江志钢
- 作品数：32 被引量：46H指数：3
- 供职机构：湖南师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- Pericardin蛋白的表达纯化以及多克隆抗体的制备
- 2012年
- Pericardin基因是果蝇心脏发育的标记基因,在果蝇心脏发育过程中起着重要的作用.从果蝇体内提取出总RNA,反转录得到果蝇的cDNA,将其作为模板.通过生物信息学分析,选择Pericardin基因抗原亲水区,选取特异性高的片段.将PCR片段克隆到原核表达pET28a(+)载体上,转入E.coli后通过IPTG(Isopropylβ-D-thiogal-actoside)诱导表达His融合蛋白,蛋白经分离纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.经Western Blot检测抗体的效价和特异性.结果显示,获得了Pericardin原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗Pericardin多克隆抗体,为Pericardin功能的进一步研究奠定了基础.
- 赵碧峰唐雄卓李发祥肖丽娜杨荣江志钢吴秀山王跃群
- 关键词：果蝇原核表达多克隆抗体
- POPDC基因家族调控心脏功能的进化
- 国际上对于POPDC家族研究已经有十几年历史,利用模式动物对POPDC家族的基因进行了功能的探索,发现果蝇POPDC1（Bves）基因导致胚胎生殖带延伸异常,斑马鱼POPDC2基因导致肌肉形态异常,颅面肌肉缺损,围心腔扩...
- 江志钢
- 关键词：心脏功能进化
- 文献传递
- 果蝇nulp1特异性多克隆抗体制备及检测被引量：6
- 2011年
- 为了利用果蝇模型研究nulp1蛋白在早期心脏发育中的功能,采用PCR技术扩增出果蝇nulp1基因的部分编码区并插入到pET28a表达载体中.之后将重组质粒转入大肠杆菌(E.coli)Rosetta(DE3);通过IPTG诱导表达His-nulp1融合蛋白,该融合蛋白采用Ni2+金属螯合层析纯化后,免疫新西兰兔制备了多克隆抗体,利用west-ern blot对抗体进行分析.结果表明获得了高效价的特异性兔抗f-nulp1多克隆抗体.这为进一步研究果蝇心脏发育的分子机制创造了条件.
- 龚琳王跃群袁婺洲莫小阳万永奇江志钢吴秀山李永青
- 关键词：果蝇原核表达多克隆抗体
- ZNF425基因抑制急性T淋巴细胞白血病细胞的凋亡被引量：3
- 2019年
- 为了解锌指(Zinc finger,ZNF)基因在癌症发生中的作用,利用生物信息学在CCLE数据库中分析得到ZNF425在白血病细胞系中存在高表达;在COSMIC和ICGC数据库中发现ZNF425在癌症患者的造血和淋巴组织中发生突变,并且表达存在差异。在急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞系瞬时过表达ZNF425,能抑制Jurkat细胞凋亡但Jurkat的细胞周期却不受影响,Western Blot检测发现过表达ZNF425导致ERK活化受到抑制。本研究结果首次揭示了ZNF425在血癌细胞中的功能,可能通过影响癌症细胞的凋亡调节癌症的发生。
- 朱双丽刘志强刘文邦江志钢林礼梁积峰陈宇王跃群范雄伟李淑均吴秀山
- 关键词：生物信息学细胞周期
- 植物提取物的特性及其在仔猪生产中的应用被引量：14
- 2010年
- 本文对植物提取物的特性及其对仔猪的生长性能、抗逆性、免疫性能和环境的影响进行了综述,并探讨了其可能的作用机理,旨在为植物提取物在仔猪生产中的应用提供理论依据。
- 易文凯黄兴国江志钢卢向阳
- 关键词：植物提取物仔猪免疫性能
- 甲醛溶液浸泡的人类组织样本基因组DNA的提取方法与质量鉴定
- 2022年
- 甲醛溶液浸泡的人类组织样本很多情况下是可遇不可求的珍贵资源,而其DNA的提取是一大难题。本文分别使用改进的甲醛溶液浸泡样本基因组DNA提取方法以及通用型基因组DNA提取试剂盒,对四份不同时间固定的福尔马林浸泡的人类胚胎皮肤和肌肉的样本进行基因组DNA提取。使用紫外分光光度计鉴定所提取DNA的纯度和质量浓度,DNA溶液点样进行琼脂糖凝胶电泳及成像,结果显示,改进的提取方法所得基因组DNA的质量浓度和纯度均优于通用型基因组DNA提取方法。以提取所得的基因组DNA模板进行PCR扩增,电泳结果显示,改进的提取方法所提取的基因组DNA有更好的PCR扩增效果。本研究为甲醛溶液浸泡的珍贵样本的基因组DNA的提取提供了方法指导和改进方向的参考。
