沈毅珺
- 作品数：9 被引量：17H指数：3
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 重组人淋巴毒素突变体库的构建及受体亲和筛选
- 淋巴毒素/(Lymphotoxin α,简称LT α,或LT/)是由淋巴细胞在应激情况下分泌的一种细胞因子。LT是TNF超家族的一个重要成员,LT与TNF超家族的另一成员TNF作用于两个相同的膜受体,TNFRⅠ和TNFR...
- 沈毅珺
- 关键词：淋巴毒素随机突变噬菌体展示
- 文献传递
- 噬菌体展示重组人淋巴毒素突变体库及受体亲和筛选
- 淋巴毒素(lymphotoxin,LT)通过TNFR1受体传递凋亡信号,从而发挥抗肿瘤活性.对LT的受体结合区域进行多点随机突变,利用噬菌体展示重组人淋巴毒素(rhLT)R46,S106,L130三点随机突变组合文库和S...
- 沈毅珺刘彦君郑海音潘卫许燕王征杨彤谭靖伟吴劲松吴芳曹峰
- 关键词：淋巴毒素随机突变噬菌体
- 文献传递
- 新型噬菌粒展示载体pCANTAB5L的构建被引量：8
- 2003年
- 目的 :将柔性多肽接头和多克隆位点引入噬菌粒载体 pCANTAB5X中 ,构建适用于展示各种随机肽库、功能靶蛋白、功能靶蛋白变异体库和大分子量 (>30 0个氨基酸 )功能蛋白的新型噬菌粒展示载体。 方法 :应用 5′端含XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ、KpnⅠ识别序列的引物 ,PCR扩增获得XbaⅠ StuⅠ SalⅠ KpnⅠ [G4S]3 NotⅠ衔接片段 ,将该PCR产物克隆到pMD 18T中 ,再将该片段插入 pCANTAB 5X中构建成新型噬菌粒展示载体 pCANTAB5L。 结果 :限制性内切酶酶谱及DNA序列分析证明[G4S]3多肽接头和限制性内酶切位点XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ、KpnⅠ序列被引入到新构建的噬菌粒载体pCANTAB 5L中。 结论 :成功构建了新型噬菌粒展示载体 pCANTAB5L ,并能有效展示功能靶蛋白。
- 沈毅珺潘卫易进华徐容陈秋莉潘欣冯春芝邓松华戚中田刘彦君
- 关键词：噬菌体展示多克隆位点
- 一种进化免疫球蛋白结合分子、其制备方法及应用
- 本发明涉及新型进化免疫球蛋白结合分子、其制备方法及其应用。本发明公开了一种分离的进化免疫球蛋白结合分子，它是具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的蛋白、或其具有免疫球蛋白结合活性的保守性变异蛋白。本发明还公开了该免...
- 潘卫蒋少华徐容贾建安沈毅珺杨华王锦红陈秋莉何俊陈璐
- 文献传递
- 噬菌体展示重组人淋巴毒素突变体库及受体亲和筛选
- 淋巴毒素(Lymphotoin,LT)通过TNFR1受体传递凋亡信号,从而发挥抗肿瘤活性.对LT的受体结合区域进行多点随机突变,利用噬菌体展示重组人淋巴毒素(rhLT)R46,S106,L130三点随机突变组合文库和S1...
- 沈毅珺潘卫许燕王征杨彤谭靖伟吴劲松吴芳曹峰刘彦君
- 关键词：淋巴毒素随机突变噬菌体展示抗肿瘤活性
- 文献传递
- 噬菌体展示重组人淋巴毒素突变体库及受体亲和筛选被引量：8
- 2005年
- 淋巴毒素(lymphotoxin,LT) 通过TNFR1受体传递凋亡信号,从而发挥抗肿瘤活性. 对LT的受体结合区域进行多点随机突变,利用噬菌体展示重组人淋巴毒素(rhLT) R46,S106,L130三点随机突变组合文库和S106～F110区域随机突变体库. 噬菌体库与固相化TNFR1受体进行亲和筛选,富集了能与TNFR1受体结合的rhLT突变体. 随机挑选20个单克隆噬菌体进行ELISA受体结合鉴定,其中80%的克隆与TNFR1受体特异性结合,有4个克隆与TNFR1受体的结合能力高于野生型序列的rhLT. 将这4个结合力高的突变体克隆于pET32a(+)载体,经过大肠杆菌表达和纯化操作后,检测这些突变体蛋白与TNFR1受体的结合活性和对L929细胞的杀伤活性,发现3个克隆的受体结合性质与其展示于噬菌体上时基本吻合,其中C199克隆与TNFR1的结合活性比野生型序列的rhLT提高了近30%,且其对L929细胞的杀伤活性提高了近90%. 应用噬菌体展示技术对淋巴毒素进行体外进化研究的尝试,为下一步的蛋白质结构和功能研究提供了思路,可成为大分子药物开发的有效工具.
