吴静 作品数:20 被引量:18 H指数:3 供职机构: 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 Problem Solving for Better Health 上海市科学技术委员会科研基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 天文地球 更多>>
应用温度敏感型培养皿获得尿道下裂患儿尿源性细胞膜片的研究 被引量:1 2012年 目的探讨通过Nunc Upcell温度敏感型培养皿获得尿道下裂患儿尿源性细胞膜片的可行性。方法排尿时,对尿道下裂患儿尿源性细胞进行收集和原代培养,传代后计数细胞并绘制生长曲线,观察细胞形态学特征,RT-PCR、细胞免疫荧光染色鉴定尿源性细胞特异mRNA及蛋白表达情况;将尿道下裂患儿尿源性细胞转移入Thermo公司的Nunc Upcell中,根据温度的变化获得该细胞的细胞膜片。结果镜下观察和生长曲线图显示:尿道下裂患儿来源的尿源性细胞具有与正常人的尿源性细胞类似的体外增殖能力,培养至第十代生长仍很旺盛,可以达到10^9个细胞,能够满足组织工程所需要的细胞数量;2组细胞具有类似的群体倍增时间;RT-PCR和细胞免疫荧光染色显示这2组尿源性细胞均表达尿道上皮细胞和平滑肌细胞表面标志物;利用NuncUpcell温度敏感型培养皿可以转移得到完整的细胞膜片,且转移后的细胞仍保持旺盛的增殖能力。结论尿道下裂患儿来源的尿源性细胞可在体外大量增殖,可作为一种新型的种子细胞用于泌尿系统组织工程;结合使用新型的NuncUpcell温度敏感型细胞培养皿,可获得尿道下裂患儿尿源性来源细胞的细胞膜片,为将来进行尿道缺损修复的动物及临床试验奠定了良好基础。 王雪 周君梅 张胜利 余玲 顾怡珺 吴静 张明庆 陈方关键词:细胞培养 CARM1维持羊水干细胞干性的机制 2016年 背景:研究表明,CARM1催化的组蛋白H3R17/R26的甲基化修饰对于胚胎干细胞干性的维持起着非常重要的作用,但其在羊水干细胞干性维持中的作用及机制目前尚不明确。目的:初步探讨CARM1在维持羊水干细胞干性中的作用及其分子机制。方法:分离、培养人妊娠晚期羊水干细胞,RT-PCR鉴定干细胞标志物及CARM1基因的表达。利用CARM1的两条shR NA慢病毒表达载体,沉默羊水干细胞中CARM1基因的表达。RT-qP CR检测CARM1基因的表达沉默效率,Western blot检测组蛋白H3R17的甲基化水平。RT-qP CR检测干细胞标志物OCT4,SOX2和NANOG基因的表达水平。结果与结论:(1)人妊娠晚期羊水干细胞能够表达干细胞标志物,包括OCT4、SOX2、Nanog和KLF4,并表达CARM1基因;(2)CARM1的两条shR NA均能够有效沉默CARM1基因的表达;(3)CARM1表达沉默后,羊水干细胞中组蛋白H3R17的甲基化水平降低,OCT4和SOX2的表达也降低,而NANOG的表达没有发生变化;(4)结果表明,CARM1可能通过调控OCT4和SOX2基因的表达,进而起到维持羊水干细胞干性的作用。 吴静 赵利华关键词:妊娠末期 慢病毒感染 甲基化 慢病毒 OCT4 SOX2 干性 HBD1对新生儿脐带血CD4^+T淋巴细胞活化和增殖的研究 被引量:1 2017年 本文探讨了HBD1对脐血CD4^+T细胞的增殖、细胞表面分子CD69、CD25、CD40L和CD45RO的表达及B细胞CD80、CD86分子表达的影响,并以成人外周血CD4^+T细胞作对照。采用CCK-8增殖实验检测CD4^+T细胞的增殖情况,采用流式细胞术检测CD80、CD86、CD69、CD25、CD45RO和CD40L的表达情况。结果表明:HBD1促进了脐血CD4^+T细胞的增殖,CD69、CD25、CD40L表达上调;B细胞CD80、CD86的表达也上调,但并未促进CD45RO表达的上调。