目的光敏剂8-甲氧基补骨脂素(8-Methoxsalen,8-MOP)联合长波紫外线(ultraviolet radiation A,UVA)作用(UVAP)诱导小鼠黑色素瘤细胞B16铁死亡效果及免疫原性变化研究,并分析处理后对后续免疫激活的影响。方法1)培养小鼠黑色素瘤B16细胞,使用8-MOP(100 ng/mL)和UVA(4 J/cm^(2))处理B16细胞,照射后于恒温培养箱(37℃,5%CO_(2))培养24 h。2)用CCK8(细胞增殖和毒性)检测试剂盒检测肿瘤细胞的死亡率。3)LPO(脂质过氧化物)、GSH(谷胱甘肽)检测试剂盒检测肿瘤细胞氧化损伤程度;用共聚焦显微镜对肿瘤细胞内的Fe^(2+)、线粒体膜电位(JC-1)、BODIPY 581/591 C11(脂质过氧化检测试剂盒)变化进行检测;WB检测GPX4、SLC7A11和NCOA4,以确定肿瘤细胞是否发生铁死亡。4)ELISA试剂盒检测肿瘤细胞培养上清液中的HMGB1(高迁移率族蛋白1)、ATP、CRT(钙网蛋白)表达,评价肿瘤细胞免疫原性变化。5)将1×10^(5)个B16细胞以100μL皮下注射小鼠后背颈部皮肤构建小鼠黑色素瘤模型,提取荷瘤小鼠脾脏单个核细胞并立即与照射后的肿瘤细胞共培养48 h,通过MHC-Ⅱ、CD11c、CD80、CD83流式检测DC成熟度的变化。结果UVAP后,B16细胞存活率明显下降(61.39±6.823 vs 84.81±7.026 vs 100.0±3.996,P<0.0001,P<0.01);且UVAP后确实会诱导B16细胞发生铁死亡,LPO、C11脂质过氧化程度增强,GSH耗竭,Fe^(2+)沉积和线粒体膜破坏,并且GPX4、SLC7A11蛋白表达下降,NCOA4表达升高,均符合铁死亡趋势。B16细胞免疫原性增强,ATP、CRT、HMGB1表达上升,DC成熟度增加(CD80:31.92±4.071 vs 19.77±3.177;CD83:21.40±4.787 vs 12.19±1.487,P<0.001,P<0.01)。结论8-MOP和UVA联合作用会诱导B16肿瘤细胞发生铁死亡,并且增强肿瘤细胞的免疫原性,释放更多肿瘤抗原,以促进DC的成熟,并更好地进行抗原递呈,实现后续免疫活化。
