张德意
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 供职机构：温州医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人乳头瘤病毒16 L1/CEA CTL表位融合蛋白的原核表达研究
- 2008年
- 目的:构建人乳头瘤病毒(HPV)16型衣壳蛋白L1与癌胚抗原(CEA)细胞毒T细胞(CTL)表位嵌合基因,探讨其在原核表达系统中的表达情况。方法:选择CEA CTL表位(CEA691 IMIGVLVGV),以HPV16阳性宫颈癌组织提取的DNA为模板,通过PCR方法扩增出HPV16 L1/CEA CTL表位嵌合基因,克隆入pET32a(+)表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白,通过Ni-NAT离子交换柱层析纯化,进一步采用SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定。结果:pET32a(+)/HPV16 L1/CEA CTL表位重组质粒构建成功,并在大肠杆菌中得到表达。SDS-PAGE分析表明表达产物分子质量(Mr)约为83×103,与预期相符,Western-blot方法进一步证实其为目的蛋白。结论:利用pET32a(+)表达载体能表达HPV16 L1/CEA CTL表位重组蛋白,为其进一步的免疫效应研究打下了基础。
- 张德意朱冠保张丽芳朱珊丽陈俊
- 关键词：乳头状瘤病毒
- 人乳头瘤病毒-黑色素瘤抗原细胞毒T淋巴细胞表位嵌合基因克隆及其表达被引量：3
- 2007年
- 目的构建人乳头瘤病毒(HPV)6b型结构蛋白L1-黑色素瘤抗原(MAGE-A3)细胞毒T淋巴细胞(CTL)表位嵌合基因并表达目的蛋白,为下一步制备HPV6bL1/MAGE-A3-CTL嵌合疫苗提供理论基础和实验依据。方法将MAGE-A3 CTL表位基因插入到UPV6bL1的羧基端序列中,将目的基因连入真核表达转移载体pFastBac^(TM)1,构建重组质粒pFastBac^(TM)1/HPV6bL1/MAGE- A3-CTL,转化DH10Bac感受态细胞,获得重组杆状病毒Bacmid/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL;将重组杆状病毒转染sf-9昆虫细胞表达嵌合目的蛋白,并经SDS-Page电泳、考马斯亮蓝染色及Western blot分析鉴定。结果成功构建了重组质粒pFastBac^(TM)1/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL,获得了重组杆状病毒Bacmid/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL,并在真核细胞sf-9昆虫细胞中成功表达了嵌合目的蛋白。结论通过基因克隆方法能成功的将MAGE-A3 CTL表位基因插入到HPV6bL1基因中,并能在真核细胞表达系统中表达出嵌合目的蛋白,为进一步制备HPV6bL1/MAGE-A3-CTL嵌合疫苗提供理论基础和实验依据。
- 许晓东张德意朱冠保张丽芳
- 关键词：黑色素瘤抗原表位疫苗
- 人乳头瘤病毒11型E7蛋白在原核细胞的表达及其诊断尖锐湿疣的价值被引量：2
- 2007年
- 目的研究人乳头瘤病毒(HPV)11型 E7蛋白在原核细胞的表达及其在尖锐湿疣(CA)血清学诊断中的应用价值。方法用 PCR 从 CA 患者组织中扩增 HPV11 E7全长基因,构建重组质粒 pET32a(+)/HPV11 E7,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后表达,用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白质印迹法(WB)分析鉴定;经镍螯合亲和层析胶体(Ni-NTA Agarose)纯化 HPV11 E7融合蛋白后作抗原,用间接 ELISA 法对93例 CA 患者、43例宫颈癌患者和58名健康对照者血清标本进行 IgG 抗体检测。结果 HPV11 E7融合蛋白在原核表达系统中呈较高效表达(浓度为40μg/ml)。CA 组、宫颈癌组和健康对照组血清 IgG 抗体均值分别为1.545±0.131、0.586±0.155和0.674±0.150,阳性率分别为76.3%(71/93)、11.6%(5/43)和5.2%(3/58);CA 组血清 IgG抗体均值及阳性率均高于宫颈癌组和对照组(均 P<0.01)。结论 HPV11 E7融合蛋白具较强的抗原性,用于 CA 血清学诊断试剂的研制具有临床应用价值。
- 郑丹张德意石朝辉涂权梅欧琴李琼英张丽芳
- 关键词：尖锐湿疣乳头瘤病毒蛋白
