吴健虹
- 作品数：6 被引量：65H指数：3
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广州市科委科技攻关项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 翻译起始区突变对猪卵透明带-3β蛋白在E.coli表达的影响被引量：1
- 2005年
- 目的:探讨翻译起始区(translation initiation region,TIR)突变对两种氨基酸序列长度不同的猪卵透明带蛋白pZP3β161和pZP3β263在大肠杆菌中表达的影响。方法:应用DNASIS软件辅助分析,分别设计5条不同的上游引物对两种pZP3β基因的TIR区的G+C含量和自由能进行合理调整,PCR扩增后将获得的基因片段克隆入pET-3c载体,于大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中诱导表达。结果:TIR对pZP3β表达有明显的影响,其表达的pZP3β161蛋白和pZP3β263蛋白分别占菌总蛋白的25％和15％。结论:在不改变氨基酸的条件下,通过对目的基因TIR进行适当改造,能够有效提高目的蛋白的表达效率。
- 吴健虹陈小佳朱伟杰谢秋玲孙奋勇徐万祥李菁洪岸
- 关键词：猪卵透明带截短型
- 截短型EGFR在COS7与CHO-K1细胞的表达研究
- 目的：建立sEGFR501／COS7瞬时表达系统和sEGFR501／CHO-K1稳定表达系统，获得高效表达的可溶性截短型表皮生长因子受体(1st～501st氨基酸)，简称sEGFR501。 方法：以增强型绿色荧光蛋...
- 吴健虹
- 文献传递
- TIR突变的hbFGF在原核系统中高效的表达被引量：2
- 2003年
- 目的:为获得非融合高表达hbFGF的大肠杆菌表达系统;方法:设计PCR引物,将hbFGF的5'端前10个密码子突变,优选大肠杆菌较偏好的密码子并降低G+C含量,通过双酶切法将突变后的hbFGF克隆入pBV220质粒载体中,筛选出重组子,再通过温控法对重组菌体进行诱导,分析表达情况,并进一步纯化和测活;结果:bFGF在该系统中高水平表达,表达量超过30%,其中绝大部分形成包涵体,经过包涵体变复性等纯化步骤后测活性,证明有生物活性;结论:TIR区域的基因突变对hbFGF在pBV220中高效表达起到关键作用.
- 陈小佳林剑汪矩孙奋勇吴健虹洪岸
- 关键词：翻译起始区人碱性成纤维细胞生长因子非融合
- 猪卵透明带-3β截短型蛋白在原核系统中的表达研究被引量：3
- 2005年
- 目的:制备具有猪卵透明带-3β抗原活性的截短型pZP3β蛋白(tunc-pZP3β),以便对该蛋白的抗原表位区域作深入研究。方法:采用PCR方法扩增原cDNA中编码第130个氨基酸到第290个氨基酸的DNA序列。获得的tunc-pZP3β基因片段通过引入其两端的NdeⅠ和BamHⅠ酶切位点被定向插入pET-3c质粒T7强启动子下游的多克隆区,筛选出重组子,经DNA测序验证正确后,转化表达菌株BL21(DE3)pLysS,再用IPTG对重组菌体进行诱导。结果:SDS-PAGE分析表明tunc-pZP3β在大肠杆菌系统中高水平表达,且在WesternBlot免疫印迹中能被特异性抗体识别。结论:对适当的抗原表位序列进行保留而截去两端一定的氨基酸序列,所获得的截短型蛋白能够实现在大肠杆菌中高效表达,这有利于深入研究该蛋白核心区域的功能。
- 孙奋勇陈小佳朱伟杰谢秋玲吴健虹徐万祥洪岸李菁
- 关键词：截短型
- 非融合膜外型猪卵透明带-3β蛋白在原核系统中的表达被引量：5
- 2005年
- 目的:通过基因工程的方法在原核表达系统中表达去除了信号肽和跨膜区的膜外型猪卵透明带蛋白pZP3β。方法:设计适宜引物,采用PCR方法,在基因水平对膜外型pZP3β的翻译起始序列进行适当调整,获得的基因克隆入pET-3c载体,并进一步在大肠杆菌E.coli BL21(DE3) pLysS中表达。结果:得到表达率约10%的非融合膜外型pZP3β蛋白的表达,并经Western-blot鉴定为目的蛋白。结论:外源蛋白在不改变氨基酸序列条件下,在基因水平的适当调整可以有效提高其表达率。
- 陈小佳谢秋玲朱伟杰孙奋勇徐万祥洪岸李菁吴健虹
- 关键词：非融合猪卵透明带基因表达
