胡栋平
- 作品数：10 被引量：19H指数：3
- 供职机构：第二军医大学东方肝胆外科医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人源乙型肝炎病毒表面抗原抗体Fab片段与IFN-α融合蛋白表达载体的筛选被引量：2
- 2000年
- 目的探讨如何在无药物抗性改变；无转化细胞生物指示系统改变的情况下准确快速地筛选出人源抗乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）抗体Ｆａｂ片段／ＩＦＮ－α融合蛋白原核表达载体。方法在 ＩＦＮ－α基因两端加上 ＸｂａⅠ酶切位点后用 ＰＣＲ法扩增，再重组入以抗体库技术筛选得到的人源抗ＨＢｓＡｇ－Ｆａｂ片段表达载体的相应位点上，构建 ａｎｔｉ－ＨＢｓＡｇ－Ｆａｂ／ＩＦＮ－α融合蛋白表达载体。取 ＰＣＲ扩增得到的 ＩＦＮ－α ＤＮＡ，用地高辛标记系统进行化学标记，制备 ＩＦＮ－α ＤＮＡ探针。取构建的融合蛋白表达载体转化受体菌．增菌后，以溶菌酶加煮沸法批量制备载体 ＤＮＡ，点样于硝酸纤维膜上， ８０℃烤２ｈ，预杂交液 ４２℃，２ｈ膜预杂交，标记探针 ４２℃， ４ｈ杂交，洗膜后用酶标抗地高辛抗体显色。同时设单纯人源抗 ＨＢｓＡｇ－Ｆａｂ片段表达载体为阴性对照， ＩＦＮ－α质粒为阳性对照。阳性克隆再以 ＳａｃＩ和 ＸｂａⅠ酶切，琼脂糖电泳鉴定。结果４０株转化细胞中筛选出７个阳性克隆，酶切鉴定显示两者符合率达１００％，成功地筛选出了ａｎｔｉ－ＨＢｓＡｇ－Ｆａｂ／ＩＦＮ－α融合蛋白表达载体。结论人源ＨＢｓＡｇ抗体Ｆａｂ片段／ＩＦＮ－α融合蛋白表达载?
- 罗荣城尤长宣韩焕兴胡栋平王传斌苏瑾
- 关键词：融合蛋白乙型肝炎FAB片段IFN-Α
- 人源抗乙肝病毒表面抗原单克隆抗体的抗原结合活性被引量：5
- 1996年
- 人源抗乙肝病毒表面抗原单克隆抗体的抗原结合活性韩焕兴范列英胡栋平孔宪涛自鼠源性单克隆抗体出现以来，人单克隆抗体的制备一直是人们研究的目标。我们应用分子生物学方法，建立了针对乙肝病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）的抗体组合文库，并选择部分阳性株，进行了抗体片段...
- 韩焕兴范列英胡栋平孔宪涛
- 关键词：乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体抗原
- 一步亲和纯化制备基因工程人源抗HBs单克隆抗体Fab片段被引量：6
- 2000年
- 目的：探索亲和纯化人源单克隆抗体片段的简便实用方法。方法：应用自制的抗人免疫球蛋白片段抗体（Ａｎｔｉ－Ｆａｂ）与链球菌蛋白Ｇ亲和胶（Ｇａｍ ｍ ａ Ｂｉｎｄ）交联制备亲和层析柱，用一步法从工程菌培养上清中纯化人源抗ＨＢｓ单克隆Ｆａｂ 片段。经依沙吖啶沉淀、离子交换、分子筛纯化人混合血清提取ＩｇＧ组分，木瓜酶处理后分离、纯化出Ｆａｂ，免疫绵羊制备高效价抗血清。用Ｇａｍ ｍ ａＢｉｎｄ 一步纯化出抗血清中的ＩｇＧ组分，再将该ＩｇＧ经交联剂与Ｇａｍ ｍ ａ Ｂｉｎｄ 交联后制成亲和胶。人源抗ＨＢｓ阳性菌培养上清与亲和胶共育后装柱，ＰＢＳ洗去非特异结合蛋白，再用５ ｍ ｏｌ／Ｌ氯化锂洗脱特异Ｆａｂ。结果：聚丙烯酰胺电泳纯化产物显示，纯化后的抗体片段在电泳中形成单一区带，达到电泳纯；用酶标抗Ｆａｂ 抗体免疫印迹结果证明，电泳显示的单一区带为Ｆａｂ 蛋白区带；抗原特异Ｄｏｔｂｌｏｔ检测表明，该法制备出的Ｆａｂ 保持了抗原结合活性。结论：本实验建立的一步亲和纯化法具操作简便、纯化快速和高效的特点，是人源性单克隆抗体Ｆａｂ
- 胡栋平韩焕兴尤长宣罗荣城毛庆民
- 关键词：抗HBS单克隆抗体FAB片段
- 血清鳞状细胞癌抗原在肺鳞癌诊断中的价值被引量：2
- 1994年
- 本实验采用全自动快速荧光酶分析系统（ＩＭｘ），用微粒子酶免疫测定法（ＭＥＩＡ）测定了１０５人血清鳞状细胞癌抗原（ＳＣＣＡｇ）水平，其中３４例肺鳞癌（ＳＣＣ），２６例肺非鳞癌（ＮＳＣＣ）患者血清ＳＣＣＡｇ水平，以２０例肺良性疾病和２５例健康人为对照组。取２μｇ／Ｌ为正常值上限，超过此值为阳性，结果显示：血清ＳＣＣＡｇ水平在肺ＳＣＣ组（３．６６０±３．０２７μｇ／Ｌ）明显高于正常对照组（０．７５５±０．４９５μｇ／Ｌ）、肺良性疾病组（１．０４６±０．４８５μｇ／Ｌ）和肺ＮＳＣＣ组（１．７２４±１．４０６μｇ／Ｌ）（Ｐ＜０．０１）。两对照组中，无１例大于２μｇ／Ｌ，２６例肺ＮＳＣＣ组中，２例（７．７％）阳性，而３４例肺ＳＣＣ组中，１６例（４７．１％）阳性。结果表明，血清ＳＣＣＡｇ水平对肺鳞癌有较高的特异性，对肺鳞癌的诊断，鉴别诊断，特别是在肺癌的组织学分型中，区别肺鳞癌和肺非鳞癌有重要意义。
- 李兵胡栋平叶曜芩孔宪涛罗文侗
- 关键词：肺肿瘤鳞癌抗原
- 抗体库技术制备人源抗HBsAg抗体Fab片段
- 噬菌体抗体库技术不同于杂交瘤,能通过原核细胞表达出完全人源性抗体,它代表了基因工程抗体技术的最前沿,本研究拟采用该技术制备人源抗HBsAg抗体Fab片段并加以纯化和活性鉴定。
- 尤长宣罗荣城丁雪梅韩焕兴胡栋平
- 关键词：HBSAGFAB
- 文献传递
- 基因工程法制备人源抗HBsAg单克隆抗体被引量：3
- 1997年
- 基因工程法制备人源抗ＨＢｓＡｇ单克隆抗体２００００３上海第二军医大学长征医院韩焕兴胡栋平范列英孔宪涛关键词乙型肝炎表面抗原；单克隆抗体，人；酶联免疫吸附试验中国图书资料分类号Ｒ５１２．６２单克隆抗体（ＭｃＡｂ）在中和病毒抗原、消除病毒感染过程中发挥重...
