杨焕森
- 作品数：8 被引量：11H指数：2
- 供职机构：上海市肺科医院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项上海市科学技术委员会资助项目上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 一种结核分枝杆菌抗体结合肽及其应用
- 本发明属于医药技术领域，具体涉及一种结核分枝杆菌抗体结合肽及其应用。其氨基酸序列通式为：X<Sub>1</Sub>X<Sub>2</Sub>X<Sub>3</Sub>PPFS，其中P代表脯氨酸，F代表苯丙氨酸，S代表丝氨...
- 杨华胡忠义刘忠华秦莲花杨焕森
- 结核特异性抗体结合肽的筛选及其在结核病血清学检测中的应用研究
- 目的：利用纯化的结核病人血清IgG从噬菌体展示随机7肽库中筛选结核特异性抗体结合肽，为下一步开发新的结核病血清学检测方法提供思路。
方法：筛选策略一以12份结核病人混合纯化后的血清IgG作为固相配基，按吸附、洗脱、...
- 杨焕森
- 关键词：噬菌体展示结合肽结核病血清学检测
- 一种结核分枝杆菌的结合肽及其应用
- 本发明属于医药技术领域，具体为一种结核分枝杆菌的结合肽及其应用，该结合肽的氨基酸序列为：X<Sub>1</Sub>HX<Sub>2</Sub>GTX<Sub>3</Sub>H，其中H代表组氨酸，G代表甘氨酸，T代表苏氨酸...
- 杨华胡忠义张丽婷崔振玲王洁陆俊梅杨焕森
- 文献传递
- 一种结核分枝杆菌抗体结合肽及其应用
- 本发明属于医药技术领域，具体涉及一种结核分枝杆菌抗体结合肽及其应用。其氨基酸序列通式为：X<Sub>1</Sub>X<Sub>2</Sub>X<Sub>3</Sub>PPFS，其中P代表脯氨酸，F代表苯丙氨酸，S代表丝氨...
- 杨华胡忠义刘忠华秦莲花杨焕森
- 文献传递
- 结核分枝杆菌H37Rv结合肽的筛选研究被引量：9
- 2011年
- 目的应用噬菌体展示随机7肽文库，筛选MTB标准株H37Rv的结合肽，并初步鉴定其与MTB的结合能力。方法以H37Rv灭活菌体为靶分子，应用噬菌体展示随机7肽文库进行筛选，并于第2～4轮的筛选中加入耻垢分枝杆菌灭活菌体进行反筛，经4轮生物淘选后，随机选取单噬菌体进行测序，间接酶联免疫吸附测定（ELISA）法鉴定阳性克隆。将亲和性最强的阳性单噬菌体所展示的短肽进行体外合成及荧光标记，观察其与16种分枝杆菌标准株及3种非分枝杆菌（铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌）的结合活性。结果通过4轮生物淘选，能与靶分子特异性结合的噬菌体得到明显富集。单噬菌体测序分析共获得5种共同序列。间接ELISA检测出5个单噬菌体均为阳性克隆，其中单噬菌体H8与H37Rv及耻垢分枝杆菌的亲和性均较强。荧光显微镜下观察到，荧光标记H8可与H37Rv结合，与包括耻垢分枝杆菌在内的其他15种分枝杆菌有一定亲和力，而与3种非分枝杆菌均不结合。结论利用噬菌体展示随机肽库技术淘选可获得MTB标准株H37Rv的结合肽，与MTB的结合活性及特异度较高，这为以标记肽为基础探索新的MTB体外检测方法提供了思路。
- 杨华张丽婷李连青杨焕森刘忠华崔振玲王洁陆俊梅胡忠义
- 关键词：分枝杆菌结核肽库细菌噬菌体
- 结核特异性血清标志物的筛选研究
- 目的利用纯化的结核病人血清IgG从噬菌体展示随机七肽文库中筛选结核特异性血清标志物,为下一步开发新的结核病血清学检测试剂提供思路。方法以纯化后结核病人血清IgG作为固相配基,按吸附、洗脱、扩增的淘洗过程对噬菌体展示随机七...