而相同处理条件下,HBD1对成人外周血CD4^+T细胞作用不明显,提示HBD1对脐血来源CD4^+T细胞具有一定的免疫调节作用。 胡庆丰 吴静 张晨星 陈同辛关键词:脐血 CD4+T细胞 增殖 HBD1对新生儿脐带血树突状细胞免疫调节作用的研究 目的 :人b-防御素1(HBD1)是一种抗菌肽,广泛存在于人体中。我们之前的研究表明中国人母乳中含有一定浓度的HBD1,且高浓度的HBD1可降低6个月内婴儿上呼吸道感染的发生率,提示HBD1能够保护婴儿免于感染,然而其作... 吴静 陈同辛关键词:脐带血 树突状细胞 免疫调节 文献传递 我院生物样本库“一病一卡”管理制度的建立与应用 被引量:5 2013年 当今,转化医学已广受关注并进入迅猛发展的时期。而医学标准化、高质量的人类疾病生物样本库是极其珍贵的资源,是基础与临床研究的源头,是实现转化医学的核心环节。我国政府虽十分重视生物样本库的建设,但目前其尚处于初创阶段,各家样本库大多存在管理混乱、缺乏标准化操作流程等问题。如何解决这些问题,并进一步对样本库进行规范化建设和管理,至关重要。我院于2011年底开始筹建生物样本库,同时开始建立相关标准化管理制度和技术规范。我院为综合性儿童医院,各系统病种繁多,样本的采集几乎涉及每一个临床科室。为了从源头上保证样本的质量,我们在样本的采集阶段建立了“一病一卡”的管理制度,保证了样本采集、运送和接收过程的科学化和标准化。试用近1年来,反响颇佳,现总结如下。一、“一病一卡” 吴静 顾怡珺 周君梅关键词:生物样本 人类疾病 酵母发酵物和接骨木莓对氧化应激诱导的巨噬细胞衰老的影响机制研究 2025年 目的探究酵母发酵物(YF)和接骨木莓(EB)对氧化应激诱导的巨噬细胞衰老的影响和分子机制。方法利用H_(2)O_(2)处理RAW2647巨噬细胞构建衰老模型,通过检测b-半乳糖苷酶(SA-b-Gal)活性、衰老相关蛋白P16、P21和P53表达以及衰老相关分泌表型(SASP),评估YF、EB单独或联合处理(YFEB)对巨噬细胞衰老的保护作用。采用SeahorseXF细胞能量代谢分析系统检测上述物质对细胞线粒体呼吸(OCR)和糖酵解(ECAR)的影响,比色法检测细胞内乳酸含量,Western blot法检测组蛋白不同赖氨酸位点上的乳酸化修饰水平。RNA-seq与ChIP-seq联合分析鉴定H3K18la修饰调控的靶基因,并进行验证。结果YF、EB及YFEB预处理均能显著减弱H_(2)O_(2)诱导的巨噬细胞衰老表型,包括SA-b-Gal活性增强、衰老相关蛋白P16、P21和P53表达上调以及SASP因子(IL-6、IL-1b、CXCL-1和CXCL-3)分泌增加。H_(2)O_(2)处理导致细胞ECAR水平升高、OCR水平下降,并促进胞内乳酸累积和H3K18la修饰水平显著上升。YF、EB及YFEB处理均能有效逆转上述代谢异常,显著下调乳酸生成和H3K18la修饰水平。RNA-seq与ChIP-seq联合分析鉴定出1630个受H3K18la调控的靶基因,其中E2F转录因子2(E2f2)是受其调控的关键基因。YF、EB及YFEB处理均能显著恢复H_(2)O_(2)处理所致的E2f2表达下调;抑制E2f2表达后,YFEB对SA-b-Gal活性和P16、P21、P53表达的抑制作用则被显著减弱。结论YFEB通过调控H3K18la修饰促进E2f2基因表达,从而抑制氧化应激诱导的巨噬细胞衰老。 翁楠 沈楠 李俊阳 江木秀 陶悦 吴静关键词:表观遗传学 中国大陆AD-HIES患儿临床表现、基因及B细胞表型分析 目的 高IgE综合征(HIES)是一种以血浆IgE水平极度增高为主要特征的原发性免疫缺陷病.STAT3是目前已知的唯一可导致常染色体显性遗传HIES (AD-HIES)的基因,其负显性突变可导致AD-HIES.本研究旨在... 