汪才坤
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 供职机构：暨南大学生命科学技术学院广东省生物工程药物重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项广东省重大科技专项广东省战略性新兴产业核心技术攻关项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 悬浮培养昆虫细胞SF9瞬时表达重组蛋白的条件优化(英文)
- 2014年
- 瞬时基因表达(TGE)是一种省去筛选高表达细胞株步骤,快速获得重组蛋白质的技术。昆虫细胞作为一种广泛使用的蛋白表达系统,在国内外关于它的瞬时基因表达的研究比较少。这篇文章进行了以昆虫SF9细胞在悬浮培养条件下进行瞬时表达eGFP和肿瘤坏死因子受体融合蛋白(TNFR-Fc)的条件优化,以期为外源蛋白在昆虫细胞中瞬时表达打下基础。经优化后,转染效率达到37%,重组TNFR-Fc达到700μg/mL。
- 袁凤媚郭欣泳汪才坤卢加谢秋玲
- 关键词：质粒DNA聚乙烯亚胺转染绿色荧光蛋白
- CHO-DG44细胞瞬时转染条件的优化被引量：2
- 2013年
- 目的优化CHO-DG44细胞瞬时转染的条件。方法采用TubeSpin一次性生物反应器,以绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)为报告基因,氯醚酰亚胺(Polyether imide,PEI)为转染试剂,将质粒pIRESneo3-eGFP瞬时转染CHO-DG44细胞,优化瞬时转染的基本条件[细胞密度、DNA浓度和DNA:PEI比例(w/w)]以及其他条件(换液、渗透压和温度),采用优化的条件转染质粒pIRESneo3-eGFP,流式细胞术检测细胞转染效率,生物发光仪检测相对荧光强度。结果 CHO-DG44细胞瞬时转染的最佳条件为:采用XLG-P8培养基进行转染,细胞密度为2×106个/ml,DNA浓度为6.25μg/5 ml,DNA∶PEI(w/w)比例为1∶5;转染后4 h更换新鲜培养基,添加30 mmol/L NaCl,并于31℃继续培养。在此条件下,CHO-DG44细胞的瞬时转染效率可达81.45%,相对荧光强度可达9×105RFU/106cells。结论优化了CHO-DG44细胞瞬时转染的条件,为下一步药物蛋白的研发奠定了基础。
- 黎美香陈先金王晓慧王亚玉袁凤媚汪才坤谢秋玲
- 关键词：转染
- N-糖基化对TNFR-Fc融合蛋白结构稳定性和生物活性的影响被引量：3
- 2016年
- 目的:探究糖基化对TNFR-Fc融合蛋白结构、稳定性和生物活性的影响。方法:经N-糖酰胺酶F(PNGase F)切除TNFR-Fc融合蛋白所连的糖链,用SEC-HPLC、傅里叶变换红外光谱法和荧光光谱法等方法分析N-糖基化和去糖基化后重组蛋白的结构变化,通过加速稳定性实验和毛细管电泳检测对比其酶切前后稳定性变化,其生物活性的差异经细胞杀伤实验进行比较。结果:去糖基化后TNFR-Fc融合蛋白质分子质量略有降低,其构象、荷电性质及生物活性没有明显差异;然而切除N-糖链,TNFR-Fc二聚体的稳定性降低,蛋白质降解物明显增加。结论:去N-糖基化对TNFR-Fc的构象、荷电性质和生物活性的影响并不显著,但会影响TNFR-Fc融合蛋白的稳定性。
- 黄嘉慧汪才坤覃锦红陈龙冠黄云娜谢秋玲
- 关键词：糖基化去糖基化蛋白质构象
