徐为中
- 作品数：114 被引量：313H指数：11
- 供职机构：江苏省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目公益性行业(农业)科研专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生经济管理更多>>
- 兔轮状病毒TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法的建立和初步应用
- 2025年
- 为了能够快速、灵敏地检测出发病家兔临床样本中的兔轮状病毒(Lapine rotavirus,LaRV),根据GenBank已登录的LaRV非结构蛋白5(NSP5)基因保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立了一种TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法并进行了初步应用。结果表明,阳性质粒标准品所建立的标准曲线在使用稀释度为1×10^(7) copies/μL至1×10^(2) copies/μL之间具有良好的线性关系,r 2为0.999,扩增效率为98.781%;该方法对LaRV具有高度特异性,与兔出血症病毒1型、兔出血症病毒2型及兔多杀性巴氏杆菌、肺炎克雷伯杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌等其他病原间无交叉反应;该方法灵敏度高,最低检测值为1×10^(2) copies/μL,比普通PCR灵敏度提高了约100倍;该方法重复性良好,组内和组间变异系数在0.15%~1.41%之间,均小于2%。对45份临床样本采用构建的TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法和常规RT-PCR检测方法进行对比,符合率为100%。因此,本研究建立的TaqMan探针荧光定量RT-PCR具有特异性强、敏感性高、重复性好等优势。
- 李嘉逸伍孟婷陈萌萌仇汝龙魏后军魏后军胡波范志宇李一鸣胡波董海龙宋艳华王芳
- 关键词：TAQMAN探针荧光定量RT-PCR
- 醛化人“O”型红细胞的制备及其在兔出血症HA/HI试验中的应用被引量：5
- 2008年
- 在兔出血症的检测和免疫监测中,血凝/血凝抑制试验(HA/HI)是常规有效的检测方法。针对人"O"型新鲜红细胞存在质脆易碎、保存期短的缺点,从醛化人的"O"型红细胞制备方法的优化、工作浓度、保存时间三个方面进行研究,并用于兔出血症的HA/HI试验,同时以新鲜的人"O"型红细胞作为对照。结果表明:经戊二醛-甲醛二次醛化的红细胞的醛化效果与只用戊二醛醛化的红细胞效果差异不显著,均优于甲醛醛化效果,且经戊二醛-甲醛二次醛化或戊二醛醛化后的红细胞不溶血,性质不变,易保存;在兔出血症HA/HI试验中,经戊二醛醛化人"O"型红细胞的试验效果与新鲜红细胞差异不大,结果稳定性好。
- 范志宇王岚王芳胡波张则斌徐为中
- 关键词：兔出血症醛化红细胞HAHI
- 一株新型家兔肠炎沙门氏菌的分离鉴定及其治疗研究
- 2016年2月至5月期间,山东省某规模化兔场发生以仔兔脾脏肿大,母兔流产为特征的传染病。本研究对发病濒死兔进行细菌的分离,并利用16S rRNA基因扩增技术、特异性PCR方法和生化试验对致病细菌进行鉴定(添加治疗及疫苗相...
- 范志宇魏后军仇汝龙胡波宋艳华陈萌萌徐为中王辉薛家宾王芳
- 关键词：肠炎沙门氏菌
- 文献传递
- 兔出血症发病概况及疫苗研究进展被引量：17
- 2007年
- 兔病毒性出血症(RHD)是由兔出血症病毒(RHDV)引起的一种急性、高度致死性传染病。该病严重危害养兔业,因而引起国际兽医界的高度重视,1989年,国际兽疫局(O IE)将该病正式列为“国际动物保健编目”B类传染病。本文主要对20年来RHD的发病、佐剂灭活疫苗、细胞培养疫苗、基因工程疫苗的研究进展作一综述。
- 杨龙圣薛家宾王芳徐为中王德云胡元亮闻发全
- 关键词：兔病毒性出血症疫苗佐剂基因工程
- 家兔产气荚膜梭菌(A)型疫苗超纳滤膜浓缩工艺研究被引量：4
- 2007年
- 采用超纳滤技术浓缩家兔产气荚膜梭菌(A)型疫苗,建立家兔产气荚膜梭菌(A)型疫苗浓缩工艺。配制家兔产气荚膜梭菌(A)型超纳滤浓缩疫苗,并对其无菌性、安全性和免疫效力进行了检验。结果显示,该工艺可将家兔产气荚膜梭菌(A)型灭活抗原浓缩约7倍,超纳滤膜用NaOH洗后其通量可以恢复;配制的家兔产气荚膜梭菌(A)型超纳滤浓缩疫苗无菌检验合格,安全检验家兔无不良反应,符合动物用生物制品要求;以2 mL/只的剂量免疫家兔,家兔产气荚膜梭菌(A)型超纳滤浓缩疫苗的保护率达100%,传统铝胶疫苗对照组的保护率平均为86.7%,表明超纳滤浓缩疫苗免疫效力优于传统铝胶疫苗。确定了家兔产气荚膜梭菌病(A)型疫苗超纳滤膜膜浓缩的工艺。
- 徐为中薛家宾诸玉梅陈兴祥周永银杨龙圣尹秀凤
- 关键词：家兔产气荚膜梭菌膜浓缩免疫效力
- 兔出血症病毒衣壳蛋白P区二聚体的表达及其与受体结合能力分析被引量：1
- 2016年