陈同辛 吴静四种常见原发性免疫缺陷病的临床感染和皮肤表现 被引量:4 2019年 目的:分析4种原发性免疫缺陷病(primary immunodeficiency disease, PID)的临床感染情况和皮肤特征,帮助皮肤科医师早期识别并诊断这4种疾病。方法:回顾性分析2003年1月至2016年7月在我院确诊的87例年龄为1个月~15岁的PID患者的临床感染情况和皮肤特征性表现,其中36例为慢性肉芽肿病(chronic granulomatous disease, CGD),14例为高IgE综合征(hyper-IgE syndrome, HIES),22例为严重联合免疫缺陷病(severe combined immunodeficiency,SCID),15例为Wiskott-Aldrich综合征(Wiskott-Aldrich syndrome, WAS)。结果:87例经临床和基因诊断确诊为PID的患者中,男性为79例,女性为8例,其临床感染情况主要为呼吸道感染(82.76%)、器官脓肿(52.87%)、胃肠道感染(48.28%)、脓毒血症(25.29%)、EB病毒或巨细胞病毒感染(6.90%)。PID患者的皮肤表现主要为早期反复出现的皮肤感染(51.72%),其中细菌感染发生率为42.53%,真菌感染发生率为32.18%,此外还表现为湿疹样(42.53%)、皮肤紫癜(17.24%)等其他一些特征性表现。CGD以早期反复出现的皮肤细菌感染为主,出生不久即有顽固的湿疹和皮肤感染是HIES的主要皮肤表现,SCID则以皮肤黏膜的机会性感染较常见,WAS以皮肤瘀点瘀斑和湿疹表现为主。结论:感染是PID患者的共同特征,而皮肤感染往往是早期识别免疫缺陷的重要临床表现,应予以重视。 刘晓依 陈琢 吴静 金莹莹 陈同辛 陈戟关键词:原发性免疫缺陷病 慢性肉芽肿病 高IGE综合征 严重联合免疫缺陷病 皮肤表现 ELISA检测母乳乳凝集素含量的方法学研究 2020年 为解决母乳中乳凝集素水平的检测难题,促进母乳研究和相关产品的开发应用,选取上海市浦南医院行足月顺产或剖宫产术的产妇成熟乳40例,用na6ve lysis buffer对母乳进行裂解,并采用Western blotting和ELISA对母乳裂解前后不同组分中乳凝集素的水平进行检测。Western blotting结果显示,全乳裂解液(na6ve lysis of whole breast milk, NLWB)组和全乳对照(whole breast milk, WB)组乳凝集素的含量显著高于乳清对照(whey, Why)组(P<0.05),NLWB沉淀(precipitation of NLWB, PNLWB)组中的乳凝集素几乎检测不到。ELISA结果显示,WB组乳凝集素水平[(28.58±12.98)mg/L]显著高于Why组[(6.34±4.58)mg/L](P<0.01);NLWB组乳凝集素水平[(51.91±15.52)mg/L]与NLWB上清(supernatant of NLWB,SNLWB)组[(53.55±26.09)mg/L]比较,差异无统计学意义(P=0.832 4);NLWB组乳凝集素水平[(49.38±20.93)mg/L]显著高于WB组[(42.19±18.18)mg/L](P<0.000 1)。提示使用na6ve lysis buffer对母乳进行裂解可有效提高ELISA检测母乳中乳凝集素的效率。 李悦 吴静 陈同辛关键词:乳凝集素 酶联免疫吸附试验 一种评估SLE患儿总体疾病活动度和肾脏疾病活动度的检测方法及其应用 本发明属于生物医学检验领域,具体涉及一种评估SLE患儿总体疾病活动度和肾脏疾病活动度的检测方法及其应用。本发明首次在SLE患儿血浆中筛选出IP‑10这一细胞因子,通过检测血浆中IP‑10水平,不仅能很好的区分疾病活动性S... 陈同辛 张晨星 吴静文献传递