金家民
- 作品数：6 被引量：16H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项转基因生物新品种培育专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 致病性马兽疫链球菌的分离鉴定、生物学特性及其M-like基因的序列分析被引量：12
- 2012年
- 为鉴定锦州某猪场引起关节炎病疫情的病原,本研究将患猪关节液在血平板培养基上培养进行细菌分离;对分离细菌进行形态学观察、生化反应、致病性试验及药物敏感性试验;并对其M-like基因进行克隆和测序分析。结果在显微镜下观察到周围具有透明的β溶血环的革兰氏阳性中长链球菌,经生化反应及M-like基因鉴定为马兽疫链球菌(命名为10JZ12);分离株10JZ12对小鼠的致死剂量为1.75×108cfu;并对苯唑西林、青霉素G、红霉素、克拉霉素、克林霉素、米诺环素、环丙沙星、左氟沙星、多粘菌素B、呋喃妥因敏感,对氯霉素、四环素、诺氟沙星、复方新诺明不敏感。
- 王淑杰姜成钢武嘉男刘永刚金家民刘鹤蔡雪辉张秀英
- 关键词：PCR
- 猪链球菌乳酸脱氢酶基因的原核表达及重组蛋白的反应原性研究
- 2015年
- 为了验证双向电泳筛选出的7型猪链球菌WH分离株免疫相关蛋白乳酸脱氢酶的反应原性,本实验采用克隆表达的方法对其进行研究。根据质谱鉴定的NCBI登录号查找乳酸脱氢酶基因序列,并设计特异性引物,对乳酸脱氢酶基因进行扩增,克隆入p ET30a载体,构建重组质粒p ET30a-LDH,测序后转化入大肠埃希氏菌中。用IPTG进行诱导重组菌,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。SDS-PAGE分析结果显示表达的重组融合蛋白相对分子量为41ku;Western blot分析结果显示该重组蛋白可与7型猪链球菌WH分离株多克隆抗体发生特异性血清学反应。这表明表达的重组LDH蛋白具有良好的反应原性,为预防和控制猪链球菌病提供有效的疫苗候选分子奠定基础。
- 高明明王淑杰王俊金家民张璐刘永刚李爱东陶冶李莉姜成刚王刚申红
- 关键词：猪链球菌乳酸脱氢酶反应原性原核表达
- 一株致病性血清2型猪链球菌的多位点序列分型及其灭活后对小鼠的免疫保护效果评价
- 2015年
- 为鉴定一株2012年分离自广东省的致病菌并评价其免疫原性,本研究对该分离株进行分型鉴定和MSLT分型分析。鉴定结果显示,该分离株为血清2型猪链球菌(S.suis);其MSLT分型为ST1型,等位基因图谱是1、1、1、1、1、1、1,与高致病性的世界流行株P1/7同型;毒力基因型为Mrp+/Ef+/Sly+,将其命名为GD。进一步使用GD灭活菌以3×108cfu剂量3次免疫小鼠,免疫后分别采用GD,7型、9型S.suis WH和ZD进行攻毒试验。动物试验结果显示,免疫后小鼠抗体水平显著升高;对GD、WH和ZD的保护率分别为87.5%、87.5%和75%;免疫组小鼠血液和脏器内的细菌载量均显著低于对照组,而且无明显病变。本研究结果表明,GD灭活疫苗可以对不同血清型S.suis攻毒提供有效的免疫保护,可以作为预防S.suis病的有效灭活疫苗候选株。
- 高明明王淑杰金家民刘永刚陶冶李爱东张璐李莉姜成刚王刚申红蔡雪辉
- 关键词：猪链球菌灭活疫苗免疫保护
- 猪链球菌7型强弱毒株SBP_bac_5差异表达蛋白的鉴定
- 2013年
- 前期研究表明细菌胞外溶质结合蛋白家族5(SBP_bac_5)基因在猪链球菌7型(S.suis 7)型强毒株WC0711中表达量高于弱毒株M13中,推测SBP_bac_5为S.suis 7型强弱毒株差异性表达蛋白。为进一步证实该结果,本研究采用real-time RT-PCR技术在基因水平检测S.suis 7型强弱毒株中SBP_bac_5 mRNA的表达量差异,结果显示,强毒株WC0711中SBP_bac_5的mRNA表达量为在弱毒株M13中的4.59倍。将SBP_bac_5的PCR产物克隆于pET-30a中,通过E.coli BL21诱导表达,纯化后的蛋白免疫新西兰白兔制备抗血清检测S.suis强弱病毒株中SBP_bac_5的表达量差异。结果显示,重组蛋白获得高效表达,S.suis 7型强毒株WC0711中SBP_bac_5表达量是弱毒株M13的3.8倍。
- 金家民王淑杰高明明王延群李玉明汪志艳石文达刘鹤姜成刚张秀英蔡雪辉
- 关键词：猪链球菌强毒株弱毒株
- 牛α干扰素在毕赤酵母中的高效分泌表达及活性鉴定被引量：4
- 2013年
- 为高效分泌表达牛α干扰素(boIFN-α),本研究通过人工合成boIFN-α基因,将目的基因克隆至表达载体pPIC9K中,构建重组质粒pPIC9K-boIFN-α,将其电转化于毕赤酵母菌株GS115,利用抗药选择压力G418筛选重组菌,对重组菌诱导表达,取上清进行SDS-PAGE和western blot检测,并优化重组菌的诱导表达条件。结果显示:筛选获得高效分泌表达boIFN-α的重组菌,其最佳诱导条件为:250 r/min,26℃培养,1%甲醇浓度诱导,诱导72 h。上清中目的蛋白表达量最高可达200μg/mL,本研究为boIFN-α在生产中的应用奠定了基础。
- 王延群张璐李玉明汪志艳金家民刘永刚王刚王淑杰姜成刚涂亚斌蔡雪辉
- 关键词：毕赤酵母分泌表达
- 猪链球菌分支酸合酶基因缺失株、其构建方法及应用
- 本发明公开了一种猪链球菌分支酸合酶基因缺失株、其构建方法及应用。所述基因缺失株为含氯霉素抗性标记的CMS基因缺失株SS△CMS，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.9735。本发...
- 蔡雪辉王淑杰刘永刚金家民
- 文献传递