- 韩焕兴胡栋平范列英孔宪涛
- 关键词：乙型肝炎表面抗原单克隆抗体
- 羊成骨蛋白对L929纤维母细胞DNA合成和细胞分裂作用的观察被引量：1
- 1988年
- 本文报告羊成骨蛋白(sBMP)对L929纤维母细胞培养的DNA合成和细胞分裂作用结果。所加sBMP浓度为1~10μg/ml时,L929纤维母细胞培养72小时后,细胞计数明显高于对照组,可达对照组的1.5~1.8倍,其细胞DNA合成过程中~3H胸腺嘧啶摄入量显著增加,可为对照组的145~164%。sBMP浓度5μg/ml和10μg/ml组中,细胞连续培养10天,未见其形态发生异常变化。实验结果表明sBMP对纤维母细胞DNA的合成和细胞的有丝分裂有显著的促进作用,但无促分化的作用。
- 唐国民屠开元徐印坎张文明孔宪涛祝念林胡栋平
- 关键词：纤维母细胞BMP成骨蛋白L929细胞分裂
- 抗人GPC3单克隆抗体在肝脏肿瘤组织学检测中的应用被引量：2
- 2010年
- 目的应用抗人GPC3单克隆抗体检测肝脏良、恶性肿瘤组织中GPC3蛋白的表达。方法采用自制鼠抗人GPC3单克隆抗体及免疫组织化学技术检测19例正常肝组织、94例肝细胞癌(HCC)组织、20例胆管细胞癌组织、42例肝脏良性肿瘤组织中GPC3蛋白的表达,并分析GPC3蛋白表达水平与HCC患者临床病理参数的关系。结果 GPC3蛋白在肝细胞癌组织中阳性率达到79.8%,而血管瘤旁正常肝组织、胆管细胞癌组织和肝脏良性肿瘤组织中均不表达,差异具有统计学意义(P<0.001)。HCC组织中GPC3蛋白的表达与血清AFP水平(P=0.020)、是否伴有门静脉癌栓(P=0.050)、有无包膜等因素相关(P=0.043)。结论抗人GPC3单克隆抗体可特异性检出肝细胞癌组织GPC3蛋白的表达,值得进一步研究以应用于临床诊治。
- 周赟谈冶雄胡栋平张蓓蓓王庆丛文铭王红阳
- 关键词：单克隆抗体肝肿瘤免疫组织化学
- 人源性抗HBsAg单抗重链可变区基因序列分析
- 1996年
- 应用生物工程菌表达法，本文建立了抗ＨＢｓＡｇ单克隆抗体片段组合文库。并筛选阳性株制备了相应的抗体活性片段。人工法对５个阳性株的抗体编码ＤＮＡ重链可变区序列进行了分析，结果表明，５株中有２株ＤＮＡ序列相同，与国外学者所作同类抗体的序列不同，提示是具有抗体活性的不同菌株。同时比较ＤＮＡ、序列发现，氨基酸排列的异同决定抗体的结合活性。ＤＮＡ序列相同的２株其抗体片段的表达能力也相似，表现为酶免疫测定时Ａ值近似。抗体编码基因的序列分析有助于深入探讨抗体的表达能力、亲和力等特性。
- 韩焕兴孔宪涛胡栋平
- 关键词：单克隆抗体抗HBSAG
- 基因工程技术制备人源抗HBsAg抗体Fab片段被引量：1
- 2000年
- 将从抗体文库中筛选出的抗HBsAg Fab阳性克隆转化大肠肝杆菌 ,IPTG诱导表达 ,经Western blot鉴定 ,证实上清中含有可溶性抗HBsAg Fab片段 ,应用自制的羊抗人免疫球蛋白片段抗体 (anti Fab )与Gama bind交联制备的亲和层析柱纯化表达产物 ,所得纯化产物在SDS PAGE中形成单一条带 ,经Western blot证实具备良好抗原特异性 ,Dot blot证实具备良好抗原结合活性。
- 尤长宣罗荣城丁雪梅韩焕兴胡栋平范列英
- 关键词：HBSAG抗体FAB基因工程乙型肝炎