- 沈毅珺潘卫许燕王征杨彤谭靖伟吴劲松吴芳曹峰刘彦君
- 关键词：淋巴毒素随机突变噬菌体展示
- 重组人淋巴毒素随机点突变组合文库的构建被引量：3
- 2004年
- 构建重组人淋巴毒素 (rhLT)随机点突变组合文库以进行体外分子进化及结构和功能的研究。应用含随机核苷酸序列的引物 ,通过OverlapPCR的方法分别对rhLT的 4 6、10 6和 130位氨基酸进行定点随机突变 ,获得各单点随机突变体库。通过基因操作将这三个单点随机突变体库拼接并克隆于pMD_18T载体建立三点组合突变体文库 ,DNA测序鉴定突变位点的随机性和多样性 ,原核表达该变异体库 ,体外测定生物学活性。成功获得rhLT三点随机点突变组合文库 ,其转化克隆数达到 1 5× 10 5,是多样性理论值的 4 5倍。 5 0个样品的序列分析显示各个位点的核苷酸和氨基酸序列的突变都呈随机性分布。对原核表达的 30个样品进行生物学活性测定 ,结果 70 % (2 1个 )的样品无活性、2 3 3% (7个 )的样品活性低于rhLT、6 7% (2个 )的样品活性高于rhLT。成功构建了rhLT随机点突变组合文库 ,该库不仅在一级结构上具有良好的随机性和多样性 ,而且具有生物学活性的多样性 ,为应用噬菌体展示等高通量筛选策略对淋巴毒素进行体外分子进化和结构与功能的深入研究打下了基础。
- 沈毅珺潘卫徐容潘欣王罗春王征曹峰谭靖伟吴劲松吴芳刘彦君
- 关键词：淋巴毒素随机突变分子进化点突变
- 一种进化免疫球蛋白结合分子、其制备方法及应用
- 本发明涉及新型进化免疫球蛋白结合分子、其制备方法及其应用。本发明公开了一种分离的进化免疫球蛋白结合分子，它是具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的蛋白、或其具有免疫球蛋白结合活性的保守性变异蛋白。本发明还公开了该免...
- 潘卫蒋少华徐容贾建安沈毅珺杨华王锦红陈秋莉何俊陈璐
- 文献传递
- 噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库的构建被引量：5
- 2005年
- 目的:构建由免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合的噬菌体展示文库,为应用各种类型免疫球蛋白对该文库进行体外分子进化筛选研究打下基础。方法:PCR扩增制备分别编码Protein A 的A、D结构域、Protein G的B2 结构域和Pro tein L的B3结构域的序列片段,片段两端引入XbaⅠ酶切位点,3′端引入分别编码0、1、2、3个氨基酸大小随机连接肽的序列,并克隆于pMD 18T载体构建重组质粒。以上述16种重组质粒为模板,PCR扩增分别制备各种单结构域片段及两端部分T载体序列,XbaⅠ酶切,各种酶切片段混合后连接,并克隆于噬菌体展示载体pCANTAB5S,构建噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库,挑取单克隆进行序列测定,评价文库的随机性。结果:噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库库容量为2×107,滴度为1.3×1011;文库中含77%以上的阳性克隆,其中由2个以上单结构域组成的阳性克隆占24%;序列分析显示组合文库包含上述4种单结构域序列,连接方式符合随机连接的特点,随机连接肽的编码核酸也呈随机分布。结论:成功构建了免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库,该文库库容、多样性和随机性完全可满足进行体外分子进化研究的要求。
- 杨华李连青王蓓霞徐容沈毅珺贾建安潘欣陈秋莉潘卫
- 关键词：噬菌体展示结构域