- 为检测兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白(VP60)P区形成二聚体的能力及其与HBGAs受体结合的能力,作者以pMD19T-VP60为模板扩增包含铰链区H的P区基因(HP)并克隆至原核表达载体pET28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,获得HP蛋白。经SDS-PAGE和Western blot检测,结果显示,HP蛋白主要以包涵体的形式高效表达,经HisTrap亲和柱纯化后可形成二聚体结构。通过HBGAs受体结合试验表明,P区与完整病毒衣壳相似,能与唾液中的HBGAs受体发生结合。本研究为进一步开展RHDV衣壳蛋白与受体的相互作用研究奠定基础。
- 胡波范志宇王芳魏后军宋艳华仇汝龙徐为中薛家宾
- 关键词：兔出血症病毒衣壳蛋白P区受体结合
- 4种重要外来病毒高通量液相芯片检测方法的建立被引量：1
- 2021年
- 为建立小反刍兽疫病毒(PPRV)、西尼罗病毒(WNV)、裂谷热病毒(RVFV)和南非型口蹄疫病毒(SAT FMDV)的高通量液相芯片检测方法,根据GenBank上公布的PPRV的N蛋白基因序列、WNV的E蛋白基因序列、RVFV的S片段基因序列和FMDV的5′UTR区基因序列,并基于各基因保守区设计相应的引物和探针。通过对多重PCR的上游、下游引物比例、杂交温度、杂交时间进行条件优化,并验证检测方法的特异性和敏感性。敏感性试验显示,该方法对于PPRV、WNV、RVFV以及FMDV 4种病毒最低检出量分别为5.78×10^(3)、2.15×10^(3)、2.98×10^(5)、9.54×10^(4) copies/μL。本研究建立的高通量液相芯片检测方法能够同时快速地检测4种外来病病毒,具有良好的特异性、敏感性和稳定性,对于流行病学调查和防范外来动物疫病具有重要的意义。
- 仇汝龙阮智杨胡波魏后军范志宇宋艳华陈萌萌徐为中王芳
- 关键词：液相芯片基因序列流行病学
- 兔出血症病毒RHDV1和RHDV2一步法双重TaqMan探针荧光定量RT-PCR体系的建立和应用
- 2025年
- 兔出血症病毒(RHDV)引起的兔出血症是一种急性、高度致死性传染病,对养兔业造成严重危害。本研究基于RHDV衣壳蛋白(VP60)基因序列设计引物和TaqMan探针,建立可同时检测RHDV1和RHDV2两种毒株的双重TaqMan荧光定量RT-PCR检测体系。反应体系:2×One Step RT-PCR BufferⅢ10.0μL,上下游引物(10μmol/L)各0.6μL,ROX Reference DyeⅡ(50×)0.4μL,两种荧光探针(10μmol/L)各0.8μL,待测样本2.0μL,ddH_(2)O 4.8μL。反应程序:42℃5 min,95℃10 s,95℃5 s,60℃30 s,40个循环。试验结果表明,该体系特异性强,与轮状病毒、兔多杀性巴氏杆菌、兔支气管败血波氏菌、绿脓杆菌、沙门氏菌无交叉反应;灵敏度高,最低检测限为1μL 100拷贝。通过组内重复和组间重复进行重复性分析,Ct值变异系数为0.2%~2.9%,表明该体系稳定性较好。使用该体系对112份临床样本(60份肝脏组织、52份鼻肛拭子)进行检测,RHDV总检出率为69%,而常规RT-PCR体系的检出率仅为51%。本研究建立的双重荧光定量RT-PCR方法具有高灵敏度、强特异性和良好的重复性,可为RHDV的临床快速诊断及定量分析提供可靠技术支持。
- 陈萌萌王冠萱仇汝龙范志宇范志宇宋艳华胡波徐为中宋艳华李一鸣魏后军
- 关键词：兔出血症病毒荧光定量RT-PCRTAQMAN探针
- 兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗的研制
- 薛家宾徐为中王启明周永银陈兴祥诸玉梅董亚芳
- 该项目主要研制兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗，应用于家兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病的防治，重点通过选用具有良好免疫原性的菌、毒株，通过优化培养增殖抗原，制成各种单苗原液，分别提取有效抗原再按一定比例进行...
- 关键词：
- 关键词：兔病毒性出血症多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗
- 兔出血症病毒RT-PCR检测方法的建立及其临床应用被引量：15
- 2010年
- 本研究旨在建立检测兔群鼻拭子中兔出血症病毒(RHDV)的RT-PCR方法,研究健康免疫兔群是否存在携带RHDV现象。根据GenBank上公布的RHDVvp60基因保守序列,设计了1对特异性引物,经cDNA的合成和PCR扩增,目的片段大小为591bp。结果表明该方法能检出最小RNA浓度为2.40ng·μL-1,敏感性为血凝试验(HA)的8×103倍。通过对自5个省采集的168份健康免疫兔鼻拭子样品进行检测,结果显示,阳性样品为22份,阳性率为13.09%。试验表明:RT-PCR方法能快速、敏感地从健康免疫兔鼻拭子样品中检出RHDV,提示健康免疫兔群存在携带RHDV的现象,该方法适合临床进行大规模病原学检测和兔群携带病毒的调查,具有良好的应用前景。
- 胡波魏后军王芳范志宇徐鹏徐为中薛家宾何孔旺
- 关键词：兔出血症病毒RT-PCR
