酶提供新途径,为利用黑曲霉表达系统安全高效地生产其他酶制剂和重组蛋白提供参考。
- 李杰张会张莹莹双宝王多佳赵宁李勇赫福霞
- 关键词：木聚糖酶黑曲霉同源重组根癌农杆菌
- 单宁酶基因在黑曲霉中的同源表达被引量：1
- 2014年
- 利用PCR方法从黑曲霉基因组中扩增单宁酶基因的编码区，构建其黑曲霉表达载体pSZH-tan。通过农杆菌介导法将TAN基因导入黑曲霉中，经筛选获得将TNA基因整合到糖化酶基因的同源重组转化子。对转化子表达产物进行SDS-PAGE分析和酶活检测，结果表明，重组蛋白分子质量约为76 ku，重组菌株单宁酶表达量为322~581μg·mL^-1，最高发酵酶活为41.12 U·mL^-1。
- 李杰岳苗苗江连洲韦素真姚杨张会
- 关键词：单宁酶黑曲霉基因置换
- 一种玉米麸皮多糖及其制备方法与应用
- 一种玉米麸皮多糖及其制备方法与应用，属于玉米深加工技术领域。为了解决现有技术中玉米副产物利用率低，经济收益差，功能糖制备方法存在化学残留，功能单一的技术问题，本发明提供了一种玉米麸皮多糖的制备方法，该方法以玉米麸皮为原料...
- 王文飞李杰李柱刘大为张会邵志伟李思明
- 应用黑曲霉表达重组酶制剂的研究
- 选育优良的菌种是酶制剂产业的核心问题。用传统的菌种生产酶制剂往往存在着产量低、工艺复杂、成本高等缺点。采用工程菌高效表达酶蛋白,是降低酶制剂生产成本、创制新型酶制剂的有效途径,也是该领域的竞争焦点。发展安全、通用、高效、...
- 李杰张会刘天奇张贺徐玥张源元安欣丁纯洁刘司棋钱政
- 关键词：酶制剂黑曲霉基因表达基因重组
- 文献传递
- Klac PNP基因密码子优化及在枯草芽胞杆菌中的高效表达被引量：2
- 2023年
- 嘌呤核苷磷酸化酶(purine nucleoside phosphorylase,PNP)是嘌呤补救合成途径中的关键酶,嘌呤降解途径涉及氧化嘌呤环裂解,在人体中形成尿酸作为最终产物,增加患痛风的风险。为提高PNP的发酵水平,将来源于乳酸克鲁维酵母的PNP基因进行密码子优化,分别将优化前后的目的PNP基因连接至分泌表达载体pBSA43,并在枯草芽胞杆菌WB600中重组表达PNP-YP-pBSA43、PNP-YO-pBSA43。结果显示,密码子优化前的酶活力为333.69 U/mL,优化后的酶活力达到351.61 U/mL。为进一步提高重组蛋白表达量,通过响应面分析得出优化后重组菌株产PNP的最佳发酵条件为初始pH为6.67、发酵时间55 h、发酵温度28.7℃。在该条件下,重组PNP活力为372.79 U/mL,相比未优化前提高了12%。来源于乳酸克鲁维酵母的PNP基因经密码子优化后重组表达,酶活力显著提高,对PNP在枯草芽胞杆菌中高效表达奠定了基础。
- 赵越王新秀吴思陈作慧张会惠觅宙李杰双宝
- 关键词：嘌呤核苷磷酸化酶枯草芽胞杆菌密码子优化异源表达
- 构建β-甘露聚糖酶的黑曲霉工程菌被引量：4
- 2013年
- 目的:在黑曲霉CICC2462中表达经过改造的β-甘露聚糖酶基因(MAN)。方法:从黑曲霉CICC2462中扩增得到MAN(1 275bp),并针对黑曲霉CICC2462中高表达的糖化酶基因(glaA)位点,通过重叠延伸PCR将MAN基因片段与glaA的5’、3’同源臂进行拼接得到同源重组表达框GMG,将其定向插入表达载体pSZH-CYM中,构建黑曲霉表达载体pSZH-MAN,进而通过农杆菌介导法转化黑曲霉CICC2462。结果:经筛选获得4株重组菌株,并从中筛选出在glaA位点发生基因置换的同源重组菌株1株。对4株重组菌株的发酵液上清液进行酶活测定,结果表明MAN基因在黑曲霉中得到了分泌表达,静置培养8d后其分泌表达的β-甘露聚糖酶酶活最高可达12 467.2U/mL,而在出发菌株最高仅可达171.4U/mL,重组菌株是出发菌株的72倍。结论:此研究为简化β-甘露聚糖酶发酵生产工艺、提高产量提供了新的途径。
- 张莹莹张会李杰
- 关键词：Β-甘露聚糖酶黑曲霉基因置换农杆菌同源重组
- β-1,4-内切木聚糖酶基因在黑曲霉中安全高效表达的研究
- 丝状真菌具有卓越的表达和分泌能力，以及与哺乳动物相似的糖基化修饰系统，其安全性也广泛为人们所接受，是表达真核基因的理想系统。目前，在世界范围内研究和开发丝状真菌表达系统已成为重组酶制剂研究领域的热点。尽管目前国内利用木霉...
- 张会
- 关键词：黑曲霉内切木聚糖酶分泌表达
- 文献传递
- 甘露聚糖酶在黑曲霉中的优化表达及其酶学性质研究
- 2025年
- 为获得更高表达量和优良酶学性质的甘露聚糖酶,本研究采用同源重组定点整合技术构建甘露聚糖酶黑曲霉重组菌株,并对其表达特性及酶学性质进行分析。本研究成功获得了在glaA位点发生同源重组的甘露聚糖酶黑曲霉纯合转化子MG,以及同时在asAA位点过表达内质网辅助分子伴侣DnaJ1基因的甘露聚糖酶黑曲霉纯合转化子MD。菌株MG和MD在约37 kDa处均显现出明显的甘露聚糖酶Man蛋白条带,其最高酶活力分别为6909.861 U·mL^(−1)和7890.083 U·mL^(−1),其菌落大小略小于野生型菌株TH-2(ΔasAA::pyrG)。菌株MG和MD添加1%CPPs后的最高甘露聚糖酶酶活力分别提高了1.07倍和1.14倍,并且菌落大小明显增加。菌株MD中的甘露聚糖酶man基因转录水平是MG的1.01倍。此外,MD中内质网UPR指示基因hacA和bipA的转录水平均高于MG。重组甘露聚糖酶Man的最适温度为70℃、最适pH为4.5,且对金属离子及化学试剂表现出较高耐受性。通过过表达DnaJ1基因及添加1%CPPs可以有效提高甘露聚糖酶Man的表达量。本研究对开发和筛选酶学性质更优、产量更高的甘露聚糖酶具有重要意义。
- 张会李柱马佳欣樊俊博邵志伟姜毓君李杰
- 关键词：甘露聚糖酶黑曲霉CPPS酶学性质