- 杨华刘忠华杨焕森王洁沙巍胡忠义
- 关键词：结核病人健康人噬菌体展示结核患者人血清标志物
- 结核特异性抗体结合肽的筛选研究被引量：3
- 2011年
- 目的 利用纯化的结核病患者血清IgG从噬菌体展示随机7肽库中筛选结核特异性抗体结合肽,为下一步开发新的结核病血清学检测试剂提供思路.方法 以纯化后结核病患者血清IgG作为固相配基,按吸附、洗脱、扩增的生物淘洗（简称淘选）过程对噬菌体展示随机7肽库进行筛选,并于第2至3轮的筛选中加入纯化后健康人血清IgG进行反筛,经过3轮淘选使噬菌体得到富集,分别从滴度测定平板上各个方位挑取结核病患者IgG和健康人IgG洗脱单噬菌体各20个进行扩增纯化,提取单链DNA作为模板进行测序,间接ELISA法检测不同单噬菌体与结核病患者和健康人IgG的结合情况,鉴定出阳性克隆.取收集的47份结核病患者和37份有卡介苗接种史的健康人血清标本,采用phage-ELISA法对获得的阳性单噬菌体进行初步验证,并对其中24份筛选用血清标本的检测结果进行分别统计.结果 通过3轮淘选,能与靶分子特异性结合的噬菌体得到明显富集.单噬菌体测序分析共获得12种共同序列.12种序列各取1个克隆扩增后进行间接ELISA检测,结果表明单噬菌体H12与结核患者IgG具有较高的亲和力（S/N≥2.1）,确定为阳性克隆.间接ELISA检测发现,单噬菌体H12对47份结核病患者血清标本的检出值（0.105±0.010）明显高于对37份健康人的检出值（0.070±0.005）,t=2.912,P〈0.0001.对其中筛选用12份结核病患者和12份健康人血清标本的检出值分别为0.144±0.016、0.052±0.004,差异同样具有统计学意义（t=5.69,P〈0.0001）.结论 利用噬菌体展示随机肽库淘选获得了结核特异性抗体结合肽,显示出与结核病患者IgG较特异的结合活性,为以多肽为基础探索新的结核病血清学诊断方法提供了依据.
- 杨焕森胡忠义刘忠华王洁沙巍杨华
- 关键词：分枝杆菌结核肽库免疫测定C肽
- 结核分枝杆菌甲硫腺苷核苷酶的原核表达及活性分析
- 2012年
- 目的克隆、表达、鉴定结核分枝杆菌（MTB）Rv0091基因编码蛋白，分析酶活性，初步鉴定其功能。方法构建Rv0091基因原核表达质粒，在大肠杆菌BL21trxB进行表达，经IPTG诱导，Ni2＋-NTA柱纯化后获得可溶性蛋白，通过SDS-PAGE分析目的蛋白纯度、Westernblot进行免疫学活性鉴定、质谱分析重组蛋白相对分子质量、酶耦联法检测酶活性，分析酶学性质。结果成功构建Rv0091基因原核表达质粒，建立了可溶性蛋白最佳表达体系，获得纯度在95％以上的可溶性蛋白，Westernblot结果证实重组蛋白为结核分枝杆菌蛋白，质谱鉴定其相对分子质量与理论值基本一致，酶学活性实验证实重组蛋白能够分解底物5’一甲硫腺苷（MTA），酶学性质分析表明最适缓冲液为磷酸盐缓冲液和Hepes，酶的热稳定性较差，37℃为最适反应温度，最适pH为10～12。结论初步证明该重组蛋白在体外能够分解MTA，发挥甲硫腺苷核苷酶（MTAN）的作用，可能在MTB的代谢中起关键作用。
- 陈海珍杨华胡忠义杨焕森马慧高诗会郭琪柏文娟秦莲花李连青
- 关键词：结核分枝杆菌重组蛋白酶活性分析