- 杨博宇蔡毅孙鲁宁栾泽东庞文艳吴秀山范雄伟江志钢
- 关键词：DNA提取PCR检测琼脂糖凝胶电泳
- 利用DNA免疫技术制备SAX蛋白多克隆抗体被引量：4
- 2019年
- 骨形态发生蛋白(BMP)属于细胞因子和转化生长因子β(TGF-β)超家族,在胚胎形态发生和器官形成中起重要作用,但目前缺乏BMP信号通路I型受体SAX的各类抗体。本文利用果蝇胚胎提取出总RNA,反转录得到cDNA,将其作为模板通过PCR得到sax基因片段,将片段连接到pCAGGS-P7上,构建成重组质粒pCAGGS-P7-sax。采用质粒DNA免疫技术,免疫了BALB/C小鼠,制备了果蝇SAX蛋白多克隆抗体。进一步分析表明,构建的真核表达重组质粒pCAGGS-P7-saxDNA具有良好的免疫原性,在免疫小鼠后所获得的抗血清抗体效价达1∶100。Western blot和果蝇胚胎免疫荧光检测表明,抗血清能特异型地识别SAX蛋白。果蝇SAX抗体的成功制备为进一步研究sax基因及BMP信号在果蝇心脏发育中的作用奠定了基础。
- 查浩浩胡敏李玉玲丰琳江志钢
- 关键词：SAX免疫荧光
- 斑马鱼心脏发育候选基因Pygo1多克隆抗体的制备及检测被引量：2
- 2011年
- Pygo1是心脏发育候选基因,可能在斑马鱼心脏发育过程中起着重要的调控作用.利用生物信息学选择斑马鱼Pygo1基因抗原亲水区,将扩增出的PCR片段克隆到原核表达pGEMT-4T-1载体中,转入E.coli中后通过IPTG(Isopropylβ-D-thiogalactoside)分别诱导表达GST融合蛋白.蛋白经纯化分离后用于免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.用Western Blot检测抗体的效价和特异性.
- 唐雄卓江志钢赵碧峰李发祥谢华平邓云吴秀山
- 关键词：斑马鱼原核表达多克隆抗体
- 利用CRISPR/Cas9技术构建斑马鱼prkd1基因敲除品系被引量：1
- 2024年
- 蛋白激酶D1 (protein kinase D1, PKD1;也称作PRKD1)是蛋白激酶家族成员之一,该家族由3种结构相关的应激激活酶组成,可调节机体多种生物学功能,主要涉及细胞增殖、分化、凋亡、免疫调节、心脏收缩、血管生成和癌症等,其中PRKD1与心脏肥大、收缩和缺血再灌注损伤的底物磷酸化有关。相关研究报道,先天性心脏病患者存在PRKD1基因突变,但其在心脏中的特异性功能和分子机制并未阐明。为了便于后期研究PRKD1基因在人类早期心脏发育的作用机制,本文拟利用CRISPR/Cas9技术构建斑马鱼prkd1基因敲除品系。首先,通过生物信息学网站筛选出两个最佳的基因敲除靶位点,合成相应靶位点的单链向导RNA (single guide RNA,sg RNA)和引物;然后,将两个靶位点的sg RNA进行体外转录,并将其与Cas9蛋白混合后共同注射到斑马鱼的1-细胞期;最后,对基因敲除后的F0、F1、F2及F3代斑马鱼的胚胎和成鱼进行有效性鉴定及表型观察。结果显示,靶位点附近出现了不同程度的碱基缺失;成功构建了F1代能够稳定遗传的prkd1基因敲除的3个亚系;与野生型相比, F3代纯合子胚胎表现出不同程度的心腔膨大、环化异常及心管线性化等畸形现象。综上可知,本研究利用CRISPR/Cas9技术成功构建了斑马鱼prkd1基因敲除品系,为进一步研究该基因在人类心脏发育中的特异性功能提供了有益参考,并为后期的先天性心脏病筛查和精准医疗提供了重要依据。
- 吕丹陈宇谭志霞李永青李永青吴秀山江志钢
- 关键词：基因敲除
- 人类TMEM121基因的生物信息学分析
- 2020年
- 目的:以人类心肌特异性表达基因TMEM121为研究部对象,对其编码蛋白的结构和功能进行预测。方法:利用生物信息学方法对TMEM121蛋白的同源度、二级结构、互作蛋白及功能等进行预测分析。结果:TMEM121蛋白在进化上高度保守,与猩猩、绿猴、家猫、大鼠及小鼠等的同源度高达96%以上,主要二级结构是α螺旋,无信号肽,定位于内质网的可能性比较大,具有转运及信号转导等功能。结论:人类TMEM121基因可能作为转运和信号转导因子与其他蛋白共同作用参与成体心脏功能的调控。
- 徐伟周军媚叶湘漓江志钢李永青范雄伟吴秀山王跃群
- 关键词：生物信息学理化性质分子结构
